猪链球菌2型的纤连蛋白／血纤维蛋白原结合蛋白基因的序列分析

目的为确定猪链球菌2型(SS2)江苏分离株9801是否具有纤连蛋白／血纤维蛋白原结合蛋白基因(fbps)。方法根据已发表的SS2 fbps序列,设计并合成1对引物,以SS2江苏分离株的基因组为模板,采用聚合酶链反应(PER)方法扩增fbps,克隆于pMD-T18载体。测定阳性质粒插入序列。利用DNAstar软件,比较所测序列与不同来源SS2的fbps和FBPS与链球菌属其他种同源蛋白的同源性。结果扩增的fbps为1 938 bp,江苏分离株与猪源致病性SS2荷兰分离株的fbps序列有5个碱基不同,与ATCCA3765株有3个碱基不同,同源性均达99．99％以上。推导的氨基酸序列比较,分别有4个和2个氨基酸不同,同源性均为99％以上。纤连蛋白结合蛋白(FBPS)无前导序列,无锚定序列,与链球菌属其他种的同源Fn结合蛋白的同源性为68．8％～76．0％。结论FBPS是一种无锚的黏附素。

猪链球菌2型FBPS的纤连蛋白结合部位的初步确定

根据猪链球菌2型江苏分离株HA9801的fbps基因序列,设计合成不同的引物,用含全长fbps的pMD-T-FBPS质粒为模板,通过PCR技术,扩增不同片段fbps,并按正确的阅读框架定向克隆到表达载体pET-32a(+),构建分别表达全长7～82、7～165和87～320氨基酸FBPS的重组表达质粒pFBPS、pFBPS(7～82)、pFBPS(7～165)和pFBPS(87～320);将重组质粒转化大肠杆菌BL 21(DE)株,经IPTG诱导,表达rFBPS(7～82)、rFBPS(7～165)、rFBPS(87～320)和rFBPS(全长),分子量分别为29、34、42及83kD的融合蛋白.配基亲和Western blot试验表明,表达的融合蛋白除rFBPS(7～82)外,均可与人纤连蛋白(Fn)结合,由此可以推断SS2的纤连蛋白/血纤蛋白原结合蛋白(FBPS)N端87～165氨基酸区域为具有结合活性的线性部位.

血清S100钙结合蛋白B、TIMP金属肽酶抑制剂1、纤连蛋白1联合对子痫前期的诊断价值

目的探讨血清S100钙结合蛋白B(S100b),TIMP金属肽酶抑制剂1(TIMP1),纤连蛋白1(FN1)联合对子痫前期的诊断价值。方法我院收治的妊娠期子痫前期患者70例(研究组),同期健康孕中期妊娠妇女70例(对照组)。检测两组血清S100b、TIMP1、FN1表达量。用受试者工作特征曲线(ROC)的曲线下面积(AUC)分析S100b,TIMP1,FN1检测在子痫前期中的诊断意义。结果研究组血清S100b、TIMP1、FN1表达量均高于对照组(P <0. 05)。血清S100b、TIMP1、FN1单项诊断子痫前期的灵敏度分别为87%、88%、97%,特异度分别为87%、85%、60%;联合诊断子痫前期的灵敏度为94. 29%,特异度为85. 71%,准确度为90. 00%。结论血清中S100b、TIMP1、FN1的表达量检测可作为子痫前期的潜在标志。

猪链球菌2型四川人源分离株ZYH18纤连蛋白结合蛋白基因的克隆和序列分析

目的对2005年猪链球菌2型(Streptococcus suistype 2,S.suis2)四川资阳人源分离株ZYH18纤连蛋白结合蛋白(FBPS)基因进行克隆和序列分析。方法以ZYH18的基因组DNA为模板,采用PCR方法扩增出纤连蛋白/血纤蛋白原结合蛋白基因片段,克隆于pMD-T18载体,构建成载体pMD-T-fbps,转化到宿主菌TG1中,进行序列测定(GenBank登录号为DQ345444)。测序结果与实验室保存的其它7株猪链球菌2型临床分离菌株测序结果及GenBank提交序列AF438158进行编码区基因的同源性比对。结果成功克隆了实验室保存的分离于不同时间和地点的,包括ZYH18在内的8株S.suis2临床分离菌株的fbps基因,并对其编码区基因进行了同源性比对。结论实验室保存的8株菌的FBPS编码区基因同源性高达100%,并不因分离时间和地点的不同而不同;与GenBank提交序列AF438158同源性为99%,存在两个氨基酸的差异。

