转化生长因子β诱导骨髓间充质干细胞分化为半月板纤维软骨细胞

背景:骨髓间充质干细胞可被诱导分化为纤维软骨细胞作为组织工程中的种子细胞,而细胞因子转化生长因子β(transforming growth factor beta,TGF-β1)和TGF-β3在诱导分化中的作用,目前仍是研究热点。目的:综述TGF-β1和TGF-β3诱导骨髓间充质干细胞分化为软骨细胞的相关文献,为进一步指导TGF-β诱导骨髓间充质干细胞分化为纤维软骨细胞提供理论依据,同时为今后的临床上半月板损伤和退化的治疗提供新策略。方法:计算机检索PubMed、中国知网和万方医学网数据库1990年1月至2022年3月收录的文献。英文数据库检索词:“Transforming Growth Factor beta 1,Transforming Growth Factor beta 3,Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells,meniscus,fibrochondrocyte”,中文数据库检索词:“TGF-β1,TGF-β3、骨髓间充质干细胞、半月板、纤维软骨细胞”,根据筛选标准,最终纳入78篇文献进行综述。结果与结论:①TGF-β主要分为TGF-β1、TGF-β2和TGF-β3共3种亚型,其中研究较多的细胞因子是TGF-β1和TGF-β3。②TGF-β主要通过TGF-β/Smad信号通路激活细胞核内的SOX9转录因子进而诱导骨髓间充质干细胞分化为软骨细胞。③TGF-β1可诱导骨髓间充质干细胞向透明软骨细胞分化,伴随培养时间的延长,透明软骨细胞可发生去分化变成纤维软骨细胞;④TGF-β3主要诱导骨髓间充质干细胞向纤维软骨细胞分化,同时促进Ⅰ型胶原和蛋白聚糖合成分泌。⑤目前,关于半月板损伤和退化的治疗,临床上采用的治疗方案均不理想,组织工程的出现为其治疗提供了新的策略,具体方法是将诱导因子和骨髓间充质干细胞植入到半月板损伤部位,可以起到恢复半月板功能及再生纤维软骨组织的作用,但是目前实验尚处于体外和动物模型阶段,其在临床上用于半月板受损的治疗和可用性仍需要后续大量的临床研究去研究探索。

丝素—胶原复合物半月板支架负载纤维软骨细胞的实验观察

目的探讨蚕丝蛋白纤维(丝素)—胶原复合半月板支架作为兔纤维软骨细胞组织工程支架的可行性。方法构建丝素—胶原复合物半月板支架,将体外培养扩增的兔半月板纤维软骨细胞接种于该支架上,加入转化生长因子(TGF)-β1三维立体培养,倒置相差显微镜、扫描电镜观察细胞形态。结果丝素—胶原复合物能制成理想形状和大小的三维立体多孔半月板支架,纤维软骨细胞能良好地贴附于支架孔壁上。结论丝素—胶原复合物半月板支架细胞相容性良好,是半月板组织工程支架的可选材料。

Ⅰ型胶原半月板支架负载纤维软骨细胞体外培养

[目的]观察Ⅰ型胶原半月板支架对纤维软骨细胞的吸附作用及对细胞生物学性状的影响,评价其作为半月板组织工程支架的可行性及价值。[方法]构建Ⅰ型胶原半月板支架,将体外培养的兔半月板纤维软骨细胞吸附于该支架上三维立体培养,通过相差倒置显微镜、组织学、扫描电镜及免疫组织化学检测支架对半月板纤维软骨细胞的表型、增殖及功能的影响。[结果]Ⅰ型胶原能制成理想大小、形状的三维立体多孔半月板支架,纤维软骨细胞在支架孔壁贴附良好,维持表型稳定,分泌胞外基质。[结论]Ⅰ型胶原半月板支架细胞相容性良好,但力学性能相对较差,通过与其它生物材料复合以提高其机械力学强度,可望制得理想的半月板组织工程支架。

