层黏连蛋白基质在肿瘤细胞行为及血管生成拟态形成中的机制研究

血管生成拟态(vasculogenic mimicry,VM)描述了肿瘤细胞在无内皮细胞参与下形成新的微循环模式的过程。临床上,VM与侵袭性表型和较差的患者生存率有关。以前的许多研究都集中在血管生成因子方面;最近的研究发现,肿瘤细胞周围的细胞外基质对肿瘤发展具有显著调控作用。细胞外基质蛋白质可能授予肿瘤细胞形成血管生成拟态的能力。在本研究中,我们研究了层黏连蛋白(laminin,LN)基质在黑色素瘤和骨肉瘤的肿瘤进程和VM形成中的作用。相较于Control组,高浓度LN基质培养下,肿瘤细胞的黏附、增殖、迁移、干性表达和VM形成能力显著增强;利用免疫荧光染色和实时定量PCR分析其内在的分子机制,结果显示:与对照组相比,层黏连蛋白基质可以显著促进肿瘤细胞CD133的表达,同时E-钙黏着蛋白I的mRNA表达下调(P<0.05),而Integrin、N-cadherin、Vimentin以及Snail、Twist的mRNA表达上调(P<0.05)。以上研究结果表明,层黏连蛋白促进肿瘤细胞的黏附、增殖、迁移和VM形成能力,并揭示了VM形成的潜在机制,为后期抗血管生成拟态的诊疗提供了新的思路。

生长抑素联合奥美拉唑对肝硬化上消化道出血疗效及前胶原Ⅲ型层黏连蛋白和血管紧张素转化酶水平影响

目的 观察生长抑素联合奥美拉唑对肝硬化上消化道出血疗效及对患者前胶原Ⅲ型(PCⅢ)、层黏连蛋白(LN)和血管紧张素转化酶(ACE)水平的影响。方法 前瞻性选取2022年3月至2023年3月我院收治的112例肝硬化上消化道出血患者,根据有无使用生长抑素随机分为生长抑素组和奥美拉唑组,各56例。2组均予西医常规治疗,奥美拉唑组予奥美拉唑肠溶治疗,生长抑素组在奥美拉唑组的基础上加予生长抑素辅助治疗。2组均连续治疗3 d。比较2组患者的凝血功能指标、临床疗效、住院时间、止血时间、出血量、肝功能Child-Pugh评分、血红蛋白(Hb)、PCⅢ、LN和ACE水平。结果 治疗后,2组与治疗前相比,纤维蛋白原(FIB)、血小板(PLT)水平均升高,且生长抑素组低于奥美拉唑组;血浆凝血酶原时间(PT)、部分凝血活酶时间(APTT)水平均下降,且生长抑素组低于奥美拉唑组;LN、PCⅢ、ACE、门静脉内径(PVD)、肝功能Child-Pugh评分指标均较本组治疗前降低,且生长抑素组低于奥美拉唑组;出血量、止血时间及住院时间均低于奥美拉唑组;生长抑素组组患者综合评估后总有效率92.9%高于奥美拉唑组76.8%(均P<0.05),说明生长抑素组的治疗效果优于奥美拉唑组。2组不良反应发生率对比,差异无统计学意义(χ^(2)=0.14,P=0.714)。结论 生长抑素联合奥美拉唑能够改善肝功能指标,降低PCⅢ、LN等肝硬化上消化道出血标志物,临床疗效显著。

红芪有效部位对肺间质纤维化模型大鼠肺组织胶原面积、透明质酸及层黏连蛋白的影响

目的观察红芪对肺间质纤维化模型大鼠肺组织胶原面积、透明质酸(HA)及层黏连蛋白(LN)表达的影响,探讨其作用机制,并筛选红芪最佳有效部位。方法将144只SPF级Wistar大鼠随机分为空白组、模型组、强的松组,以及红芪多糖、黄酮、皂苷的高、中、低剂量组。采用气管滴注博莱霉素法建立肺纤维化模型,从造模后第2日起,各药物组分别给予相应剂量药物,每日1次,共28 d。Masson染色观察肺组织胶原纤维的变化,放射免疫法检测各组大鼠肺组织匀浆中HA、LN含量。结果与模型组比较,红芪黄酮各剂量组、红芪多糖低剂量组肺泡炎明显减轻。红芪黄酮低剂量组、红芪多糖中剂量组、红芪皂苷低剂量组肺组织胶原面积明显减小。与模型组比较,红芪多糖高剂量组、红芪黄酮各剂量组、红芪皂苷高剂量组HA含量明显下降。红芪多糖高剂量组,红芪黄酮中、低剂量组,红芪皂苷中、低剂量组LN含量明显下降。结论红芪多糖、黄酮、皂苷在适宜剂量下均能减轻肺泡炎症,抑制胶原纤维增生、沉积,降低肺组织中HA、LN含量,其中红芪黄酮效果较佳。

