红芪有效部位对肺间质纤维化模型大鼠肺组织胶原面积、透明质酸及层黏连蛋白的影响

目的观察红芪对肺间质纤维化模型大鼠肺组织胶原面积、透明质酸(HA)及层黏连蛋白(LN)表达的影响,探讨其作用机制,并筛选红芪最佳有效部位。方法将144只SPF级Wistar大鼠随机分为空白组、模型组、强的松组,以及红芪多糖、黄酮、皂苷的高、中、低剂量组。采用气管滴注博莱霉素法建立肺纤维化模型,从造模后第2日起,各药物组分别给予相应剂量药物,每日1次,共28 d。Masson染色观察肺组织胶原纤维的变化,放射免疫法检测各组大鼠肺组织匀浆中HA、LN含量。结果与模型组比较,红芪黄酮各剂量组、红芪多糖低剂量组肺泡炎明显减轻。红芪黄酮低剂量组、红芪多糖中剂量组、红芪皂苷低剂量组肺组织胶原面积明显减小。与模型组比较,红芪多糖高剂量组、红芪黄酮各剂量组、红芪皂苷高剂量组HA含量明显下降。红芪多糖高剂量组,红芪黄酮中、低剂量组,红芪皂苷中、低剂量组LN含量明显下降。结论红芪多糖、黄酮、皂苷在适宜剂量下均能减轻肺泡炎症,抑制胶原纤维增生、沉积,降低肺组织中HA、LN含量,其中红芪黄酮效果较佳。

Ⅲ型前胶原、Ⅳ型胶原、层黏连蛋白和透明质酸酶在诊断肝纤维化程度中的应用

目的探讨在肝纤维化诊断中采用Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、Ⅳ型胶原(Ⅳ-C)、层黏连蛋白(LN)和透明质酸酶(HA)进行联合诊断的价值。方法选取2015年12月至2017年12月在该院就诊的病毒性肝炎及肝炎后肝硬化患者共80例(观察组)和80例健康献血者(对照组)作为研究对象。对所有研究对象采用化学发光法测定其血清PCⅢ、Ⅳ-C、LN以及HA指标,并与病理检查结果结合分析其与肝纤维化程度之间的关系。结果肝炎患者的血清PCⅢ、Ⅳ-C、LN以及HA指标显著升高,其中最高的为肝硬化患者;慢性肝炎患者的肝纤维化分期程度越严重,则PCⅢ、Ⅳ-C、LN以及HA检查结果水平越高,两者呈正相关关系,不同肝纤维化分期之间各指标的差异具有统计学意义(P<0.05)。结论血清PCⅢ、Ⅳ-C、LN以及HA水平与肝纤维化程度之间呈正相关关系,因此临床上可将血清PCⅢ、Ⅳ-C、LN以及HA指标作为反映肝纤维化严重程度的测量指标,在肝纤维化的早期诊断时作为重要的诊断依据。

AT2R基因可调控表达对体外培养VSMC纤维黏连蛋白表达的影响

目的利用Dox-on可调控哺乳动物表达系统,建立起了受四环素类似物Doxycycline(Dox)紧密调控、表达AT2R基因的双重稳定血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMC),在此基础上对纤维黏连蛋白(fibronectin,FN)的表达受AngⅡ及其受体拮抗剂的影响进行研究。方法建立Dox可调控表达AT2R基因的双重稳定大鼠VSMC细胞,观察该VSMC细胞中AT2R受调控表达情况,以及血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)及其1型、2型受体拮抗剂干预上述细胞后FN的mRNA及蛋白表达情况变化。结果Dox-on可调控哺乳动物表达系统可成功介导AT2R基因在原代培养大鼠主动脉VSMC的表达,该表达受到Dox给予/去除的紧密调控;Dox干预可在48h内迅速诱导该VSMC细胞表达AT2R,AT2R表达在Dox干预后72h进一步增强(P<0.01)。AT2R基因的可调控表达抑制由于AngⅡ干预VSMC后引起FN表达的增强(P<0.01)。这一作用被AT1R拮抗剂CV-11974进一步增强(P<0.01);而被加入AT2R拮抗剂干预而取消;同时给予AT1R拮抗剂和AT2R拮抗剂时FN的表达与基础状态时的情况一致。结论AngⅡ干预增强FN的表达,该作用是通过AT1R介导的;经Dox诱导表达AT2R基因可以明显抑制这一生物学作用,说明在这一生物学效应上,AT2R具有与AT1R相拮抗的生物学功能。