半月板纤维软骨细胞与壳聚糖/聚磷酸钙体外复合培养的实验研究

目的:观察半月板纤维软骨细胞在不同配比壳聚糖/聚磷酸钙(chitosan/calciumpolyphosphate,CS/CPP)支架材料上的生长状况,优选最佳配比CS/CPP生物材料作为组织工程半月板支架材料。方法:采用机械分离与酶连续消化相结合的方法体外分离兔半月板纤维软骨细胞,单层培养传代至第3代,并对其进行表型鉴定。采用共混-化学交联固化-冷冻干燥法将CS、醛基化海藻酸钠(aldehyde alginate,ADA)、CPP有机地结合起来,制备4种不同配比的新型组织工程半月板复合支架材料。将体外分离培养的第3代半月板细胞,通过二次沉淀接种法将其种植于不同配比的CS/CPP支架上,体外培养7天,采用相差倒置显微镜、SEM、HE染色观察细胞在支架上的形态、黏附、生长情况。结果:体外分离培养的第3代半月板细胞基本维持纤维软骨细胞的表型。相差倒置显微镜下可见,细胞在支架上黏附良好;扫描电镜下可见,细胞在支架上均匀分布,细胞多数呈多角形,并有基质分泌;HE染色结果显示,有细胞长入到三维支架材料内部。其中,半月板细胞在3:7的CS/CPP支架材料上单位面积内数目最多,生长最旺盛,细胞外基质分泌最多。结论:三维多孔的CS/CPP复合材料能促进半月板纤维软骨细胞的黏附、生长和增殖,其中3:7的CS/CPP支架材料细胞相容性和生物活性最好,最适于半月板纤维软骨细胞粘附和生长,并且能促进半月板细胞增殖和维持其表型,有望成为组织工程半月板良好的支架载体。

骨髓间充质干细胞向纤维软骨细胞表型的诱导分化

背景:半月板损伤后自行修复能力有限,组织工程技术为半月板损伤后修复开辟了一条新的途径。骨髓间充质干细胞具有多向分化潜能,有可能成为半月板组织工程理想的种子细胞。目的:观察体外培养的猪骨髓间充质干细胞在诱导培养液作用下向纤维软骨细胞表型分化的可行性。方法:采用全骨髓培养法分离培养猪骨髓间充质干细胞。取第3代的骨髓间充质干细胞,实验组以2.0×104/cm2细胞密度接种于24孔板,在含有转化生长因子β1、胰岛素样生长因子Ⅰ、地塞米松及抗坏血酸的DMEM-LG完全培养液中诱导分化,对照组以2.0×104/cm2细胞密度接种于24孔板,加入不含诱导因子的DMEM-LG完全培养液。在诱导第7,14,21天分别行甲苯胺蓝染色、免疫细胞化学染色检测其分化结果。结果与结论:①第2代骨髓间充质干细胞的群体倍增时间最短约为2d,第4代以后相对延长,为5～9d。②诱导后的骨髓间充质干细胞由梭形向多角形、多边形转变。③实验组可见胞浆呈明显的紫蓝色,尤其细胞密集生长的区域蓝染较深,染色强度随诱导时间延长而增强。对照组的骨髓间充质干细胞只有核蓝染。④实验组和对照组Ⅰ型胶原免疫细胞化学染色均阳性,各期染色无明显差异。对照组未见Ⅱ型胶原表达,实验组诱导14d后可见Ⅱ型胶原能稳定的表达。提示骨髓间充质干细胞在体外诱导培养下可分泌纤维软骨细胞特征性细胞外基质,作为半月板组织工程种子细胞来源可行。

