纤维蛋白平板法测定纳豆激酶方法的改进

对利用琼脂糖-纤维蛋白平板法测定纳豆激酶活力的方法进行了改进,对测定纳豆激酶活力的标准曲线的规律进行了研究。研究发现,当尿激酶活力在200U/mL～10000U/mL时,尿激酶活力的常用对数lgU与对应的溶圈面积S呈线性相关,其表达式的斜率与孵育时间、孵育温度和平板厚度有关。通过试验确定了测定纳豆激酶活力的最佳孵育时间为15h,此时的酶活测定标准曲线为:lgU=0.0052S+b,b值的确定方法为:将2种标准尿激酶液的酶活力和对应的溶圈面积分别带入标准曲线lgU=0.0052S+b中,分别求出其对应的修正系数b1、b2,以b=b1+2b2为标准曲线lgU=0.0052S+b的修正系数,利用此法计算酶活力的相对误差为0.22%。

薄层聚丙烯酰胺纤维蛋白平板法对纤溶酶活性的体外检测

用薄层聚丙烯酰胺纤维蛋白平板法体外检测了6种市售心血管药物的纤溶酶活性,结果与所检测药物的相关药理作用相符,表明薄层聚丙烯酰胺纤维蛋白平板法能够准确、可靠地进行纤溶酶活性的体外检测.

一种检测凝血酶、类凝血酶的新方法——纤维蛋白原平板法

目的:创建一种定量检测凝血酶(Thrombin)、类凝血酶(Thrombin-likeenzymes)活性的新方法——纤维蛋白原平板法。方法:采用纤维蛋白原作为底物,用琼脂糖与纤维蛋白原制作成纤维蛋白原平板,以凝血酶、类凝血酶标准品分别在该平板上的扩散反应,制作相应的标准曲线及回归曲线,并对凝血酶、类凝血酶活性作定量测定。结果:本法制作的凝血酶、类凝血酶检测标准曲线具有良好的线性关系(r=0.9994、r=0.9997)。结论:纤维蛋白原平板法可用于凝血酶、类凝血酶定量测定。具有操作简便、直观、稳定、敏感度高,不受检品浊度或颜色干扰且成本低廉等特点。

大孔吸附树脂提取中药地龙中蚓纤维蛋白溶酶的研究

为研究大孔吸附树脂提取中药地龙中蚓纤维蛋白溶酶,通过对 6种树脂的吸附容量,吸附平衡时间,洗脱液等条件进行考察,筛选出了D4020和D3520两种分离效果较好的树脂。

一种改良的纤维平板法

介绍一种改良的用以快速地定性和半定量检测纤溶活性蛋白的纤维平板法.对该方法中的几个关键因素作了详细的研究和探讨.纤维平板中纤维蛋白原和纤溶酶原的浓度对裂解面积不产生任何影响,但是纤维蛋白原的浓度会对裂解圈的观察产生影响,纤维蛋白原浓度低于0.2 mg/mL时会使背景色过淡而不能清晰地观察到裂解圈.尿激酶浓度在2～250 mU/μL范围时,尿激酶浓度的对数和裂解圈相互垂直的两条直径乘积的对数之间存在明显的线性关系.在本实验设计方案下,尿激酶的最佳使用浓度为10～20 mU/μL.同时,本文还探讨了纤维平板中纤溶酶原的去活条件,当琼脂纤维平板凝固后很难完全去活纤溶酶原,但是,在琼脂纤维蛋白原混合物凝固前于95℃持续温浴40 min,则能彻底去活纤维蛋白原中残留的纤溶酶原.

纤维蛋白平板法测定保健食品中纳豆激酶活力

目的:采用适宜方法,测定保健食品中的纳豆激酶活力。方法:应用纤维蛋白平板法,测定保健食品中的纳豆激酶活力。结果:在20 IU/ml～100 IU/ml浓度范围内,尿激酶活力与透明圈面积呈线性关系,且精密度与准确度良好,变异系数小于10%,加标回收率为94%。结论:纤维蛋白平板法适宜测定保健食品中纳豆激酶活力,方法简便、实用。并讨论了一些改进措施及注意事项。

两种纳豆激酶活性测定方法对比及相关性分析

从线性和精密度两个方面对纤维蛋白平板法和四肽底物法测定纳豆激酶活性的两种方法进行了比较研究,并验证了两种方法测定值之间的直线相关性。结果表明:纤维蛋白平板法和四肽底物法分别在10.77IU/mL～80.73IU/mL和0.03U/mL～0.09U/mL浓度范围内呈线性,且日间和日内变异系数均小于10%。两者结果具有直线相关性,其关系为纤维蛋白平板法测定值(IU)=264.87×四肽底物法测定值(U)-19.633,(R2=0.9942)。结论:纤维蛋白平板法与四肽底物法均能用于纳豆激酶活性测定,前者测定结果直接,但四肽底物法更灵敏,还可应用于高通量筛选。