梅毒螺旋体纤连蛋白结合蛋白Tp0136前炎症活性的研究

目的初步研究梅毒螺旋体纤连蛋白结合蛋白Tp0136潜在的前炎症活性。方法构建重组质粒p ET-28a/Tp0136并诱导其表达目的蛋白;将不同浓度(1、2、5、10μg/m L)的r Tp0136分别刺激THP-1源性巨噬细胞,ELISA法分别检测其产生前炎症细胞因子IL-1β、IL-6和TNF-α的水平;并同时用二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)预先处理巨噬细胞,检测相应细胞因子分泌量。结果成功构建了p ET-28a/Tp0136重组质粒,并诱导表达和纯化出r Tp0136;重组蛋白能诱导巨噬细胞产生IL-1β、IL-6和TNF-α,并且呈浓度和时间依赖性;重组蛋白刺激经PDTC预处理后的巨噬细胞,其IL-1β、IL-6和TNF-α的分泌水平分别降至32%、35%和27%。结论r Tp0136可诱导巨噬细胞产生前炎症细胞因子,该过程可能受NF-κB调控。

糖链结构不同的纤连蛋白与HT1080细胞结合研究

人血浆纤连蛋白（Ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ，Ｆｎ）与人胎盘纤连蛋白两者在肽链结构上基本相同，但人血浆Ｆｎ的Ｎ－糖链结构为二天线结构，而人胎盘Ｆｎ不仅Ｎ－糖链的数量增加，同时还含有多天线结构，分别用^（１２５）Ｉ标记这两种具有不同糖链结构的Ｆｎ，观察两者与ＨＴ１０８０细胞的饱和结合的亲和性，结果发现，在４℃，人血浆Ｆｎ与ＨＴ１０８０细胞的饱和结合为１２９ｎｇ／１０~５细胞，解离常数为２．８３×１０^（－８）ｍｏｌ／Ｌ，人胎盘Ｆｎ与ＨＴ１０８０细胞的饱和结合为１３３ｎｇ／１０~６细胞，解离常数为２．６４×１０^（－８）ｍｏｌ／Ｌ．因而，人血浆Ｆｎ与人胎盘Ｆｎ上Ｎ－糖链的不同并未影响其与受体的结合．

纤维蛋白原结构与血栓形成

纤维蛋白原(简称纤原)是最早发现的人体内与凝血有关的重要因子。在血栓形成过程中它在凝血酶作用下先转化为纤维蛋白单体,然后相互以非共价键形式聚合起来,并在第ⅩⅢ凝血因子的作用下交联,成为血栓的基质骨架。对纤原的结构和功能的研究不仅有助于了解它在血栓形成过程的作用,更重要的是可为血栓性疾病的防治提供理论依据。

以纤连蛋白(FN)细胞结合片段研究大鼠肝星状细胞FN受体表达及调控

应用亲和层析、凝胶过滤法以及 X型蛋白酶消化结合制备电泳分别提取纯化大鼠 FN及 FN细胞结合片段 (12 0KDa FN - f) ,后者经生物素标记后 ,用亲和细胞化学方法研究大鼠肝星状细胞 (HSC) FN受体 (FNR)表达及调控。结果显示 ,生物素标记的 12 0 KDa FN- f与 FNR的结合具有特异性。原代培养 5 d、 7d的正常大鼠 HSC表达 FNR较培养 1d、 3 d的明显增强。血小板源性生长因子 (PDGF)和转化生长因子 - β1(TGF- β1)可上调大鼠 HSC表达 FNR,全反式维甲酸(at RA)则下调细胞因子再激活的 HSC表达 FNR,并呈剂量依赖性。本文建立了检测 FNR的一种新方法 ,即配体 (12 0 KDaFN- f) -受体 (FNR)亲和细胞化学方法 ,该方法能反映 FNR的总体水平及活性状态。同时初步探讨了影响大鼠 HSC表达FNR的因素 ,确切机制有待进一步研究。