碱性成纤维细胞生长因子对培养的半月板纤维软骨细胞的促进增殖作用

目的:研究碱性成纤维细胞生长因子(basicfibroblastgrowthfactor,bFGF)对培养兔纤维软骨细胞增殖的影响,探讨其作用机制。方法:培养1月龄新西兰兔半月板纤维软骨细胞,以1,10,100μg/L的bFGF作用细胞,以四氮甲基唑蓝(MTT)比色法检测细胞的增殖情况,并在10μg/LbFGF作用下,采用流式细胞技术进行细胞周期亚时相分析。结果:在1～100μg/L范围内bFGF对培养纤维软骨细胞的增殖均有促进作用,10μg/LbFGF即可有显著效果。实验组细胞周期较对照组明显缩短,DNA合成前期(G1期),DNA合成期(S期)和分裂前期及分裂期(G2M)的时间分别为14.58,12.30,11.43h,对照组分别为22.77,17.90,20.62h。结论:bFGF对培养的半月板纤维软骨细胞增殖有促进作用,能缩短纤维软骨细胞DNA合成G1期及G2M期,从而缩短细胞周期、促进细胞分裂增殖。

碱性成纤维细胞生长因子转染对半月板纤维软骨细胞增殖、细胞周期及胶原合成影响的研究

目的探索携带碱性成纤维细胞生长因子(bas ic fibrob last grow th factor,bFGF)基因的重组慢病毒载体转染半月板纤维软骨细胞的效能,观察半月板纤维软骨细胞对bFGF基因转染的反应。方法将从1只3月龄新西兰大白兔分离培养的第1代半月板纤维软骨细胞分为实验组(A组)、对照组(B组)和空白组(C组),3组细胞分别以2×104个/孔接种于24孔培养板。细胞生长至60%融合时,A组与克隆有bFGF基因的重组慢病毒载体悬液共培养,B组与不携带任何基因的慢病毒悬液共培养,C组未接受外加处理。共培养48 h后检测3组的细胞周期、胶原合成能力、培养液中bFGF的表达及不同时间各组细胞的细胞增殖能力的变化。结果共培养48 h后在A组测出bFGF浓度为870±60 pg/m l,而B、C组培养液中未能检测出bFGF的表达;共培养6 d后,M TT法检测,A组吸光度(A)值0.427±0.037与B组0.320±0.042和C组0.308±0.034比较差异有统计学意义(P<0.01)。A组细胞周期较B、C组缩短,A组细胞G1期,S期和G2/M期的时间分别为16.28、12.60和11.04 h;而B、C组分别为23.61、16.90和21.33 h及21.56、19.80和21.41 h;A组与B、C组比较差异有统计学意义(P<0.05)。A组细胞每分衰变数(7 281.69±805.50)高于B组(5 916.40±698.11)和C组(5 883.57±922.63),比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论借助慢病毒载体能有效实现bFGF基因在半月板纤维软骨细胞的转染;bFGF基因转染能促进半月板纤维软骨细胞的增殖和胶原合成能力。

CPPf/PLLA支架负载人半月板纤维软骨细胞的体外实验研究

目的探讨聚磷酸钙纤维/左旋聚乳酸(CPPf/PLLA)支架负载人半月板纤维软骨细胞的有效性和可行性。方法将人半月板纤维软骨细胞接种CPPf/PLLA支架并在体外培养,应用倒置相差显微镜和扫描电镜观察纤维软骨细胞的粘附、生长和增殖情况,培养14d,行HE、TB(甲苯胺蓝)及Ⅰ型胶原免疫组化染色观察纤维软骨组织形成情况。结果纤维软骨细胞在支架上粘附、生长和增殖良好,体外培养14d能形成较成熟的纤维软骨组织。结论CPPf/PLLA支架具有良好的细胞相容性,可作为负载人纤维软骨细胞的载体。