基质金属蛋白酶-9、Ⅲ型胶原、纤维黏连蛋白在胎膜早破发病机制中的作用

目的:观察并检测基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、Ⅲ型胶原、纤维黏连蛋白(FN)在胎膜早破孕妇血清及胎膜组织中的表达水平,探讨其参与胎膜早破的发病机制。方法:40例胎膜早破孕妇,其中未足月胎膜早破组(p PROM组,20例),足月胎膜早破组(tPROM组,20例),另外选取同期正常足月妊娠孕妇20名作为对照组。应用酶联免疫吸附试验及免疫组织化学方法检测血清及胎膜组织中MMP-9、Ⅲ型胶原、FN的表达水平,并对测定结果进行相关性分析。结果:3组孕妇血清MMP-9、Ⅲ型胶原、FN含量差异均有统计学意义(P<0.01),其中,tPROM组MMP-9显著高于p PROM组,后者又显著高于对照组(P<0.01);p PROM组Ⅲ型胶原、FN水平显著低于tPROM组,而后者又显著低于对照组(P<0.01)。MMP-9在p PROM组和tPROM组胎膜组织中的阳性表达率均高于对照组(P<0.05)。MMP-9在tPROM组胎膜组织中的阳性表达率高于p PROM组,但差异无统计学意义(P>0.05)。Ⅲ型胶原和FN在p PROM组和tPROM组胎膜组织中的阳性表达率均低于对照组(P<0.05)。Ⅲ型胶原和FN在tPROM组胎膜组织中的阳性表达率低于p PROM组,但差异无统计学意义(P>0.05)。在p PROM组和tPROM组中,MMP-9和Ⅲ型胶原的表达水平均呈负相关关系(r=-0.874,r=-0.988,P<0.01),MMP-9与FN的表达水平均呈负相关关系(r=-0.760,r=-0.875,P<0.01),Ⅲ型胶原与FN的表达水平均呈正相关关系(r=0.529,r=0.876,P<0.05)。在胎膜组织中,MMP-9和Ⅲ型胶原的表达水平呈负相关关系(r=-0.468,P<0.01),MMP-9和FN的表达水平呈负相关关系(r=-0.493,P<0.01),Ⅲ型胶原和FN的表达水平呈正相关关系(r=0.885,P<0.01)。结论:MMP-9、Ⅲ型胶原、FN参与胎膜早破的发生,孕妇血清及胎膜组织中MMP-9含量升高、Ⅲ型胶原和FN含量降低,这些因素均可能导致胎膜早破的发生。

荔枝核总黄酮对高糖联合肿瘤坏死因子诱导大鼠肾小球系膜细胞纤维黏连蛋白、Ⅳ型胶原蛋白表达的影响

目的观察荔枝核总黄酮(total flavonoids of litchi,TFL)对高糖联合TNF-α诱导大鼠肾小球系膜细胞分泌纤维黏连蛋白(FN)、Ⅳ型胶原(ColⅣ)蛋白表达的影响。方法以大鼠肾小球系膜细胞(HBZY-1)为研究对象,用不同浓度荔枝核总黄酮干预高糖联合TNF-α诱导的大鼠肾小球系膜细胞,作用48 h后,采用酶联免疫分析法(ELISA)和细胞免疫组化法检测HBZY-1表达FN、ColⅣ蛋白情况。结果高糖联合TNF-α刺激大鼠肾小球系膜细胞48 h,FN、ColⅣ蛋白表达明显增高〔(59.946±0.307)vs.(66.825±0.929);(46.445±0.653)vs.(59.443±4.102),P<0.01〕,经荔枝核总黄酮干预后FN、ColⅣ蛋白表达明显降低〔(66.825±0.929)vs.(59.496±1.258)、(62.553±1.022)、(52.541±0.608);(59.443±4.102)vs.(51.252±3.676)、(47.742±1.396)、(48.438±0.207)、(47.046±1.810),P<0.01〕。结论高糖联合肿瘤坏死因子能够促进大鼠肾小球系膜细胞纤维黏连蛋白、Ⅳ型胶原蛋白的表达,且荔枝核总黄酮干预后FN、ColⅣ蛋白表达明显降低,提示荔枝核总黄酮干预糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)肾纤维化作用的部分机制可能与下调纤维黏连蛋白、Ⅳ型胶原蛋白的表达有关。