穿透支原体纤连蛋白结合蛋白的鉴定及分离纯化

目的 探讨穿透支原体对宿主细胞的黏附机制。方法 用去污剂Triton X-100提取穿透支原体蛋白,用配体免疫印迹试验鉴定纤连蛋白结合蛋白(FnBP);然后制备纤连蛋白Sepharose 4B亲和柱,运用亲和层析技术从制备的样品中分离纯化FnBP,在非还原状态下进行十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)。结果 配体免疫印迹试验鉴定出一65kDa的蛋白条带,可特异性地结合Fn;亲和层析技术得到相应的FnBP的纯化产物。结论FnBP与穿透支原体对宿主细胞的黏附过程有关。

链球菌属纤连蛋白结合蛋白的生物信息学分析

对链球菌属纤连蛋白结合蛋白进行系统的分析,找出其特征,为以后的研究奠定基础。通过MUSCLE、BLASTP、PSI-BLAST、PHYLIP、Perl编程等生物信息学方法对217条候选纤连蛋白结合蛋白进行研究。发现共有31个序列纤连蛋白结合蛋白重复单元序列模体,绝大部分蛋白由两个或两个以上的不同模体序列构成,其保守结构域组合呈现多样性等特征。表明链球菌属纤连蛋白结合蛋白重复单元序列模体不是严格统一的,总体上具有变异性,但模体之间又有很大的相似性。

扶正化痰活血方对复发性流产患者胰岛素抵抗及纤溶酶原激活物抑制剂-1、性激素结合球蛋白的影响

育龄期妇女复发性流产发生率0．5％～5％，对患者身心造成极大负担。目前认为与免疫因素、遗传因素、生殖道异常及感染、内分泌异常、宫颈机能不全等因素关系密切。但不少患者排除上述因素后仍可发病，被称为“不明原因性”复发性流产，比例可达到40％。

肌动蛋白清除系统与凝血—纤溶系统在子痫前期患者外周血中的变化

目的探讨子痫前期患者外周血中凝溶胶蛋白(GSN)、游离维生素D结合蛋白(VDBP)及凝血—纤溶指标的变化与子痫前期发生发展的关系。方法选取子痫前期重度(SPE)、轻度(MPE)患者各30例、同孕龄健康孕妇(对照组1)和足月健康孕妇(对照组2)各30例,比较4组外周血中血浆GSN和游离VDBP的水平,以及凝血指标血小板(PLT)、凝血酶原时间(PT)、活化的部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶时间(TT)、纤维蛋白原(FIB)、D-二聚体(D-dimer)的水平。结果 MPE和SPE组中GSN、VDBP及PLT、PT、APTT、FIB的含量均明显低于对照组1(P<0.05),D-dimer明显高于对照组1(P<0.05)。SPE组中GSN、VDBP及PLT、PT、APTT、FIB的含量明显低于MPE组(P<0.05),D-dimer明显高于MPE组(P<0.05)。在健康孕妇中,对照组1与对照组2相比,随着孕周的增加,GSN水平呈下降趋势,VDBP水平呈上升趋势,均无统计学差异(P>0.05),同时凝血指标均无统计学差异(P>0.05)。结论子痫前期患者外周血中GSN、VDBP水平较健康孕妇显著降低,血液呈病理性高凝状态,且随着病情加重变化更为明显,与孕周关系不大。