纳豆激酶活性测定方法的比较

纳豆激酶是由纳豆芽孢杆菌经发酵产生的一种丝氨酸蛋白酶,可用于溶栓药物的开发。本文比较了两种测定纳豆激酶活性方法:琼脂糖——纤维蛋白平板法和枯草杆菌蛋白酶活力测定方法,为快速、准确地标示纳豆激酶的效价提供技术支撑。

赤爱胜蚯蚓（Eiseniba Foetida Sarigng）纤溶酶的研究──■蚯蚓纤溶酶活性测定方法的研究

本文主要阐述了蚯蚓纤溶酶活性（效价）的测定方法的研究结果。通过对气泡上升法，精氨酸脂酶法（ＴＡＭＥ法）和纤维蛋白平板法测定蚯蚓纤溶酶活性的比较，最后认为纤维蛋白平板法能够客观地表示出纤溶酶溶解血栓的能力，虽然方法较为复杂，难度较大，但准确性强，结果可靠。ＴＡＭＥ法由于受样品中混有杂蛋白酶其稳定性受到一定的影响，但此法简便易行可作为中间产品的快速检测。文中详细地介绍了纤维蛋白平板法。

tPA体外纤溶活性及半定量检测方法的确立

在原有的纤维蛋白平板溶圈法 (fibrin agarose plate assay,FAPA)检测系统中引入纤溶酶原 (plasminogen) ,使该法检测组织型纤溶酶原激活剂 (tissue plasminogen activator,t- PA)的灵敏度提高 30倍以上 ,达到 0 .0 1ng(约0 .0 0 1IU )水平 ;并对不同反应时间、纤维蛋白含量、琼脂糖凝胶厚度下的溶圈结果进行对比研究。结果表明 ,37℃温育18～ 2 4h可以得到较满意结果 ;其他因素虽不同程度地影响溶圈出现时间及大小 ,但对其溶圈梯度及标准曲线无明显影响。从而确立了以 FAPA为基础的快速、灵敏、可靠的重组 t- PA体外纤溶活性半定量检测方法。

基于分光光度法构建纳豆激酶纤溶活性快速测定方法

为建立一种快捷、有效的纳豆激酶纤溶活性测定方法,在研究纤维蛋白平板法的基础上,构建了以透明圈面积为中间参数的纳豆激酶纤溶活力与吸光度值之间关系模型,通过测定纳豆激酶显色反应中的吸光度值,直接获得纳豆激酶的纤溶活性。结果显示改进后的酪蛋白方法可行,其模型方程为y=1877.77x-481.08(R2=0.9924)。验证结果显示模型相关性强,准确度较高,操作简便、快速、检测成本低,是一种高效的纳豆激酶纤溶活性快速检测方法。

响应面法优化固载纳豆菌发酵鹰嘴豆工艺

采用响应面法确定固载纳豆菌发酵鹰嘴豆的最佳工艺条件,为发酵鹰嘴豆的进一步开发利用提供技术参考。在单因素试验的基础上,以pH值、发酵时间和发酵温度为影响因素,以发酵鹰嘴豆的溶栓活力为响应值,根据中心组合试验原理设计(Central Composite Design)3因素3水平响应面试验,对固载纳豆菌发酵鹰嘴豆的工艺进行优化。通过响应面分析建立发酵鹰嘴豆溶栓活力(Y)对pH值(A)、发酵时间(B)、发酵温度(C)的二次回归模型:Y=1861.47-74.56A+305.50B-28.82C+203.66AB+30.82AC-18.16BC-244.11A^2-203.68B2-70.64C^2(R^2=0.9981),模型的拟合程度良好,其中pH值、发酵时间、发酵温度对发酵鹰嘴豆的溶栓活力均有极显著的影响(P<0.01),pH值与发酵时间的交互作用对发酵鹰嘴豆的溶栓活力也有极显著的影响(P<0.01),pH值与发酵温度的交互作用对发酵鹰嘴豆的溶栓活力则表现出显著的影响(P<0.05)。固载纳豆菌发酵鹰嘴豆的最佳工艺条件为:在pH 6.5、发酵时间58.5h、发酵温度37.5℃的条件下进行发酵,得到的发酵鹰嘴豆的溶栓活力达1976.24IU/g,与理论预测值1989.13IU/g接近。采用响应面法优化固载纳豆菌发酵鹰嘴豆工艺溶栓活力良好,优化后的新工艺可在实际生产中推广应用,并作为新型溶栓保健功能食品大规模在市场上推广。