Ⅲ型前胶原、Ⅳ型胶原、层黏连蛋白和透明质酸酶在诊断肝纤维化程度中的应用

目的探讨在肝纤维化诊断中采用Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、Ⅳ型胶原(Ⅳ-C)、层黏连蛋白(LN)和透明质酸酶(HA)进行联合诊断的价值。方法选取2015年12月至2017年12月在该院就诊的病毒性肝炎及肝炎后肝硬化患者共80例(观察组)和80例健康献血者(对照组)作为研究对象。对所有研究对象采用化学发光法测定其血清PCⅢ、Ⅳ-C、LN以及HA指标,并与病理检查结果结合分析其与肝纤维化程度之间的关系。结果肝炎患者的血清PCⅢ、Ⅳ-C、LN以及HA指标显著升高,其中最高的为肝硬化患者;慢性肝炎患者的肝纤维化分期程度越严重,则PCⅢ、Ⅳ-C、LN以及HA检查结果水平越高,两者呈正相关关系,不同肝纤维化分期之间各指标的差异具有统计学意义(P<0.05)。结论血清PCⅢ、Ⅳ-C、LN以及HA水平与肝纤维化程度之间呈正相关关系,因此临床上可将血清PCⅢ、Ⅳ-C、LN以及HA指标作为反映肝纤维化严重程度的测量指标,在肝纤维化的早期诊断时作为重要的诊断依据。

川芎嗪对肺纤维化大鼠Ⅲ型胶原及层黏连蛋白的干预作用

目的研究川芎嗪注射液对博莱霉素A5致肺纤维化大鼠Ⅲ型胶原(Col-Ⅲ)及层黏连蛋白(LN)的干预作用。方法Wistar大鼠70只随机分为空白组、模型组、川芎嗪大剂量组(大剂量组)、川芎嗪中剂量组(中剂量组)、川芎嗪小剂量组(小剂量组)。除空白组外其他4组气管内注入博莱霉素A5造模,造模d2大、中、小剂量组每日开始腹腔注射川芎嗪注射液至28 d,剂量分别为250、150、40 mg/(kg.d)。检测d14、28时大鼠血清Col-Ⅲ、LN及d28时肺组织匀浆中以上指标,同时取肺组织行苏木精-伊红(HE)染色。结果肺纤维化大鼠d14、28时血清及肺组织匀浆Col-Ⅲ及LN水平明显升高,与空白组比较有显著差异(Pa<0.01);川芎嗪大、中剂量组能降低肺纤维化大鼠血清及肺组织匀浆中Col-Ⅲ及LN水平(P<0.01,0.05)。其中以川芎嗪大剂量组效果较为明显,川芎嗪小剂量组疗效较差。结论降低肺纤维化大鼠Col-Ⅲ及LN的水平,可能是川芎嗪注射液发挥治疗作用的机制之一。

层黏连蛋白和纤维连接蛋白对传代人晶状体上皮细胞生长和Cx43表达的影响

目的:观察层黏连蛋白(Ln)和纤维连接蛋白(Fn)对传代培养的人晶状体上皮细胞(hLECs)形态学和连接蛋白43(Cx43)表达的影响。方法:以层黏连蛋白(Ln)和纤维连接蛋白(Fn)处理培养皿表面,以倒置显微镜观察第3代培养的hLECs生长的形态,MTT法记录其生长曲线,免疫荧光法检测Cx43表达,比较两组表达阳性率的变化。结果:在层黏连蛋白处理组,传代细胞以典型的六角形上皮细胞形态为主,而纤维连接蛋白处理组则表现为以梭形的成纤维细胞为主。MTT实验显示,传代后4～7d纤维连接蛋白处理组细胞数多于层黏连蛋白处理组(P<0.05)。免疫荧光反应中,两组Cx43表达的阳性率有明显差别(23/28vs16/28,P<0.05)。结论:层黏连蛋白可以提供适宜hLECs保持上皮细胞状态的体外培养微环境,而纤维连接蛋白可以促进hLECs的增殖和分化。

