高效毛细管电泳法检测尿液中痕量纤维蛋白肽A、B

目的建立高效毛细管电泳测定尿液中反应体内微血栓形成的特异分子标志物纤维蛋白肽A(FPA)和纤维蛋白肽B(FPB)的方法。方法采用25cm×50μm涂层毛细管柱,0.1mol/LpH2.5的磷酸缓冲液,27.58kPa压力进样,190nm紫外检测。用比FPB多一个酪氨酸的合成肽(FPB-Tyr)作内标,加内标后的尿样用Sep-PakC18柱预处理。结果采用本法,尿样中的FPA、FPB和内标可在16min内得到很好的分离,三者的迁移时间分别为:7.28、14.31、15.22min;将内标和一系列浓度的FPA、FPB标准品加入空白尿样,用Sep-PakC18柱预处理后,毛细管电泳进样分析,在FPA和FPB浓度为0～40mg/L的范围内,用FPA(FPB)同内标的校正峰面积比值对添加的相应的FPA(FPB)浓度得到校正工作曲线,线性关系良好,R均>0.99。未预处理的尿样中FPA、FPB的最低检出浓度分别为30μg/L、40μg/L(信噪比为3∶1);本法FPA和FPB测定的日内、日间精密度好,平均回收率高。结论本方法可靠,特异性好,可为开展纤维蛋白肽类及其它的痕量肽类分析提供参考。

纤维蛋白肽Bβ15～42对大鼠缺血再灌注损伤肾脏局部炎性反应的影响

目的观察纤维蛋白肽Bβ15—42（the fibrin—derivedpe ptide Bβ15-42，FgBβ15～42肽）对大鼠肾脏缺血再灌注损伤（IRI）后肾脏局部炎性反应的影响并探讨其机制。方法将SD大鼠随机分成假手术组（Sham组）、IRI组、阴性治疗组和FgBβ15～42肽治疗组。Sham组：分离肾动脉后关闭腹腔；IRI组：采用双侧肾动脉夹闭的方法制作肾脏IRI模型；阴性治疗组：于肾脏再灌注后立即尾静脉注射随机肽段3．6mg／kg；FgBβ15～42肽治疗组：于肾脏再灌注后立即尾静脉注射FgBβ15～42肽3．6mg／kg。后3组按照再灌注24h、48h分为两个亚组，Sham组与各亚组均为8只大鼠。常规生化法检测肾功能；HE、PAS染色观察肾脏组织学改变；免疫组化、实时荧光定量PCR法及Western印迹检测肾组织白细胞介素1β（IL-1β）、细胞间黏附分子1（ICAM-1）的mRNA及蛋白表达。结果与Sham组相比，IRI组的Scr和BUN水平均显著增加（均P〈0．05），肾小管及间质病理损伤显著，以再灌注48h更为明显；与IRI组相比，FgBβ15～42肽治疗组Scr和BUN显著下降（均P〈0．05），小管间质损伤程度明显减轻（P〈0．05）。与Sham组相比，IRI组IL-1β和ICAM-1的mRNA和蛋白水平于再灌注24h显著上升，48h稍微下降，但仍维持在较高水平；FgBβ15～42肽治疗组大鼠肾组织IL-1B和ICAM-1的表达于再灌注24h、48h显著低于同时间点的IRI组（均P〈0．05），但仍明显高于Sham组。上述各指标在阴性治疗组和IRI组之间的表达差异无统计学意义。结论FgBβ15～42肽对肾脏IRI具有保护作用，其作用机制可能与其减少炎性因子IL-1β、黏附分子ICAM-1的表达有关。