皮肤低温储存后纤维连接蛋白和层黏连蛋白表达的研究

目的:观察细胞外基质中纤维连接蛋白(FN)、层黏连蛋白(LN)在不同温度储存皮肤组织中的分布,以探讨其与皮肤冷冻损伤的关系。方法:用FN、LN抗体对5种储存条件下的皮肤作免疫组化染色,用图像分析仪测定表皮组织中的含量,并用H.E染色观察皮肤的组织结构变化。结果:与新鲜皮片组相比,-196℃H抗冻液中储存皮肤组织结构保存较好,FN、LN含量变化不明显,而4℃、-20℃、-80℃储存皮肤组织结构破坏明显,含量亦明显下降。结论:皮肤低温储存后冷冻损伤与细胞外基质中FN、LN破坏有关。

层黏连蛋白和纤维连接蛋白在小鼠肾小体发育中的表达

目的观察层黏连蛋白(LN)和纤维连接蛋白(Fn)在小鼠肾小体发育过程中的表达规律,探讨其与肾小体发生发育的关系及作用。方法采用免疫组织化学技术结合体视学方法定量检测LN和Fn的表达。结果胚龄12 d的胎鼠LN表达于输尿管芽周围,胚龄14 d始,在各期肾小体的基膜均有表达。体视学测量发现,随着肾小体的发育成熟,其阳性表达的面密度值逐渐增多。Fn在除逗号小体以外的各期肾小体的基底膜处均有表达。体视学测量结果显示其表达量逐渐增加。结论 LN和Fn在小鼠肾小体发育和成熟过程中发挥重要作用。

层黏连蛋白对人翼状胬肉成纤维细胞生长的抑制作用

目的:探讨层黏连蛋白对体外培养的人翼状胬肉成纤维细胞增殖的影响。方法:体外培养的第3代翼状胬肉成纤维细胞,接种于层黏连蛋白包被培养皿(Ln组)和空白培养皿(对照组)中,倒置显微镜观察细胞生长状态,MTT法检测细胞增殖状态,作出生长曲线;免疫荧光法检测α-SMA在细胞内的表达;RT-PCR法检测TGF-β1和cytokeratin mRNA的表达水平。结果:Ln组成纤维细胞数量少于对照组;3～7d,Ln组A570明显低于对照组(0.20vs0.28,0.22vs0.30,0.28vs0.34,0.31vs0.36,0.33vs0.36,P<0.05);α-SMA在对照组细胞内表达良好,在Ln组的表达受到抑制;与对照组相比,Ln组TGF-β1mRNA的表达下降,cytokeratin mR-NA表达增加。结论:层黏连蛋白能抑制翼状胬肉中成纤维细胞的增殖。

姜黄素调节纤维黏连蛋白整合素途径增强Raji细胞化疗敏感性的研究

目的:研究纤维黏连蛋白(FN)整合素途径在调节淋巴瘤细胞对化疗药物敏感性中的作用及姜黄素体外增敏淋巴瘤细胞的作用及其机制。方法:采用四甲基噻唑蓝(MTT)法检测阴性对照组、姜黄素(Cur)组、阿霉素(ADR)组、Cur+ADR组、FN+ADR组、β1整合素抗体(anti-integrin)+ADR组、FN+anti-integrin+ADR组、Cur+FN+ADR组各组细胞的增殖抑制率。金氏公式进行联合用药分析。结果:Cur与ADR合用对Raji细胞呈单纯相加至增强效应。Raji细胞与FN作用后,再给予半数致死剂量的ADR(689.67μmol.L-1),细胞增殖抑制率为32.5%,与未加FN的Raji细胞(抑制率53.1%)相比,两组之间差异极具显著性(P<0.01)。将抗β1整合素抗体阻断Raji细胞上与FN结合的β1整合素,ADR对细胞的抑制率恢复至54.6%。Raji细胞株与FN和6.25μmol.L-1Cur同时培养,ADR对其的抑制率为59.2%,显著高于FN+ADR组(P<0.01)。结论:FN/β1整合素参与调节Raji细胞对ADR的敏感性,Cur可能通过下调整合素的表达抑制FN/β1整合素途径的激活来增加Raji细胞株对化疗药物的敏感性。