人脐血和胎盘中肝细胞生长因子和纤维连接蛋白的测定

目的:检测人脐血、胎盘组织和胎盘基质细胞培养上清液中肝细胞生长因子(HGF)和纤维连接蛋白(Fn)的含量。方法:选择健康足月新生儿,分娩时留取脐血和胎盘组织,用ELISA法检测其中Fn和HGF的浓度,并比较分析。结果:HGF含量在脐血、胎盘组织提取液和胎盘基质细胞培养上清液中分别为1.23±0.24ng/ml、113.73±11.99ng/ml、2.23±0.31ng/ml。Fn含量分别为1105±44ng/ml、1537±319ng/ml、1027±171ng/ml。结论:与脐血相比,胎盘是提取HGF和Fn的优质材料,将其浓缩或纯化后具有很大的科研和应用价值。

少加样高收效制备创伤修复剂纤维粘连蛋白的方法(英文)

背景纤维粘连蛋白不仅对细胞起支架作用,而且是细胞间重要的连结因子,具有类似调理素作用,可促进单核吞噬细胞系的吞噬功能,在炎症和创伤中起修复作用。目的以新鲜健康男性“O”型血浆为原料,为制备纤维蛋白结合素筛选出加样量小,方法简便、收得率高的纯化方法。设计开放性实验。单位广州市红十字会医院暨南大学第四附属医院创伤外科研究所。材料实验于2000-07/2002-07在广州市红十字会医院创伤外科研究所完成。材料主要包括新鲜健康男性“O”型血浆、明胶、CNBr-activatedSepharose4B、交联葡聚糖G-25、尿素、三羟甲基氨基甲烷等。方法用明胶与溴化氰活化琼脂糖珠偶联的亲和层析柱对纤维蛋白结合素进行纯化。①加人血浆取新鲜健康男性O型血浆150m L,每次向柱内加入25m L,停留20min,流速3.5m L/m in。②去杂蛋白用pH7.5的Tris-柠檬酸钠平衡液洗柱,洗至流出液280nm下吸光度值<0.02,再用含1mol/L NaCl的Tris-柠檬酸钠洗去其他杂蛋白。③收集纤维蛋白结合素用3m ol/L脲-Tris洗脱液洗柱,收集纤维蛋白结合素。④纤维蛋白结合素收集液去尿素取纤维蛋白结合素的收集液,过SephadeG-25,去除尿素。⑤除菌用0.22μm滤菌器过滤除菌。主要观察指标①十二烷基黄酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳结果。②停留时间对提纯纤维蛋白结合素收得率的影响。③加入血浆量对提纯纤维蛋白结合素收得率的影响。结果①十二烷基黄酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳结果分离胶浓度为7%,浓缩胶浓度为3%,纤维蛋白结合素电泳结果为单一蛋白区带。②停留时间对提纯纤维蛋白结合素收得率的影响血浆加样量为150m L,柱内不停留和停留时间为10,20,30m in时纤维蛋白结合素收得率分别是(65.24±3.45)%,(74.77±4.05)%,(86.99±4.10)%,(80.47±3.75)%。③加入血浆量对提纯纤维蛋白结合素收得率的影响柱内停留时间为20m in时,血浆加样量为100,130,150,180m L时纤维蛋白结合素收得率分别是(72.56±3.63)%,(77.61±3.14)%,(86.99±4.12)%,(74.67±3.05)%。结论在明胶亲和柱体积不变的条件下,制备纤维蛋白结合素的量与血浆加样量、血浆在柱内停留时间密切相关。明胶亲和柱的血浆最佳加样量为150m L,每次血浆在柱内停留时间应为20m in,此法制备的纤维蛋白结合素加样量小,收得率高。

微生物所揭示猪链球菌纤连蛋白结合蛋白的结构及功能

中国科学院微生物研究所高福团队最新研究揭示了猪链球菌纤连蛋白结合蛋白（FBPS）的结构及功能。该项研究结果发表在11月7日的《美国国家科学院院刊》（PNAS）上。