透明质酸对体外培养半月板纤维软骨细胞的影响

目的 观察体外培养半月板纤维软骨细胞的生长特点及生物学特性 ,研究中分子量透明质酸 (hyaluronicacid ,HA)对体外培养半月板纤维软骨细胞的影响。方法 机械分离和胰酶、胶原酶联合消化 ,将兔半月板纤维软骨细胞进行体外分离培养 ,动态观察细胞形态变化和生长情况。设立对照 ,观察中分子量透明质酸HA(分子量 2× 10 6)对细胞生长增殖的影响 ,利用同位素标记技术 ,测定细胞对培养基中 3 H TdR、3 H Pro和Na3 5SO4的摄取量 ,比较细胞DNA、胶原蛋白和蛋白多糖合成的速度。结果 体外培养的半月板细胞呈多角形、有突起、富含分泌颗粒。当培养基中加入HA后 ,细胞3 H TdR、3 H Pro和Na3 5SO4的摄取量不同程度高于对照组 ,统计学相差显著 (P <0 0 5 )。

兔半月板纤维软骨细胞的体外去分化研究

目的：比较研究不同代次间兔半月板纤维软骨细胞生物学特性的改变,为构建组织工程半月板和细胞治疗中的种子细胞优选提供进一步的理论和实践基础。方法：采用机械分离与酶连续消化相结合的方法体外分离兔半月板纤维软骨细胞,单层培养传代至第5代。采用相差倒置显微镜和SEM观察各代细胞的形态变化和超微结构,MTT法检测细胞增殖情况并描绘生长曲线,采用细胞化学染色和免疫组化鉴定细胞分泌的蛋白聚糖和Ⅰ、Ⅱ型胶原蛋白。结果：半月板纤维软骨细胞原代接种后8～12 h开始贴壁,48～72h大部分细胞贴壁,胞质逐渐展开,细胞变大伸长,形成突起,呈多角形,细胞形态规则,轮廓清晰,镜下观察有立体感,7～10 d后,细胞长满传代。传代后细胞贴壁生长能力和增殖速度明显加快,原代至第2代细胞形态较规则,多呈多角形,大小均一。第3代后随着传代次数的增加,细胞中梭形细胞增多,分泌和增殖能力下降,传代周期延长。第5代分裂相少见,密度稀疏,细胞形态不佳,约80%呈长梭形,分泌和增殖能力下降。SEM示第1代半月板细胞形态规则,呈多极性,表面有突起;第5代细胞形态不规则,多呈梭形。生长曲线可见第4代前半月板细胞生长速度及生长周期均相似,第5代后细胞生长速度减慢,增殖减缓。细胞化学和免疫组化染色分析胶原和蛋白聚糖的表达：随传代的进行,Ⅱ型胶原蛋白和蛋白聚糖的表达逐渐减弱而Ⅰ型胶原表达逐渐增强。结论：体外单层培养条件下,随着传代的进行,细胞活力逐渐下降,生长速度减慢,传代周期延长,逐渐变为梭形,形态不规则。体外单层培养系统中半月板纤维软骨细胞表型随传代的进行,Ⅱ型胶原蛋白和蛋白聚糖的表达逐渐减少而Ⅰ型胶原表达逐渐增多,体外单层培养条件下培养的半月板纤维软骨细胞从第3代开始逐渐失去其特异性表型,发生去分化,逐渐变为成纤维细胞的表型。体外单层分离培养的第5代前半月板细胞基本维持纤维软骨细胞的表型和生物学特性,可作为组织工程半月板的种子细胞。

大鼠半月板纤维软骨细胞的分离、培养与鉴定

探讨体外大鼠半月板纤维软骨细胞分离培养与鉴定的实验方法,观察不同代次间细胞的形态学特征.手术分离大鼠双膝内外侧半月板,采用胰酶和Ⅱ型胶原酶消化法提取细胞,甲苯胺蓝染色和Ⅱ型胶原免疫荧光法鉴定细胞,低糖DMEM完全培养液常规培养.结果表明,原代半月板细胞形态呈多角形,轮廓清晰,8～10d可铺满瓶底;传代后的1～3代细胞,其贴壁及增殖能力加强,生长状态良好;传至4～5代尤其是第5代之后,细胞表型不稳定,密度稀疏,形态以长梭形为主且不规则,清晰度下降,传代周期延长;细胞鉴定结果呈阳性.双酶消化和低糖DMEM完全培养液常规培养可以获得具有良好生物学特性的半月板细胞,第4代之前的半月板细胞可以为运动损伤的组织工程学研究提供种子细胞.