皮肤低温储存后纤维连接蛋白和层黏连蛋白表达的研究

目的:观察细胞外基质中纤维连接蛋白(FN)、层黏连蛋白(LN)在不同温度储存皮肤组织中的分布,以探讨其与皮肤冷冻损伤的关系。方法:用FN、LN抗体对5种储存条件下的皮肤作免疫组化染色,用图像分析仪测定表皮组织中的含量,并用H.E染色观察皮肤的组织结构变化。结果:与新鲜皮片组相比,-196℃H抗冻液中储存皮肤组织结构保存较好,FN、LN含量变化不明显,而4℃、-20℃、-80℃储存皮肤组织结构破坏明显,含量亦明显下降。结论:皮肤低温储存后冷冻损伤与细胞外基质中FN、LN破坏有关。

层黏连蛋白和纤维连接蛋白在小鼠肾小体发育中的表达

目的观察层黏连蛋白(LN)和纤维连接蛋白(Fn)在小鼠肾小体发育过程中的表达规律,探讨其与肾小体发生发育的关系及作用。方法采用免疫组织化学技术结合体视学方法定量检测LN和Fn的表达。结果胚龄12 d的胎鼠LN表达于输尿管芽周围,胚龄14 d始,在各期肾小体的基膜均有表达。体视学测量发现,随着肾小体的发育成熟,其阳性表达的面密度值逐渐增多。Fn在除逗号小体以外的各期肾小体的基底膜处均有表达。体视学测量结果显示其表达量逐渐增加。结论 LN和Fn在小鼠肾小体发育和成熟过程中发挥重要作用。

层黏连蛋白对人翼状胬肉成纤维细胞生长的抑制作用

目的:探讨层黏连蛋白对体外培养的人翼状胬肉成纤维细胞增殖的影响。方法:体外培养的第3代翼状胬肉成纤维细胞,接种于层黏连蛋白包被培养皿(Ln组)和空白培养皿(对照组)中,倒置显微镜观察细胞生长状态,MTT法检测细胞增殖状态,作出生长曲线;免疫荧光法检测α-SMA在细胞内的表达;RT-PCR法检测TGF-β1和cytokeratin mRNA的表达水平。结果:Ln组成纤维细胞数量少于对照组;3～7d,Ln组A570明显低于对照组(0.20vs0.28,0.22vs0.30,0.28vs0.34,0.31vs0.36,0.33vs0.36,P<0.05);α-SMA在对照组细胞内表达良好,在Ln组的表达受到抑制;与对照组相比,Ln组TGF-β1mRNA的表达下降,cytokeratin mR-NA表达增加。结论:层黏连蛋白能抑制翼状胬肉中成纤维细胞的增殖。

纤维蛋白原与层黏连蛋白对兔骨髓间充质干细胞在PEGDA支架中成骨作用的影响

目的探讨纤维蛋白原(FG)与层黏连蛋白(LN)对兔骨髓间充质干细胞(BMSCs)在PEGDA支架中成骨作用的影响。方法培养及扩增兔BMSCs至第3代,将BMSCs混入PEGDA-FG或PEGDA-LN凝胶中形成支架细胞复合物培养7d。检测接种前BMSCs、培养7d后PEGDA-FG细胞复合物和PEGDA-LN细胞复合物中成骨特异蛋白(Osx)、骨桥蛋白(OPN)、骨钙蛋白(OC)、Ⅱ型胶原(COLⅡ)、心肌素、过氧化物酶增殖体激活受体(PPARγ)及整合素α2、α5、α6水平。免疫组织化学法检测培养7d后PEGDA-FG或PEGDA-LN凝胶中心肌素、PPARγ、OPN的表达。结果 PEG-DA-LN支架的Osx、OPN、OC蛋白表达水平显著高于0d时(P均<0.05),PEGDA-FG支架的OPN、OC蛋白表达水平也显著高于0d时(P均<0.05)。PEGDA-LN支架中的OPN水平显著高于PEGDA-FG组(P<0.05)。PEGDA-FG和PEGDA-LN支架中心肌素、PPARγ、COLⅡ蛋白表达与0d时相比,差异均无统计学意义(P均>0.05)。PEGDA-LN支架中整合素α2水平显著高于0d时(P<0.05),PEGDA-FG支架中整合素α6水平显著高于0d时(P<0.05)。免疫组织化学染色可见PEGDA-FG和PEGDA-LN支架中OPN蛋白表达明显。结论 FG和LN在PEGDA三维支架中能够有效促进兔BMSCs向成骨细胞分化。

