血清粗纤维调节素ELISA的建立及初步应用

以提纯的人胎盘粗纤维调节素 (Un)及兔抗人Un IgG ,建立血清Un的竞争抑制ELISA标准曲线 ,并检测了 6 0名正常人和 12 4例肝病患者。结果采用棋盘试验确定包被Un及其抗体的浓度 ,表明该法灵敏度为 5 μg/L ,回收率为 96 6 %～10 8 3% ,批内 CV为 7 5 % ,批间CV 为 7 9%。 6 0名正常成人血清Un含量为 71 14± 2 9 6 0 μg/L ,参考值范围为 11～ 130μg/L,慢性肝病患者Un含量显著高于正常人。提示此法稳定、可靠、特异 ,基本符合临床使用要求 ,可用于慢性肝病的诊断。

纤维调节素在人类牙周细胞损伤愈合中的免疫组织化学表达

目的研究纤维调节素在牙周细胞损伤愈合中的表达,探讨纤维调节素在牙周损伤愈合中的作用。方法培养人类牙周细胞(牙龈成纤维细胞、牙周膜成纤维细胞和成骨细胞);在培养了牙周细胞的载玻片上做损伤细胞的圆形创口,建立牙周细胞损伤模型,跟踪观察7d;用免疫组织化学染色的方法,观察纤维调节素在牙周细胞损伤愈合过程中的表达。结果牙周细胞损伤后第1天,纤维调节素较强表达于损伤边缘新移行的细胞;随后,纤维调节素对损伤区新近移行的细胞的表达强于创口周围的细胞。结论纤维调节素强烈表达于损伤区新近移行的牙周细胞,可能参与牙周损伤愈合的早期活动。

大鼠肝纤维化过程中肝组织及血清中粗纤维调节素的动态变化研究

目的 :观察粗纤维调节素 (Un)在大鼠肝纤维化肝组织及血清中的动态变化 ,探讨其在正常和纤维化大鼠肝组织中的表达及其血清学检测的价值。方法 :以CCl4 诱发大鼠肝纤维化模型 ,采用ABC免疫组化方法检测肝组织中Un分布 ,用ELISA方法检测血清中Un的含量。结果 :随着CCl4 造模时间的延长 ,Un在肝组织中沉积增加 ,主要在汇管区、中央静脉壁及纤维间隔内分布。血清Un含量也随肝纤维化的加重而升高。结论 :Un是肝组织中一种重要的细胞外基质成分 ,在肝纤维化过程中表达增加 ;血清Un可以作为反映肝纤维化的一种血清学指标。

纤维调节素在牙周损伤愈合中的免疫化学定位和表达

目的:研究纤维调节素在牙周组织损伤愈合过程中的免疫化学定位。方法:损伤成年鼠磨牙周围的牙周组织,跟踪28 d,对纤维调节素和Ⅰ型、Ⅲ型胶原在愈合过程中的免疫组织化学分布进行分析。结果:纤维调节素在结缔组织中的免疫组织化学分布与Ⅲ型胶原相似。在牙周损伤愈合早期,纤维调节素分布于损伤区周围的纤维束,特别是损伤的牙槽骨和牙根表面之间的区域,在移行的牙龈上皮细胞中表达明显。愈合中期,纤维调节素广泛表达于肉芽组织成纤维细胞及其基质。愈合晚期,纤维调节素表达于牙骨质和新骨交界处的主纤维。结论:在牙周损伤愈合过程中,纤维调节素可能参与早期胶原纤维生成和对牙骨质和骨的再附着,在组织愈合的早期活动中起重要作用。

纤维调节素在大鼠和人类牙龈组织中的差异性表达

目的:研究纤维调节素在大鼠和人类健康和牙龈组织中的分布与表达。方法:用免疫组织化学的方法研究纤维调节素在大鼠牙龈及人类健康和炎性牙龈组织中的分布。与之比较,I型胶原纤维在鼠磨牙牙龈组织中的分布也做了研究。结果:在大鼠牙龈中,纤维调节素分布在牙龈上皮基底上层,在腭侧牙龈结缔组织有强表达。I型胶原纤维也有类似的分布。比较而言,纤维调节素在颊侧牙龈结缔组织表达较弱。对于人类,纤维调节素在炎性牙龈结缔组织中表达明显,然而在健康牙龈结缔组织中表达较弱。结论:与Ⅰ型胶原纤维关系密切的纤维调节素在颊侧和腭侧牙龈中有差异性表达,并且在人类炎性牙龈组织中表达增强。