碱性成纤维细胞生长因子对培养兔纤维软骨细胞增殖的影响

随着细胞生物学的发展,软骨细胞体外培养的研究日益深入,细胞因子参与调节软骨细胞的增殖、分化过程逐渐被人们所揭示。目前,已确知有许多细胞因子具有促进软骨细胞增生、分化的作用,包括成纤维细胞生长因子(FGF)。转化生长因子(TGF-β)、胰岛素样生长因子(IGF)及血小板衍生生长因子(PDGF)等,其中FGF作用最为广泛。但是。

力学刺激通过整合素α5β1介导半月板纤维软骨细胞的凋亡

目的研究力学刺激对半月板纤维软骨细胞(meniscal fibrochondrocytes,MFs)凋亡的影响,并探讨可能的分子机制。方法通过酶消化法从大鼠半月板组织中分离MFs,实验首先分为两组:对照组(无力学刺激)和力学刺激组(10%牵张力,0.5 Hz,8 h/d),通过力学刺激仪器诱导MFs损伤细胞模型,CCK-8法和流式细胞术分别检测力学刺激对MFs活力和凋亡的影响。然后将实验分为四组:对照组(无力学刺激)、力学刺激组(10%牵张力,0.5 Hz,8 h/d)、对照siRNA(NC-siRNA)力学刺激组和干扰α5β1(α5β1 siRNA)力学刺激组,其中α5β1 siRNA和NC-siRNA力学刺激组细胞通过lipofectamine 2000将α5β1 siRNA和对照siRNA转染到MFs,然后进行力学刺激;CCK-8法和流式细胞术分别检测α5β1 siRNA和力学刺激对MFs活力和凋亡的影响;Western blot检测力学刺激和α5β1 siRNA对MFs Bcl2和cleaved caspase3蛋白表达的影响。结果CCK-8结果显示,与对照组细胞活力比较,力学刺激组MFs细胞活力显著降低;与NC-siRNA力学刺激组相比,α5β1 siRNA力学刺激组细胞活力显著升高,差异具有统计学意义(P<0.01)。流式检测结果显示,与对照组比较,力学刺激组MFs细胞凋亡率明显升高;与NC-siRNA力学刺激组相比,α5β1 siRNA力学刺激组细胞凋亡率显著降低,差异具有统计学意义(P<0.01)。Western blot结果显示,与对照组比较,力学刺激组MFs细胞Bcl2表达显著降低,α5β1和cleaved caspase3表达明显升高;而与NC-siRNA力学刺激组相比,α5β1 siRNA力学刺激组细胞Bcl2表达显著升高,α5β1和cleaved caspase3表达明显降低,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论力学刺激可能通过促进整合素α5β1表达,抑制Bcl2表达,促进cleaved caspase3表达,激活线粒体凋亡通路,促进MFs凋亡。

半月板纤维软骨细胞接种脱钙松质骨支架构建组织工程半月板的方法选择

目的：探讨半月板纤维软骨细胞（MFCs）接种脱钙松质骨（DCB）支架的最佳接种方法。方法：实验分静滴法、注射法、离心法、负压法等4组。取兔MFCs,采用上述4种方法对孔隙率为80%、平均孔径为268μm的DCB支架进行细胞接种。Live/Dead染色检测其细胞活性,并通过软件分析其细胞分布情况。CCK-8法和Hoechst 33258法检测支架内MFCs增殖情况和支架内DNA含量。结果：通过Live/Dead染色显示,离心法接种细胞后其存活率优于其他3组（P〈0.05）;细胞分布均匀,由浅至深各层细胞比例无明显统计学差异（P〉0.05）;1~5天细胞增殖能力优于其他3组（P〈0.05）,14~21天支架DNA含量亦优于其他3组（P〈0.05）。结论：离心法可以明显提高MFCs在DCB上的细胞分布和细胞增殖能力,是一种简单、高效的,利于组织工程半月板（TEM）构建的接种方法。