纤维蛋白原与层黏连蛋白对兔骨髓间充质干细胞在PEGDA支架中成骨作用的影响

目的探讨纤维蛋白原(FG)与层黏连蛋白(LN)对兔骨髓间充质干细胞(BMSCs)在PEGDA支架中成骨作用的影响。方法培养及扩增兔BMSCs至第3代,将BMSCs混入PEGDA-FG或PEGDA-LN凝胶中形成支架细胞复合物培养7d。检测接种前BMSCs、培养7d后PEGDA-FG细胞复合物和PEGDA-LN细胞复合物中成骨特异蛋白(Osx)、骨桥蛋白(OPN)、骨钙蛋白(OC)、Ⅱ型胶原(COLⅡ)、心肌素、过氧化物酶增殖体激活受体(PPARγ)及整合素α2、α5、α6水平。免疫组织化学法检测培养7d后PEGDA-FG或PEGDA-LN凝胶中心肌素、PPARγ、OPN的表达。结果 PEG-DA-LN支架的Osx、OPN、OC蛋白表达水平显著高于0d时(P均<0.05),PEGDA-FG支架的OPN、OC蛋白表达水平也显著高于0d时(P均<0.05)。PEGDA-LN支架中的OPN水平显著高于PEGDA-FG组(P<0.05)。PEGDA-FG和PEGDA-LN支架中心肌素、PPARγ、COLⅡ蛋白表达与0d时相比,差异均无统计学意义(P均>0.05)。PEGDA-LN支架中整合素α2水平显著高于0d时(P<0.05),PEGDA-FG支架中整合素α6水平显著高于0d时(P<0.05)。免疫组织化学染色可见PEGDA-FG和PEGDA-LN支架中OPN蛋白表达明显。结论 FG和LN在PEGDA三维支架中能够有效促进兔BMSCs向成骨细胞分化。

乳腺癌血清纤维黏连蛋白、Ⅳ型胶原含量变化及临床意义

目的 探讨乳腺癌血清中纤维黏连蛋白 (FN )与Ⅳ型胶原 (Ⅳ -C)含量变化及其临床意义。方法 采用放射免疫法(RIA )测定 3 0例乳腺癌和 2 0例良性乳腺病变患者血清中FN、Ⅳ -C的含量。结果 乳腺癌患者血清中FN与Ⅳ -C含量明显高于良性乳腺病变组 (P <0 .0 5 )和健康对照组 (P <0 .0 5 ) ;而良性乳腺病变组与健康对照组比较则无显著性差异 (P >0 .0 5 ) ;术前血清FN、Ⅳ -C含量增高者其术后含量较术前含量明显降低 (P <0 .0 5 )。结论 血清FN与Ⅳ -C含量的检测在乳腺癌诊断、鉴别诊断以及疗效和预后判断等方面具有重要临床意义。

纤维黏连蛋白碎片增加整合素α_5β_1在髓核细胞表达的研究

目的探讨纤维黏连蛋白碎片对整合素α5和β1亚基在兔间盘髓核细胞上表达的影响。方法体外分离和培养兔间盘髓核细胞,在培养液中加入纤维黏连蛋白碎片,通过免疫印迹技术、免疫荧光技术及逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)的方法,检测整合素α5和β1亚基的表达情况,同时比较Ⅱ型胶原蛋白、基质金属蛋白酶9和13(MMP9,13)的表达。结果加入纤维黏连蛋白碎片后,髓核细胞的整合素α5和β1亚基表达明显增加,而Ⅱ型胶原蛋白表达下降,MMP9和MMP13的表达增加。结论纤维黏连蛋白碎片可以诱导髓核细胞退变,同时可以增加整合素α5和β1亚基的表达。

