纤维连接蛋白EDA片段拷贝数变异在乳腺癌诊断及预后评价中的意义

目的:探讨纤维连接蛋白EDA片段拷贝数变化在乳腺癌诊断及预后评价中的意义。方法 :选取100例乳腺癌手术患者的癌灶及癌旁组织标本,采用AccuCopy TM多重基因拷贝数检测技术进行纤维连接蛋白EDA片段拷贝数检测。结果:76%癌灶呈EDA片段多拷贝状态,只有2%癌旁组织呈多拷贝状态。依据淋巴结转移情况将患者分为无转移、1~3枚转移、≥4枚转移3组,癌组织标本EDA片段多拷贝比例分别为21.4%、68.8%、94.4%,差异有统计学意义(P<0.05);依据Ki67表达情况将患者分为≤20%、20%~50%、>50%3组,癌组织标本EDA片段多拷贝比例分别为20.0%、79.2%、94.6%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:纤维连接蛋白EDA片段拷贝数检测可以辅助诊断乳腺癌,对患者预后有一定指导意义。

纤维连接蛋白EDA片段的病理学研究进展

细胞外基质纤维连接蛋白基因Ⅲ型重复序列有3个可变剪接区,分别为EDA、EDB和IIICS。在肿瘤、胚胎及创伤愈合等细胞增殖和迁移活跃的组织中,EDA+FN呈高表达,而正常组织中几乎不表达。本文就其特性、生物学功能和临床应用前景进行综述。

纤维连接蛋白EDA片段的剪接表达及其功能研究进展

纤维连接蛋白是广泛存在于细胞外基质、血浆及其它体液中一种糖蛋白,其基因在三个区域进行可变剪接,分别为EDA、EDB和IIICS。EDA片段对增强纤维连接蛋白促进细胞粘附、迁移、分化及增殖等功能具有重要的作用。本文就纤维连接蛋白EDA片段的剪接调节、生物学活性及其应用展望做一探讨。

纤维连接蛋白EDA片段与肿瘤相关细胞信号转导通路

纤维连接蛋白(fibronectin,FN)EDA片段与组织发生、创伤和肿瘤形成有关。本文对EDA影响肿瘤生物学行为相关的细胞信号通路研究等进行综述。

乳腺癌纤维连接蛋白EDA片段基因拷贝数变异及其与转移的关系

探讨乳腺癌标本纤维连接蛋白(FN)EDA片段基因拷贝数变异及其与转移的关系。选取2014年3月-2017年3月接受手术切除治疗的乳腺癌改良根治术标本56例作为研究对象,记为乳腺癌组,根据是否出现淋巴转移将标本分为两组,淋巴结转移组28例,无淋巴结转移组28例。此外,取56例乳腺癌患者的癌旁乳腺组织(正常乳腺组织)作为正常对照组。分别分析3组研究对象的血纤维连接蛋白EDA片段基因,并深入分析其在乳腺癌转移中起到的作用。对比乳腺癌组和对照组腺体周围基底膜FN,(+++)分级的标本乳腺癌组显著少于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。而间质FN两组差异无统计学意义(P>0.05)。对比淋巴结转移组与无转移组基底膜FN,(+++)分级的标本淋巴结转移显著少于无转移组,差异有统计学意义(P<0.05),而间质FN两组差异无统计学意义(P>0.05)。乳腺癌淋巴结转移与基底膜FN表达有明显相关性(r=0.687,P<0.05),与基质FN水平无明显相关性(P>0.05)。在乳腺癌细胞的转移中,FN基因EDA片段起到了重要的作用,其在乳腺癌细胞基底膜中呈低水平表达,是导致淋巴结转移的主要原因之一。

乳腺癌组织及外周血纤维连接蛋白EDA片段基因拷贝数变异对乳腺癌转移的影响研究

目的研究对比乳腺癌组织及外周血纤维连接蛋白(FN)蛋白结构域A(EDA)片段基因拷贝数变异对乳腺癌转移的影响。方法100例手术切除的乳腺癌改良根治术标本,其中出现淋巴结转移50例作为转移组,无淋巴结转移50例作为无转移组;另选取同期进行乳腺癌根治术切除标本癌旁乳腺组织(正常组织)50例作为对照组。对三组血纤维连接蛋白EDA片段基因进行分析,观察并对比三组标本细胞株中FN基因EDA蛋白的表达及EDA片段FN mRNA相对表达量情况。结果转移组阳性细胞率(93.3±2.4)%高于无转移组的(71.9±4.8)%和对照组的(5.4±1.1)%,且无转移组高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。转移组mRNA相对表达量(2.75±0.70)高于无转移组的(1.74±0.44)和对照组的(1.00±0.02),且无转移组高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论FN基因EDA片段在乳腺癌的转移过程中起到了重要的作用,其与癌细胞的转移潜能密切相关。