沙苑子多糖促进兔半月板纤维软骨细胞增殖的作用机制研究

目的:研究沙苑子多糖促进兔半月板纤维软骨细胞(以下简称"软骨细胞")增殖的作用机制。方法:分离1月龄新西兰大白兔软骨细胞。将软骨细胞分为正常对照组(PBS)、阳性对照组(硫酸氨基葡萄糖,10 mg/mL)和沙苑子多糖高、中、低(40、20、10mg/mL)剂量组,分组给药干预。采用光学显微镜观察软骨细胞的形态学特征;采用MTT法检测软骨细胞增殖抑制率,并用流式细胞术观察细胞周期;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测软骨细胞中Ⅱ型胶原蛋白(ColⅡ)、碱性磷酸酶蛋白(ALP)的表达水平;采用逆转录-聚合酶链式反应和Western blotting法检测转化生长因子β1(TGF-β1)、骨形态发生蛋白2(BMP-2)mRNA及蛋白的表达水平。结果:软骨细胞培养72 h后,细胞融合成单层,多数呈现细长梭型外观。与正常对照组比较,阳性对照组和沙苑子多糖高、中、低剂量组软骨细胞的增殖抑制率、G1/G0期细胞百分比均显著降低(P<0.05),S期细胞百分比和ColⅡ、ALP蛋白表达水平及TGF-β1、BMP-2 mRNA及蛋白的表达水平均显著升高(P<0.05)。与阳性对照组比较,沙苑子多糖高剂量组软骨细胞的增殖抑制率、G1/G0期细胞百分比均显著降低(P<0.05),S期细胞百分比和ColⅡ、ALP蛋白表达水平及TGF-β1、BMP-2 mRNA及蛋白的表达水平均显著升高(P<0.05);沙苑子多糖低剂量组软骨细胞的增殖抑制率、G1/G0期细胞百分比均显著升高(P<0.05),S期细胞百分比和ColⅡ、ALP蛋白及TGF-β1、BMP-2 m RNA和蛋白的相对表达水平均显著降低(P<0.05);沙苑子多糖中剂量组上述指标差异均无统计学意义。结论:沙苑子多糖可促进软骨细胞增殖,降低G1/G0期细胞百分比,促进细胞向S期转化;其作用机制可能与上调TGF-β1、BMP-2 mRNA及蛋白表达,促进ColⅡ、ALP蛋白表达水平升高有关。

同步辐射X线相衬成像技术在兔髌骨-髌腱连接点纤维软骨细胞的三维可视化应用研究

利用同步辐射X射线相衬成像技术(Synchrotron Radiation-based X-ray Phase-contrast Computed Tomography,SR-XPCT)对兔髌骨-髌腱连接点(Patella-Patellar Tendon Junction,PPTJ)移行区的纤维软骨细胞进行三维可视化及量化表征。正常骨成熟的新西兰PPTJ经多聚甲醛固定、梯度酒精脱水后,于上海光源X射线成像与生物医学应用光束线站进行扫描;采集的原始图像经数字减影、相位恢复、切片重构、位数转换后进行三维重构分析;标本扫描后进行传统组织学验证。SR-XPCT能成功获取PPTJ及其移行区纤维软骨细胞的三维高清图像,并对移行区纤维软骨细胞进行了量化表征:平均直径为(10.139±1.265)?m;平均体积为(291.187±87.283)μm3,体积分布在200-400μm3之间的占75.4%;平均球形度为0.711±0.079,球形度在0.605-0.805之间的纤维软骨细胞约占84.9%。SR-XPCT作为一种先进的、直观准确的可视化骨腱连接点的三维微观形态结构研究方法,为骨腱连接点损伤修复的三维形态学研究提供了新方法、新思路。