粗纤维调节素对小鼠成纤维细胞Ⅰ型前胶原基因表达的影响

为了确定粗纤维调节素（Ｕｎ） 是否具有促进成纤维细胞Ⅰ型胶原合成的作用， 我们采用地高辛原位杂交和斑点杂交技术， 观察了Ｕｎ 对小鼠成纤维细胞（ＮＩＨ／３Ｔ３） Ⅰ型前胶原ｍ ＲＮＡ转录的影响； 结果发现Ｕｎ 对体外培养的３Ｔ３ 细胞Ⅰ型前胶原基因转录具有促进作用； 提示Ｕｎ 不仅作为一种细胞外基质而存在， 并且还有促进胶原合成的功能。

血清粗纤维调节素检测对诊断肝纤维化的临床价值

我们在提纯人胎盘粗纤维调节素(Un)及制备其抗血清的基础上,建立了竞争抑制ELISA法,检测143例各种肝病、30例非肝疾病和60名正常人血清Un水平,并与肝活检病理及血清Ⅲ型前胶原肽(PⅢNP)、透明质酸(HA)和层粘连蛋白(Ln)水平进行比较。结果各肝病组血清Un含量均显著高于正常对照及非肝疾病组(P值均<0.01):慢性肝炎各期间均有显著性差异(P值均<0.01);血清Un水产与慢性肝炎肝组织学炎症活动度(r=0.52,P<0.05)及纤维化程度(r=0.78,P<0.001)均呈显著正相关,与血清PⅢNP、LN、HA水平均不相关。若以血清Un≥200μg/L为判断肝纤维化的界值,其敏感性为71.43％,特异性为78.9％,诊断准确率为73.03％。

纤维调节素在大鼠牙本质和牙髓中的免疫组织化学表达

目的研究纤维调节素在大鼠牙本质和牙髓中的免疫组织化学表达。方法用免疫组织化学技术,对正常Lewis鼠磨牙牙本质和牙髓和口腔其它组织的纤维调节素及相关蛋白多糖和胶原的组织分布进行分析。结果纤维调节素在牙齿的前期牙本质有阳性反应,然而成牙质细胞并未见明显的着色。内皮细胞、内皮下或血管平滑肌,以及红细胞、白细胞、横纹肌对纤维调节素有轻到中度着色。胶原蛋白I在前期牙本质有强烈的阳性反应。结论纤维调节素可能参与牙本质的早期形成。

粗纤维调节素与慢性肝病

粗纤维调节素分布于全身结缔组织，正常肝组织中粗纤维调节素以致密包裹的纤维素分布于汇管区间质，肝纤维化时局部表达增高。血清粗纤维调节素可反映肝内结缔组织的代谢，动态观察可反映纤维组织的降解及结构改建。

纤维调节素对大鼠正畸牙牙周组织破骨细胞分化因子表达的影响及相关机制

目的探讨纤维调节素对大鼠正畸牙牙周组织破骨细胞分化因子表达的影响及相关机制。方法大鼠正畸牙的牙周膜干细胞(PDLSC)按随机数字表法平分为3组-对照组、纤维调节素1组、纤维调节素2组,分别用0、1、10μg/mL纤维调节素的处理6、12 h。四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖,酶联免疫吸附实验法检测白细胞介素-8(IL-8)表达水平,蛋白质印迹(Western blotting)法检测骨保护素(OPG)及其配体核因子-κB受体活化剂配体(RANKL)蛋白表达水平,Matrigel基质胶检测管腔形成。结果细胞处理6、12 h后,纤维调节素1组、纤维调节素2组的细胞增殖指数、OPG蛋白相对表达量、管腔数与管腔总长度高于对照组,IL-8表达水平、RANKL蛋白相对表达量低于对照组,差异均有统计学意义(P <0.05),且纤维调节素2组较纤维调节素1组细胞增殖指数、OPG蛋白相对表达量、管腔数与管腔总长度更高,IL-8表达水平、RANKL蛋白相对表达量更低,差异均有统计学意义(P <0.05)。结论纤维调节素在大鼠正畸牙PDLSC的应用能抑制IL-8的表达,有利于维持OPG/RANKL平衡,促进PDLSC的增殖与形成管腔样结构,并其作用在一定浓度下呈依赖性。

粗纤维调节素的提纯和抗血清制备

采用分级盐析、离子梯度层析、凝胶过滤等步骤从人胎盘组织中提纯了粗纤维调节素（Ｕｎｄｕｌｉｎ，Ｕｎ），经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹证实为一纯蛋白。以纯化的Ｕｎ免疫新西兰大白兔获得高效价抗血清．且与Ⅰ、Ⅲ型胶原及纤维连接蛋白均无明显交叉反应。制备的Ｕｎ及其抗血清可用于血清ＥＬＩＳＡ检测及免疫组化研究。