纤维连接蛋白基因EDA片段在腺样囊性癌细胞中的表达

目的通过纤维连接蛋白(FN)基因EDA片段在不同转移潜能腺样囊性癌(SACC)细胞中的表达,研究EDA片段与SACC细胞生物学特性的关系。方法应用免疫组织化学及半定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法,分别从蛋白水平及mRNA水平对高、低转移SACC细胞株中FN基因EDA片断进行检测。结果高转移SACC细胞株(SACC-LM)中FN基因EDA片段蛋白及mRNA的表达高于低转移细胞株(SACC-83)。结论FN基因EDA片段的表达程度与SACC细胞不同转移潜能密切相关。

皮肤成纤维细胞纤维连接蛋白及其EDA、EDB表达与损伤时间的关系

目的研究培养的皮肤成纤维细胞纤维连接蛋白(fibronectin,FN)及其可变剪接片段EDA、EDB在损伤后的mRNA水平,为推断早期损伤时间提供参考指标。方法培养人体皮肤成纤维细胞,换无血清培养液培养24h后,采用划痕法制作细胞损伤模型,损伤后0、0.5、1、2、6、24h收集细胞,抽提RNA,实时RT-PCR定量检测总FN及其EDA、EDB的mRNA水平的变化。结果皮肤成纤维细胞中总FN及其EDA、EDB的mRNA水平随损伤时间的延长而升高,EDA mRNA在损伤后1h达到高峰,EDB mRNA在损伤后6h达到高峰,FN mRNA在损伤后2h达到高峰;在损伤1h后总FN及其EDA、EDB的mRNA表达变化随时间的延长而呈现一种不断上升的趋势。结论纤维连接蛋白EDA、EDB可作为早期损伤时间推断的较理想的参考指标。

重组纤维连接蛋白EDA-EDB融合蛋白的分子克隆

目的构建重组pET28a-EDA-EDB质粒,制备重组纤维连接蛋白EDA-EDB融合蛋白。方法采用基因重组技术,将EDA、EDB基因片段连接,再将该重组基因插入pET28a表达载体,表达重组融合EDA-EDB蛋白后,利用6×His/Ni-NTA纯化系统进行纯化,免疫印迹法检测。结果成功连接EDA、EDB基因片段,重组pET28a-EDA-EDB质粒;在大肠杆菌BL21(DE3)中高度表达重组蛋白,获得较纯的重组蛋白,免疫印迹法证实为FN的组分。结论EDA-EDB重组蛋白能采用pET系统在大肠杆菌中表达,并可通过6×His/Ni-NTA纯化系统进行纯化而获得免疫原。

纤维连接蛋白降解片段(MAD2)单抗的制备及肝细胞癌患者血浆含量检测

应用杂交瘤技术制备了纤维连接蛋白 (FN)降解片段MAD2的单克隆抗体 (McAb) ;建立了MAD2检测的双抗体夹心ELISA法 ;对 2 2 7例肝细胞癌 (HCC)、76例肝转移癌 (HMC)、98例消化道癌 (ACC)、15 6例慢性肝病 (CLD)患者和 48例健康人体血浆MAD2含量进行测定。结果显示 ,制备的MAD2McAb属IgG1,与FN无交叉反应 ;HCC组血浆MAD2含量均值与CLD组、HMC组、ACC组和正常对照组比较差异有显著性意义 (分别P <0 0 1) ,以HCC患者的最低MAD2值作临界值时 ,仅 13 5 %CLD、6 6 %HMC和 4 1%ACC超过此值 ,而健康人体血浆MAD2含量均低于临界值 ;6 5例血清AFP正常的HCC患者其血浆平均MAD2值仍明显高于非HCC肿瘤、CLD患者和正常对照。结合以前的结果 ,进一步表明 ,血浆MAD2检测可作为HCC诊断的新标志物 ,并可与AFP相互补充 ;MAD2 McAb的制备使MAD2的检测变得易行。

纤维连接蛋白Ⅲ_(CS)片段的剪接、表达以及与创伤修复的关系

纤维连接蛋白在创伤愈合中具有重要的作用,其基因在三个区域进行可变剪接,分别命名为EⅢA,EⅢB和ⅢCS。它们的功能仍有待于研究。本文就纤维连接蛋白的可变剪接片段Ⅲcs的生物学活性及其在法医学中的应用展望做一粗浅的探讨。