罗格列酮对环孢素A作用下大鼠肾脏成纤维细胞转化生长因子-β1和层黏连蛋白表达的影响

目的:观察罗格列酮(RGZ)对环孢素A作用下大鼠肾脏成纤维细胞(NRK)转化生长因子-β1(TGF-β1)和层黏连蛋白(FN)表达的影响,探讨罗格列酮对环孢素A肾毒性的改善作用及其机制。方法:体外培养NRK细胞,在无血清DMEM低糖培养基同步化24h后,随机分为7组:正常对照组,CsA0.25mg/L组,CsA0.5mg/L组,CsA1.0mg/L组,CsA2.0mg/L组,CsA1.0mg/L加RGZ10μmol/L组,CsA1.0mg/L加RGZ15μmol/L组,继续培养24h后,收集细胞,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测各组细胞中TGF-β1mRNA表达,用蛋白印迹(Western blotting)方法检测FN蛋白的表达。结果:不同质量浓度的CsA均可促进TGF-β1 mRNA和FN蛋白表达(P<0.05),罗格列酮能显著下调CsA引起的TGF-β1 mRNA和FN蛋白的高表达。结论:罗格列酮可通过下调CsA引起的TGF-β1和FN的高表达,抑制CsA导致的肾脏成纤维细胞外基质的蓄积。

奥曲肽对肺结核大咯血患者血清前白蛋白、白蛋白、层黏蛋白及纤维粘连蛋白的含量变化临床研究

目的探讨奥曲肽对肺结核大咯血患者的血清前白蛋白、白蛋白、层黏蛋白及纤维粘连蛋白的影响。方法 89例肺结核大咯血患者按不同治疗方法分为对照组和观察组。对照组44例,进行垂体后叶素治疗;观察组45例,采用奥曲肽进行治疗。对照组及治疗组均通过全自动生化仪等仪器检测凝血纤溶系统、白蛋白、血清前白蛋白、层黏蛋白的含量。结果相比于对照组,观察组的血清前白蛋白、白蛋白的含量有明显下降,层黏蛋白的含量相比于对照组也有所下降。结论奥曲肽作为治疗肺结核大咯血病症的药物,与对照组比较,能够有效改善涉及该病症的有关指标的含量,具有较好效果,尚需今后进一步深入研究。

层黏连蛋白和纤维连接蛋白在肾发育中的表达

目的：观察层黏连蛋白（LN）和纤维连接蛋白（FN）在小鼠肾发育中的时空性表达，探讨其与肾发育的关系。方法：采用免疫组织化学技术，结合免疫印迹法，检测不同胚龄及生后日龄小鼠肾组织LN和FN的表达及其含量变化。结果：LN在输尿管芽、各期肾小体、肾小管及集合管的基底膜处均有表达，并随肾的发育其表达量逐渐增加；FN在除逗号小体以外的各期肾小体、肾小管和集合管的基底膜处均有表达，随肾的发育其表达量逐渐增加。结论：LN和FN可能对小鼠肾发育以及成熟肾各结构的维持起重要作用。

层黏连蛋白受体1单克隆抗体抑制博莱霉素诱导的大鼠肺纤维化

目的研究层黏连蛋白受体1(LAMR1)单克隆抗体(mAb)干预博莱霉素诱导的大鼠肺纤维化。方法雄性SD大鼠72只,随机分为LAMR1 mAb组(L)、对照组(C)和模型组(M)3组,气管内滴入博莱霉素(5 mg/kg体质量)制备肺纤维化模型。3组分别给予LAMR1 mAb、地塞米松、生理盐水3次/周,腹腔注射,于第7、14、28天处死8只大鼠。HE染色观察肺纤维化程度;免疫组化方法检测肺组织中表面活性物质A(SP-A)的含量;ELISA测定血清中羟脯氨酸(Hyp)的含量;PCR方法检测肺组织中基质金属蛋白酶9(MMP-9)及转化生长因子β1(TGF-β1)mRNA的含量。结果各时间段,M组肺纤维化程度及Hyp含量均高于C组和L组,SP-A的含量均低于其余两组,M组肺组织的MMP-9和TGF-β1的mRNA的含量明显高于其余两组。结论 LAMR1 mAb可明显减轻博莱霉素诱导的肺纤维化程度。