纳豆激酶活性测定方法

对先后建立的纤维平板法等几种测定纳豆激酶活性的方法进行概括总结介绍。

用Folin-酚试剂法测定双胸蚓溶栓酶活性

蚯蚓溶栓酶活性测定,目前国内多采用纤维蛋白平板法。该法虽能比较溶栓酶对底物纤维蛋白溶解情况,但作为定量检查,人为误差较大,且很难摸准正比线性范围。以酪蛋白为底物紫外法,操作虽简便,但测定蛋白灵敏度较低。本文以酪蛋白为底物对双胸蚓溶栓酶(bimastos throm-bolytic enzyme,BTE)的研究完全符合酶反应动力学。

溶菌酶测定方法的研究进展

溶菌酶是一种作用于微生物细胞壁的小分子碱性蛋白酶,英国细菌学家Fleming于1922年首次在人的唾液、眼泪中发现。溶菌酶主要通过破坏细胞壁中的N-乙酰胞壁酸和N-乙酰葡萄糖胺之间的β-1,4糖苷键,破坏肽聚糖支架,在内部渗透压的作用下使细胞膜破裂而导致细菌溶解死亡。

活血通脉胶囊抗凝血酶活性生物效价测定法的建立

目的建立活血通脉胶囊抗凝血酶活性生物效价测定方法,用于评价和控制其质量。方法分别对Markwardt法、纤维蛋白原平板法(沉淀法)测定水蛭和活血通脉胶囊的生物效价进行比较研究;选择琼脂糖-纤维蛋白原平板法(沉淀法)作为活血通脉胶囊生物效价测定方法,考察试验系,并进行了方法学验证。结果琼脂糖-纤维蛋白原平板法(沉淀法)测定水蛭和活血通脉胶囊抗凝血酶生物效价的中间精密度RSD分别为3.5%、5.2%,优于Markwardt法(RSD分别为15.6%、12.9%)。本法的线性范围为5 BP^20 BP(R2=0.994),回收率为98.26%,RSD 2.3%(n=6),中间精密度RSD 3.2%,重复性RSD 4.7%。结论琼脂糖-纤维蛋白原平板法(沉淀法)可用于活血通脉胶囊中抗凝血酶活性生物效价的测定,以评价和控制其生物质量。

人血清白蛋白修饰的尿激酶与天然尿激酶的家兔体内过程比较

家兔静注人血清白蛋白修饰的尿激酶(MUK)和天然尿激酶(NUK)40000IU后,MUK 的体内过程符合零级速率过程,NUK 则符合一级速率过程,血纤溶活性 MUK 持续100min,而 NUK 仅20~25min。在“功能性”去除肝肾的家兔,NUK 血浓度半衰期延长3~4倍,而 MUK 血浓度下降与正常家兔相似。MUK 及 NUK 在去除纤溶抑制物的优球蛋白成份中纤溶活性相似,但在血浆中 NUK 仅存24~35%的纤溶活性,MUK 则保留了64~85%的纤溶活性。提示肝肾的摄取、代谢和消除能力降低及对血浆纤溶抑制物抵抗力增强,是 MUK 血纤溶活性长时间维持高水平的主要原因。

基于蛋白酶活力的地龙酒制工艺优选

目的优化地龙酒制工艺。方法采用纤维蛋白平板法检测酶活力;以炮制温度、炮制时间、加酒量和焖润时间为考察因素,以蚯蚓纤溶酶活力为考察指标,采用L_(9)(3^(4))正交试验法优选地龙酒制工艺参数。结果每100kg地龙,加黄酒12.5kg拌匀,焖润30min,70℃翻炒2min时,其酶活力最高(每克31.8万单位)。结论该炮制工艺稳定、可行,可用于地龙的酒制。

基于纤溶活性的沪地龙基原间质量评价

目的建立沪地龙药材水溶性成分的纤溶活性测定方法并对基原间差异进行比较。方法应用纤维蛋白平板法,以蚓激酶作为对照品,对纤溶活性进行测定,应用单因素方差分析法比较基原间纤溶活性差异。结果通俗环毛蚓生物活性效价范围为14446.65~234300.20 U/g;威廉环毛蚓活性范围为11037.15~157912.53 U/g;栉盲环毛蚓的活性范围为35319.22~89332.06 U/g。单因素方差分析结果,F值为0.005,显著性结果为0.995(P>0.05),表明沪地龙3个基原间水溶性成分的纤溶活性差异无统计学意义。结论沪地龙3个基原水溶性成分的纤溶活性具有一致性。纤溶活性能与沪地龙通络功效相关联,可作为质量评价指标,为沪地龙质量评价建立指标提供参考。