纤维连接蛋白降解片段(MAD_2)单克隆抗体的制备及肝细胞癌患者血浆含量检测

为建立纤维连接蛋白（FN）降解片段MAD2

多西环素在纤维连接蛋白诱导髓核细胞退变过程中的作用

背景:多西环素在阻止间盘退变方面有一定的作用,但是其在椎间盘中抑制基质金属蛋白酶的机制并未完全阐明。目的:从分子内信号传导角度采用细胞实验来阐明多西环素抑制间盘内基质金属蛋白酶的作用机制。方法:体外培养人间盘髓核细胞,在培养液中加入相对分子质量为45 000纤维连接蛋白片段制造退变模型。在退变模型中按照不同作用时间及不同作用浓度分组,均通过Western blot方法检测各组Ⅱ型胶原和基质金属蛋白酶13蛋白的表达情况。然后在10 mg/L多西环素作用24 h后,Western blot方法测定各组ERK1/2、p-ERK1/2、P38、p-P38、JNK、p-JNK蛋白表达水平,并根据以上实验结果选择ERK及JNK通路抑制后,Western blot检测多西环素对MAPK通路蛋白表达的影响。结果与结论:(1)纤维连接蛋白可以诱导髓核细胞退变,表现为基质金属蛋白酶13表达增加、Ⅱ型胶原表达降低。多西环素可以抑制纤维连接蛋白诱导的退变髓核细胞基质金属蛋白酶13的表达,但并不呈时间依赖性和剂量依赖性;(2)多西环素作用于经纤维连接蛋白诱导的髓核细胞后可以抑制其ERK1/2及JNK磷酸化,双重抑制有效地阻断了ERK1/2及JNK在髓核细胞中的激活,与多西环素或MAPK抑制剂单独作用相比,这种联合作用协同地增强了对ERK及JNK磷酸化的抑制作用。因此多西环素可能通过阻断ERK1/2及JNK在髓核细胞中的激活来抑制金属基质蛋白酶表达,进而减少细胞外基质降解,具有预防和治疗间盘退变的潜在作用。

纤维粘连蛋白片段真核表达载体pcDNA3.1(+)-EDA的构建

目的构建纤维粘连蛋白(fibronectin,FN)基因的EDA外显子的真核表达载体,以研究EDA对涎腺腺样囊性癌(slivary adenoid cystic carcinoma,SACC)生物学行为的影响。方法以RT-PCR技术从口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma)细胞株KB中扩增出外显子EDA,克隆入pcDNA3.1(+)真核表达载体,用PCR和限制性内切酶酶切、DNA测序鉴定真核表达载体pcDNA3.1(+)-EDA。结果PCR、酶切、DNA测序鉴定证明成功构建了pcDNA3.1(+)-EDA真核表达载体,DNA测序显示重组质粒含有与EDA片段基因序列完全相等的基因。结论成功构建了纤维粘连蛋白(fibronectin,Fn)基因的EDA外显子的真核表达载体pcDNA3.1(+)-EDA。

纤维粘连蛋白EDA片段抑制P53核转位调控肠癌SW480细胞凋亡

目的探讨P53在纤维粘连蛋白EDA片段(fibronectin extra domain A,FN-EDA)调控结肠癌细胞凋亡中的作用及机制。方法基因集富集分析法分析结直肠癌基因芯片EDA高表达组(EDA_high)与EDA低表达组(EDA_low)基因富集情况;干扰结肠癌SW480细胞FN-EDA表达,流式细胞术检测各组凋亡,RT-PCR检测各组凋亡相关基因RNA水平,Western blot检测各组凋亡相关蛋白表达及P53蛋白磷酸化修饰,免疫荧光检测P53亚细胞分布,蛋白质免疫共沉淀检测P53与FN-EDA相互作用。结果结肠癌FN-EDA低表达组凋亡相关基因(KEGG_APOPTOSIS)富集上调(P<0.05);与对照组相比,FN-EDA敲低组凋亡率增加(P<0.05),P53、BAX、P21、Cleaved Caspase-3蛋白表达上调,P53蛋白Ser15、Ser37、Ser392磷酸化水平上调,核内转位增加。FN-EDA敲低组细胞转染FN-EDA过表达慢病毒后,凋亡率降低(P<0.05),P53蛋白Ser15、Ser37磷酸化水平下调,核内转位减少;蛋白质免疫共沉淀检测发现P53与FN-EDA具有相互作用。结论纤维粘连蛋白EDA片段通过与P53相互作用抑制P53磷酸化和核转位,调控P53-BAX通路抑制结肠癌SW480细胞凋亡。

人皮肤成纤维细胞早期损伤后EDA-FN表达与损伤时间的关系

目的探讨培养的人体皮肤成纤维细胞损伤后纤维连接蛋白EDA片段的表达情况与损伤时间的关系。方法培养人体皮肤成纤维细胞,利用单克隆抗体进行免疫组织化学染色及Western检测。结果培养中的人体成纤维细胞可以微量表达EDA,随损伤时间延长而表达量增加。结论EDA片段表达变化可以作为法医学早期损伤时间推断的比较理想的指标。

中波紫外线对皮肤成纤维细胞纤维连接蛋白及EDA、EDB表达的影响

目的探讨中波紫外线UVB照射对皮肤成纤维细胞纤维连接蛋白(fibronectin,FN)及其选择性剪接片段EDA、EDB的影响。方法用RT-q PCR法检测UVB照射后成纤维细胞各时相FN及其EDA、EDB片段的mRNA表达水平。结果 UVB100m J/cm2照射后成纤维细胞FN及FN-EDA、EDB的mRNA表达均有下降。照射后1、2、4、8、12、24h组与对照组(0h)比较,差异有统计学意义(P均<0.05)。结论中波紫外线UVB下调皮肤成纤维细胞FN及FN-EDA、EDB mRNA表达,在UVB引起的皮肤成纤维细胞急性光损伤过程中,FN及FN-EDA、EDB可能发挥着重要作用。