纤维蛋白原Bβ15-42肽对大鼠肾脏缺血再灌注损伤凋亡及相关蛋白的影响

目的:观察纤维蛋白原Bβ_(1)5-42肽(fibrinogen-derived peptide Bβ_(1)5-42,FgBβ_(1)5-42)对大鼠肾脏缺血再灌注损伤(ischemia-reperfusion injury,IRI)凋亡及相关蛋白的影响。方法:将24只SD大鼠随机分成假手术组(Sham组)、肾脏缺血再灌注模型组(I/R组)、FgBβ_(1)5-42肽治疗组(Fg+I/R组),每组8只。Sham组:分离肾动脉后关闭腹腔;I/R组:采用双侧肾动脉夹闭的方法制作肾脏IRI模型;Fg+I/R组:于肾脏缺血30 min后立即尾静脉注射FgBβ_(1)5-42肽3.6 mg/kg。采用血肌酐测定试剂盒和尿素氮测定试剂盒分别检测血清中肌酐(Scr)和尿素氮(BUN)水平;HE染色观察肾组织病理变化,并半定量分析肾组织病理损伤程度;TUNEL凋亡试剂盒检测肾组织细胞凋亡;Western blot检测肾组织Bcl-2、Caspase-3、Bax蛋白表达。结果:与Sham组比较,I/R组Scr、BUN增加(P<0.05);肾小管上皮细胞水肿、肾小管管腔变小、刷状缘消失、部分上皮细胞脱落,间质可见炎症细胞浸润,肾损伤评分高(P<0.05);肾组织细胞凋亡率增加(P<0.05);Caspase-3、Bax蛋白表达增加、Bcl-2蛋白表达减少(P<0.05)。与I/R组比较,Fg+I/R组Scr、BUN降低(P<0.05);肾组织病理学变化减轻,损伤评分降低(P<0.05);Caspase-3、Bax蛋白表达减少,Bcl-2蛋白表达增加(P<0.05)。结论:FgBβ_(1)5-42肽可能通过抑制细胞凋亡参与肾脏IRI保护作用。

PCI术前后FPA、FPB的变化及其与冠状动脉慢血流、无复流的关系研究

目的研究经皮冠状动脉介入治疗(percutaneous coronary intervention,PCI)术前后血纤维蛋白肽A(FPA)、纤维蛋白肽B(FPB)的变化并寻找其与冠状动脉慢血流、无复流现象的关系。方法选取2017年12月—2018年12月就诊于佳木斯大学附属第一医院,以急性冠脉综合征收入院后行择期PCI术患者。选取术中出现慢血流及无复流者18例为试验组,选取正常血流者39例为对照组。测定PCI术前后血FPA、FPB值进行分析。结果①对照组血FPA、FPB术前与术后比较差异无统计学意义(P>0.05),试验组血FPA、FPB水平术前与术后比较差异有统计学意义(P <0.001)。两组患者组间术前比较血FPA、FPB差异无统计学意义(P>0.05),组间术后血FPA、FPB比较差异有统计学意义(P <0.05)。结论试验组患者术后血FPA、FPB明显升高,考虑在手术过程中可能有FPA、FPB参与的凝血系统激活,导致微血栓形成,参与了慢血流、无复流现象的发生。

肾综合征出血热患者DIC评分与F1+2、FPA、FPB的相关性分析

目的分析肾综合征出血热患者弥散性血管内凝血(DIC)评分与人凝血酶原片段F1+2(F1+2)、纤维蛋白肽A(FPA)、FPB的相关性。方法选取2017年1月-2018年12月西安交通大学附属西安市第八医院感染性疾病科收治肾综合征出血热患者60例,依据DIC评分高低分为A组(DIC评分4~6分,n=19)、B组(DIC评分7~9分,n=27)、C组(DIC评分10~12分,n=14)。观察3组患者发热期、低血压休克期、少尿期、多尿期、恢复期的F1+2、FPA、FPB差异,同时分析DIC评分与5个时期F1+2、FPA、FPB的相关性。结果 A组、B组、C组不同时期血清中F1+2、FPA、FPB均依次增高(F/P=10.835/0.000、14.968/0.000、26.983/0.000、3.737/0.030、6.219/0.004,27.183/0.000、38.867/0.000、38.007/0.000、8.157/0.001、10.725/0.000,21.119/0.000、22.856/0.000、6.370/0.003、7.958/0.001、16.840/0.000)。肾综合征出血热患者DIC评分与发热期、低血压休克期、少尿期、多尿期、恢复期血清中F1+2、FPA、FPB均呈正相关(r/P=0.535/0.000、0.600/0.000、0.582/0.000,0.513/0.000、0.739/0.000、0.601/0.000,0.668/0.000、0.707/0.000、0.410/0.001,0.297/0.021、0.474/0.000、0.439/0.001,0.422/0.001、0.522/0.000、0.640/0.000)。结论肾综合征出血热患者DIC评分与F1+2、FPA、FPB呈正相关,F1+2、FPA、FPB可能与DIC的发生有关。