血清单胺氧化酶及透明质酸、层黏连蛋白测定对肝纤维化诊治的临床意义

目的：探讨血清单胺氧化酶及透明质酸、层黏连蛋白联合测定对早期诊断肝纤维化的特殊临床意义。方法：采用AU5800全自动生化分析仪检测血清单胺氧化酶的含量，采用放射免疫法检测透明质酸、层黏连蛋白的含量。结果：慢性肝炎肝纤维化早期时血清单胺氧化水平高于正常对照组，其异常检出率高于透明质酸、层黏连蛋白，阳性率差异有统计学意义（P〈0.01）。结论：血清单胺氧化酶、是反映早期肝纤维化的一项敏感而可靠的指标，血清单胺氧化酶、及透明质酸、层黏连蛋白联合检测有助于慢性肝炎肝纤维化早期诊断、疗效观察与预后判断。

层黏连蛋白在耐药性癫痫苔藓纤维发芽发生发展中的作用

癫痫是多种原因引起的以中枢神经元反复异常放电为特征的综合征,部分患者对常规治疗效果不佳,发展为耐药性癫痫。长期痫性损伤可导致海马齿状回发生苔藓纤维出芽及异位突触联系,形成异常的兴奋性环路,从而增高颗粒细胞的敏感性,促进自发性癫痫发作的反复产生。层黏连蛋白与神经异常再生密切相关,是细胞外基质的重要成分,具有调节神经细胞生长、黏附、迁移和信号传导的功能;其是神经元异常生长、胶质细胞增生与苔藓纤维发芽过程中的关键因素。苔藓纤维发芽是耐药性癫痫患者脑组织中异常神经网络形成的基础,层黏连蛋白在耐药性癫痫的发生、发展中扮演重要角色。

健脾补土法对大鼠脑缺血再灌注后层黏连蛋白降解的影响

目的探讨健脾补土法对大鼠脑缺血再灌注后神经细胞周围层黏连蛋白(LN)的降解机制及其脑保护作用。方法 38只大鼠随机分为:假手术组8只,模型组10只,健脾补土传统汤剂组10只,健脾补土超微剂型组10只,大脑中动脉栓塞再通法建立脑缺血再灌注模型。进行神经功能症状评分,脑组织病理形态学观察,采用TUNEL法检测凋亡神经元,免疫组织化学法检测LN和基质金属蛋白酶9(MMP-9)阳性表达。结果与假手术组比较,模型组神经功能症状评分、细胞凋亡指数、MMP-9阳性细胞表达数明显升高,LN表达明显降低(P<0.01)。与模型组比较,健脾补土传统汤剂组和健脾补土超微剂型组神经功能症状评分、细胞凋亡指数、MMP-9阳性细胞表达数明显降低,LN表达明显升高(P<0.05,P<0.01)。结论 LN降解在脑缺血再灌注损伤中起重要作用,健脾补土法可能通过抑制MMP-9和减少LN降解减轻缺血再灌注所致神经元损伤。

胃癌组织中层黏连蛋白受体67LR和半乳糖凝集素-3蛋白的表达

目的:了解胃癌组织中67000层黏连蛋白受体(67LR)和半乳糖凝集素-3(Galectin-3)蛋白的表达情况。方法:用免疫组织化学SP法检测82例胃癌组织和20例胃癌手术远端切缘正常胃组织中67LR蛋白和Galectin-3蛋白的表达,并分析其与胃癌患者临床病理特征的关系。结果:胃癌组织中67LR蛋白的阳性表达率为59.8%,Galectin-3蛋白的阳性表达率为84.1%,均高于相应的正常胃黏膜组织中的阳性表达率(30.0%和35.0%)。胃癌组织中67LR与Galectin-3蛋白的阳性表达率与患者的年龄、性别、Lauren分型无关;67LR蛋白的阳性表达率与胃癌的组织分化程度有关(P<0.05),Galectin-3蛋白的阳性表达率与胃癌的组织分化程度无关;有淋巴结转移的癌组织中两者的阳性表达率均高于无淋巴结转移组(P<0.05);随着肿瘤浸润深度的增加,两者的阳性表达率均明显增高(P<0.05)。胃癌组织中67LR与Galectin-3的表达呈正相关(P<0.05)。结论:67LR及Galectin-3蛋白阳性表达率与胃癌的侵袭、转移密切相关。