CD44s与纤维黏连蛋白在子宫腺肌病在位和异位内膜组织中的表达

子宫腺肌病（adenomyosis）是子宫内膜间质、腺体的异常生长侵入肌层所致，以育龄妇女多见。目前病因仍未定论，保守治疗效果多不满意，故研究其发病的根本原因并寻找有效的治疗尤其重要。是否黏附分子异常表达更有利子宫内膜腺体通过子宫基底层，黏附种植于子宫肌层，目前国内外尚无报道。

牛血浆纤维黏连蛋白对大鼠成骨细胞增殖、分化及凋亡的影响

目的:研究外源性纤维黏连蛋白(fibronectin,FN)对大鼠成骨细胞增殖、分化及凋亡的影响,探讨应用FN治疗骨缺损性疾病的可行性。方法:酶消化法分离成骨细胞,通过细胞对染料Alamar蓝摄取检测细胞增殖,ELISA方法检测碱性磷酸酶活性,流式细胞术检测FN对成骨细胞细胞周期及凋亡的影响,Western印迹法检测FN作用后成骨细胞Bcl-2及Bax基因的蛋白表达变化。采用SPSS12.0软件包对实验数据进行单因素方差分析。结果:FN浓度为40μg/mL以上时,能促进大鼠成骨细胞的增殖,与对照组相比有显著性差异(P<0.05);FN能增加成骨细胞ALP活性,各组与对照组相比均有显著性差异(P<0.05),并有明显的剂量依赖性;不同浓度的FN作用成骨细胞后,可使处于DNA合成期(S期)的细胞百分率增加;增殖指数(proliferation index,PI)增加,细胞凋亡百分率减少,与对照组相比有显著性差异(P<0.05);FN作用后的细胞,Bcl-2基因的蛋白表达量增加,Bax基因的蛋白表达量减少,有剂量依赖性。结论:外源性FN能促进大鼠成骨细胞增殖、分化,使大鼠成骨细胞的DNA合成期(S期)的细胞百分比增加,同时抑制大鼠成骨细胞的凋亡,使大鼠成骨细胞胞质内Bcl-2基因的蛋白表达量增加,同时减少Bax基因的蛋白表达量。

罗格列酮对环孢素A作用下大鼠肾脏成纤维细胞转化生长因子-β1和层黏连蛋白表达的影响

目的:观察罗格列酮(RGZ)对环孢素A作用下大鼠肾脏成纤维细胞(NRK)转化生长因子-β1(TGF-β1)和层黏连蛋白(FN)表达的影响,探讨罗格列酮对环孢素A肾毒性的改善作用及其机制。方法:体外培养NRK细胞,在无血清DMEM低糖培养基同步化24h后,随机分为7组:正常对照组,CsA0.25mg/L组,CsA0.5mg/L组,CsA1.0mg/L组,CsA2.0mg/L组,CsA1.0mg/L加RGZ10μmol/L组,CsA1.0mg/L加RGZ15μmol/L组,继续培养24h后,收集细胞,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测各组细胞中TGF-β1mRNA表达,用蛋白印迹(Western blotting)方法检测FN蛋白的表达。结果:不同质量浓度的CsA均可促进TGF-β1 mRNA和FN蛋白表达(P<0.05),罗格列酮能显著下调CsA引起的TGF-β1 mRNA和FN蛋白的高表达。结论:罗格列酮可通过下调CsA引起的TGF-β1和FN的高表达,抑制CsA导致的肾脏成纤维细胞外基质的蓄积。

牛血浆纤维黏连蛋白抑制大鼠成骨细胞凋亡的实验研究

目的研究外源性牛血浆纤维黏连蛋白(fibronectin,FN)对体外培养的大鼠成骨细胞凋亡的影响。方法采用体外培养技术原代培养大鼠成骨细胞,Western blotting法检测FN作用后成骨细胞凋亡相关基因Bcl-2及Bax的蛋白表达变化。结果体外培养的成骨细胞呈梭形、三角形或多角形,多角形细胞有多个矢状突起,核卵圆形常居一侧,Ⅰ型胶原免疫组化染色呈阳性。FN作用后细胞凋亡相关基因Bcl-2的蛋白表达增强;Bax基因的蛋白表达减弱。结论一定浓度的牛血浆FN能够抑制成骨细胞凋亡,其机制之一是增强大鼠成骨细胞胞浆内Bcl-2基因所表达的蛋白,同时减弱Bax基因的蛋白表达。