纤维调节素在大鼠正常牙周组织中的免疫化学定位和表现

目的 研究纤维调节素 (fibromodulin)在正常牙周组织中的分布和表现 ,以明确纤维调节素在牙周组织自身稳定中的作用。方法 用免疫组织化学和逆转录 -聚合酶链反应技术 ,对正常Lewis鼠磨牙牙周组织的纤维调节素及相关蛋白多糖和胶原的组织分布和牙周细胞的mRNA表现进行分析。结果 纤维调节素在靠近口腔牙龈面的区域和牙周韧带 牙槽骨、牙周韧带 牙骨质界面有强阳性表现 ;核心蛋白聚糖强阳性表现于牙龈组织龈沟附近的区域 ;双糖链蛋白聚糖则在牙龈上皮着色明显。从mRNA的表现可以看出 ,纤维调节素 ,核心蛋白聚糖和双糖链蛋白聚糖在成骨细胞中强烈表现 ,其蛋白密度是其他两种细胞的 1～ 3倍 ;Ⅰ型、Ⅲ型胶原的mRNA在牙龈成纤维细胞中表现水平较高 ,其蛋白密度是其他两种细胞的 1 5倍以上。结论 纤维调节素可能与其他小蛋白多糖相互作用 ,调节胶原纤维的网络形成 。

血清粗纤维调节素检测对诊断肝纤维化的临床价值

血清粗纤维调节素检测对诊断肝纤维化的临床价值姚定康，李石，孔宪涛，谢映华肝纤维化是肝内细胞外基质（ＥＣＭ）过多沉积所致，其发生、发展直接影响病人预后。粗纤维调节素（Ｕｎ－ｄｕｌｉｎ，Ｕｎ）是近年发现的一种ＥＣＭ糖蛋白，有关其临床研究的报道尚少［１，２...

纤维调节素抑制脂多糖诱导性动物牙周炎的实验分析

目的:探讨与分析纤维调节素抑制脂多糖诱导性大鼠牙周炎的效果与机制。方法:将健康雌性Wistar大鼠36只平分为三组-对照组、牙周炎组与纤维调节素组。对照组给予正常喂养,不给予任何干预;牙周炎组与纤维调节素组都给予建立脂多糖诱导性牙周炎模型,建模后2 w纤维调节素组每天给予纤维调节素80 mg/kg·d,牙周炎组给予等体积的生理盐水灌胃治疗,持续4 w。结果:牙周炎组与纤维调节素组治疗第2 w与第4 w的牙龈指数、探诊深度、牙槽骨吸收值高于对照组(P<0.05),纤维调节素组低于牙周炎组(P<0.05)。牙周炎组与纤维调节素组治疗第2 w与第4 w的血清骨钙素(osteocalcin,OCN)值高于对照组(P<0.05),碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,ALP)值低于对照组(P<0.05),牙周炎组与纤维调节素组对比差异也都有统计学意义(P<0.05)。牙周炎组与纤维调节素组治疗第2 w与第4 w的蛋白酪氨酸磷酸酶-2(Src Homology Phosphotyrosyl Phosphatase 2,SHP-2)含蛋白相对表达水平高于对照组(P<0.05),纤维调节素组低于牙周炎组(P<0.05)。结论:纤维调节素可抑制脂多糖诱导性大鼠牙周炎的进展,抑制OCN与SHP-2蛋白的表达,促进ALP的表达,从而改善牙周炎大鼠的相关症状。

肝病患者血清HA、PⅢP和Un水平与肝功能、肝脏B超检查结果的关系探讨

目的:探讨肝病患者血清透明质酸(HA)、Ⅱ型前胶原肽(PⅢP)、粗纤维调节素(Un)水平与肝功能、肝脏B超结果的关系,评价其临床应用价值。方法:199例各型肝病,用RIA法检测血清HA、PⅢP,用ELISA法检测血清Un,同时检测肝功能(ALT、TBil、Glb)、肝脏B超,并进行相关分析。结果:慢性肝病各组的HA、PⅢP和Un均高于急性肝炎组(P<0.01,P<0.05),各种慢性肝病组间差异有显著性意义,以活动性肝硬化为最明显。PⅢP、Un与ALT相关(P<0.05),HA与ALT无相关(P>0.05),3者与Glb均相关(P<0.01)。HA、PⅢP和Un与TBil均不相关(P>0.05)。B超异常组的HA、PⅢP和Un水平高于B超正常组(P<0.05,P<0.01)。结论:HA、PⅢP和Un均是诊断肝纤维化的良好指标,但PⅢP、Un与肝炎活动有一定关系,在临床诊断时应与肝功能、B超检查结果综合分析。