凝血纤溶功能指标及视黄醇结合蛋白与脓毒症患者病情程度及预后的评估价值

目的分析凝血纤溶功能指标及视黄醇结合蛋白(RBP)与脓毒症患者病情程度及预后的评估价值.方法选取2021年1-12月桂林医学院第二附属医院收治的80例脓毒症患者为研究对象,作为研究组,并选取同期于医院体检的50名健康者作为对照组;根据病情程度分为脓毒症组(n=32)、严重脓毒症组(n=28)和脓毒症休克组(n=20),均给予抗凝治疗,并根据28 d预后分为存活组(n=55)和死亡组(n=25).检测凝血纤溶功能指标[活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)、凝血酶时间(TT)、D二聚体(DD)、纤维蛋白原(FIB)、抗凝血酶Ⅲ(AT-Ⅲ)、蛋白C(PC)、纤溶酶原激活物抑制物(PAI-1)]和RBP水平,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析PT、D-D、AT-Ⅲ、PC、RBP水平对脓毒症预后的预测价值.结果研究组APTT、PT、TT、D-D、PAI-1高于对照组,FIB、AT-Ⅲ、PC、RBP水平低于对照组(P<0.05);脓毒症休克组APTT、PT、TT、D-D、PAI-1高于严重脓毒症组和脓毒症组,FIB、AT-Ⅲ、PC、RBP低于严重脓毒症组和脓毒症组,严重脓毒症组APTT、PT、TT、D-D、PAI-1高于脓毒症组,FIB、AT-Ⅲ、PC、RBP低于脓毒症组(P<0.05).存活组PT、D-D水平低于死亡组,AT-Ⅲ、PC、RBP水平高于死亡组(P<0.05);ROC曲线分析显示,血清PT、D-D、AT-Ⅲ、PC、RBP水平联合预测脓毒症预后的敏感度为96.00%,曲线下面积(AUC)为0.952,高于单独检测(P<0.05).结论凝血纤溶功能指标及RBP与脓毒症患者病情变化密切相关,APTT、PT、TT、D-D、PAI-1升高且FIB、AT-Ⅲ、PC、RBP水平降低说明病情严重,是预后不良的表现,联合监测有助于判断患者预后.

基质蛋白与整合素参与人骨髓间充质干细胞体外内皮的分化

目的:探讨基质蛋白与整合素在人骨髓间充质干细胞体外内皮分化过程中的作用,进一步明确其分化机制。方法:实验于2001-10/2003-03在吉林大学基础医学院病理生物学教育部重点实验室完成。采用不同基质蛋白纤维连接蛋白和Ⅰ型胶原,在诱导因子血管内皮细胞生长因子作用下对人骨髓间充质干细胞进行内皮诱导分化。通过免疫细胞化学和流式细胞分析检测分化标志和β1整合素。结果:纤维连接蛋白和Ⅰ型胶原组细胞诱导后可引起内皮分化早期标志KDR和CD34增强,纤维连接蛋白效应较为明显;两种基质蛋白也引起分化细胞β1整合素表达增强。结论:细胞外基质-整合素受体和血管内皮生长因子相互作用调控人骨髓间充质干细胞分化;人骨髓间充质干细胞诱导后具备内皮分化趋势;β1整合素的改变参与人骨髓间充质干细胞的内皮分化。该研究为寻找组织修复再生、心肌梗死和缺血性疾病治疗,以及血管组织工程的新型种子细胞提供了新的思路和方法。

肝病患者凝血及纤溶指标检测的意义

目的探讨肝病与凝血及纤溶指标的关系。方法使用Sysmex CA-1500全自动血凝仪对30例正常对照组,111例肝病组的凝血醇原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、纤维蛋白原(Fbg)、D-二聚体(D-D)进行检测分并组比较。结果PT、APTT、Fbg、D-D在急性肝炎组与正常组差异无显著意义(P>0.05),而在漫性肝炎、肝硬化及重症肝病患者与正常组差异有显著意义(P<0.01)。结论说明PT、APTT、Fbg、D-D检测对轻度肝病的意义不大,但可预计重症肝病患者是否有出血倾向及可能伴有隐匿型DIC,以上凝血及纤溶指标,有助于预防DIC的发生、判断病情的预后和指导临床治疗。