半月板纤维软骨细胞与小肠黏膜下层相容性的研究

严重的半月板损伤需要进行半月板的移植，防止膝关节的退行性变。我们以猪小肠黏膜下层（SIS）作为支架材料，通过观察兔半月板纤维软骨细胞在此载体中的生长、增殖情况，评价SIS的生物相容性，为应用SIS作为支架材料构建组织工程半月板提供实验依据。

大鼠半月板纤维软骨细胞的体外培养和生物学特征鉴定

目的:体外分离、培养和鉴定大鼠半月板纤维软骨细胞,为研究大鼠半月板纤维软骨细胞的损伤修复提供简单、可行的细胞培养方法。方法:机械分离大鼠膝关节内外侧半月板,0.1%Ⅱ型胶原酶消化配合机械吹打,10%FBS的培养基行原代和传代培养,倒置显微镜动态观察不同时间点半月板纤维软骨细胞的形态及生长情况,鉴定采用甲苯胺蓝染色法和Ⅱ型胶原免疫细胞化学染色法。CCK-8法检测大鼠纤维软骨细胞增殖。结果:在不同时间点,细胞表现出不同的生理形态,由多角形或短梭形变为梭形,最终呈现出三角形或椭圆形,并随着时间延长,细胞增殖能力逐渐增加。细胞培养48 h和72 h的OD值分别明显高于培养24 h的OD值(P<0.05),差异具有统计学意义。细胞培养48 h和72 h的OD值相比较,72 h的OD值虽有增加,但并无统计学差异(P>0.05)。经甲苯胺蓝染色和Ⅱ型胶原免疫荧光染色为阳性。结论:该方法培养的细胞形态稳定,增殖能力强,具有体内纤维软骨细胞的生物学基本特性,可为后续实验提供简单、可靠的原代大鼠半月板纤维软骨细胞培养方法。

成纤维细胞生长因子基因转染对纤维软骨细胞特性的影响

半月板是膝关节内的重要结构其损伤后，自行愈合的能力较差，与损伤局部缺乏特异性的生长因子有一定关系。我们应用基因治疗技术进行碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）基因的转染，观察半月板纤维软骨细胞对bFGF基因转染的反应。

猪跟腱止点纤维软骨细胞的分离、体外培养及鉴定

[目的]探讨猪跟腱止点纤维软骨层细胞的分离、培养及鉴定方法,观察纤维软骨细胞的生物学特性。[方法]体视显微镜下切取贵州迷你小香猪跟腱止点纤维软骨层组织并剪碎,经过胰蛋白酶和II型胶原酶两步酶消法,后在含10%FBS的DMEM进行培养和传代,使用HE、阿利新蓝、Ⅰ、Ⅱ型胶原免疫组织化学染色鉴定。[结果]成功分离获得纤维软骨细胞。鉴定证实实验细胞具有纤维软骨细胞共同生物学特性。HE染色:细胞浆蛋白多糖成分被染成深浅不同的粉红色;阿利新蓝染色:纤维软骨细胞内见蓝紫色异染颗粒,细胞核深染,细胞周围有少量异染颗粒出现。Ⅰ、Ⅱ型胶原免疫组织化学染色:纤维软骨细胞胞质被染成棕黄色。[结论]成功分离和培养了猪跟腱止点纤维软骨层细胞,针对纤维软骨细胞特性,通过不同染色方法进行了联合鉴定。本实验建立的腱止点纤维软骨细胞分离、培养方法是一种简便可靠的方法。