层黏连蛋白和纤维连接蛋白在肾发育中的表达

目的：观察层黏连蛋白（LN）和纤维连接蛋白（FN）在小鼠肾发育中的时空性表达，探讨其与肾发育的关系。方法：采用免疫组织化学技术，结合免疫印迹法，检测不同胚龄及生后日龄小鼠肾组织LN和FN的表达及其含量变化。结果：LN在输尿管芽、各期肾小体、肾小管及集合管的基底膜处均有表达，并随肾的发育其表达量逐渐增加；FN在除逗号小体以外的各期肾小体、肾小管和集合管的基底膜处均有表达，随肾的发育其表达量逐渐增加。结论：LN和FN可能对小鼠肾发育以及成熟肾各结构的维持起重要作用。

外源性透明质酸对创面纤维黏连蛋白表达的影响

目的 探讨外源性透明质酸延迟创面愈合的作用机理。方法 成年日本大耳白兔 18只 ,建立兔耳皮肤创伤愈合模型 ,随机分 2 %透明质酸治疗组 (A组 )、1%透明质酸治疗组 (B组 )和磷酸盐缓冲液对照组 (C组 )。观察大体形态、组织学变化及平均愈合时间 ,未愈合创面面积及纤维黏连蛋白的表达情况。结果 ①三组平均愈合时间为 (11.7± 0 .6 )天 ,(11.3± 0 .6 )天 ,(10 .8± 1.0 )天 ,三组之间有显著差异 (P <0 .0 5 )。A、B组与C组比较各时间点未愈合面积也有显著差异 (P <0 .0 5 )。②组织学观察 ,A、B组胶原纤维较细、排列整齐。C组胶原纤维较粗大、排列紊乱。③纤维黏连蛋白的表达 ,A、B组纤维黏连蛋白的表达少于C组 (P <0 .0 1)。结论 ①外源性透明质酸抑制创面纤维黏连蛋白的表达是延迟创面愈合的原因之一。②透明质酸的这一作用与其浓度有依赖关系。

纤维黏连蛋白生物学特性与造血调控

纤维黏连蛋白是细胞外基质中的一种重要组成成份,具有多种生理功能,是体内的一种重要调整素,对造血细胞生成发育具有调节作用。笔者对纤维黏连蛋白的生化性质、生理功能及对造血细胞的调控作用作一综述。

高糖对人视网膜色素上皮细胞神经钙黏连蛋白和纤维连接蛋白表达的影响

目的:体外建立高糖培养人视网膜色素上皮(hRPE)细胞模型,观察高糖条件下RPE细胞神经钙黏连蛋白(N-cadherin)和纤维连接蛋白(fibronectin)的表达变化,探讨高糖对RPE细胞发生上皮间质转化(EMT)的影响。方法:体外培养hRPE细胞,以60mmol/L的葡萄糖建立高糖模型,实验分对照组(5.5mmol/L的葡萄糖)和高糖24,48,72h组,用免疫组织化学法及Real-time PCR技术检测各组RPE细胞N-cadherin和fibronectin的表达。结果:高糖组RPE细胞出现排列紊乱,胞体变长变大,高糖72h组最明显。免疫组织化学法检测结果显示:与对照组相比,高糖组RPE细胞N-cadherin表达呈下降趋势;而fibronectin表达出现并呈升高趋势。Real-time PCR检测结果显示:与对照组相比,高糖组RPE细胞N-cadherin mRNA表达水平在24h时出现下降,72h时降低最明显(F=12.252,P=0.000),24h组与对照组相比差异无统计学意义,48h及72h组分别与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05);与对照组相比,高糖组RPE细胞fibronectin mRNA表达水平在24h时出现升高,72h时升高最明显(F=50.543,P=0.000),24h组与对照组相比差异无统计学意义,48h及72h组fibronectin mRNA表达水平明显升高,分别与对照组相比差异有统计学意义(P=0.000,P=0.000)。结论:高糖条件下RPE细胞上皮标记物N-cadherin表达下调,间质标记物fibronectin表达出现,发生EMT改变,这一现象为探讨增生性糖尿病视网膜病变的发病机制及其防治提供新的思路。