Ⅲ型纤连蛋白结构域包含蛋白5抑制巨噬细胞焦亡的作用机制

背景:Ⅲ型纤连蛋白结构域包含蛋白5(fibronectin type Ⅲ domain-containing protein 5,FNDC5)是一种肌肉因子,具有调节糖脂代谢、抗炎、抗氧化及改善胰岛素抵抗等功能,并且具有调节多种细胞焦亡的能力。目的:探讨FNDC5对巨噬细胞焦亡的作用及潜在机制。方法:(1)构建FNDC5基因过表达和沉默慢病毒载体,将慢病毒载体转染至THP-1细胞株,通过观察细胞绿色荧光表达、qPCR和Western blot验证转染效果。(2)佛波酯诱导THP-1细胞分化为巨噬细胞,通过氧化性低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL)构建巨噬细胞焦亡模型,分组:NC组、ox-LDL组、ox-LDL+MOCK1组、ox-LDL+Ov-FNDC5组、ox-LDL+MOCK2组和ox-LDL+shFNDC5组。(3)采用Hoechst 33342/PI荧光双染和乳酸脱氢酶释放实验评估细胞焦亡程度,采用qPCR和Western blot检测相关分子mRNA和蛋白表达水平,采用ELISA检测细胞上清液中白细胞介素1β和白细胞介素18释放水平。结果与结论:与ox-LDL+MOCK1组相比,过表达FNDC5可显著降低巨噬细胞焦亡率以及乳酸脱氢酶、白细胞介素1β、白细胞介素18释放水平,显著抑制NF-κB p65、NF-κB p50、NLRP3、ASC、Caspase-1及GSDMD的mRNA表达,显著抑制NF-κB p65、NF-κB p50、NLRP3、ASC、Cleaved Caspase-1及GSDMD-N的蛋白表达;与ox-LDL+MOCK2组相比,沉默FNDC5则出现相反结果。结果表明:FDNC5可能通过抑制NF-κB/NLRP3通路缓解巨噬细胞焦亡。

Ⅲ型纤连蛋白样包含结构域1蛋白在食管癌组织中的表达及临床意义

目的研究Ⅲ型纤连蛋白样包含结构域1(FNDC1)蛋白在食管癌组织中的表达及临床意义。方法应用免疫组化及实时荧光定量PCR检测四川省巴中市中心医院2013年4月至2015年4月诊治的93例食管癌患者癌组织及癌旁组织中FNDC1的表达,分析癌组织中FNDC1的表达与临床病理特点关系。随访5年,Kaplan-Meier生存分析癌组织中不同FNDC1表达患者预后的差异。结果癌组织中FNDC1 mRNA的相对表达量明显高于癌旁组织(P <0.05)。FNDC1阳性棕褐色染色主要位于癌组织中肿瘤细胞的细胞浆,癌组织中FNDC1的阳性表达率明显高于癌旁组织(P <0.05)。癌组织中FNDC1蛋白表达与肿瘤分期及淋巴结转移有关(P <0.05)。随访3~60个月,FNDC1阳性患者5年总体生存率低于FNDC1阴性患者(P <0.05),FNDC1阳性患者的平均生存时间短于FNDC1阴性患者(P <0.05)。结论食管癌组织中FNDC1表达升高,FNDC1的表达与肿瘤分期及淋巴结转移有关,并有可能成为判断食管癌患者生存预后的标志物。

纤连蛋白Ⅲ型结构域蛋白5对HepG2肝癌细胞体外转移活性的影响及其机制

目的研究纤连蛋白Ⅲ型结构域蛋白5对肝细胞癌的影响以及调控机制。方法以不同浓度0、5、10和20μmol纤连蛋白Ⅲ型结构域蛋白5处理HeP G2细胞,通过MTT实验、集落形成实验、Transwell实验、流式细胞术和细胞划痕实验分析纤连蛋白Ⅲ型结构域蛋白5对HepG2细胞的活性、侵袭和迁移能力以及凋亡率的影响。通过蛋白免疫印迹法分析纤连蛋白Ⅲ型结构域蛋白对Wnt/β-catenin通路的作用。结果0、5、10和20μmol的纤连蛋白Ⅲ型结构域蛋白5可以降低HepG2细胞的生长活性(92.86±0.32比79.32±0.17比50.11±0.56比29.29±0.96),抑制HepG2细胞集落形成(238.25±12.28比126.91±9.56比68.93±9.25比32.53±7.32),并且能够阻止HepG2细胞的发生侵袭以及迁移(87.13±2.18比66.23±2.16比46.23±3.27比22.56±5.12;88.46±12.55比55.08±9.21比39.62±5.63比19.26±5.71),诱导HepG2细胞凋亡(1.46±0.23比5.08±0.11比9.66±0.23比13.27±1.01)。进一步研究发现,纤连蛋白Ⅲ型结构域蛋白5的这些作用可能与Wnt/β-catenin信号通路的抑制有关。结论纤连蛋白Ⅲ型结构域蛋白5能够抑制HepG2细胞的转移活性,并且纤连蛋白Ⅲ型结构域蛋白5的抑癌作用可能与Wnt/β-catenin途径有关。

构建Ⅲ型纤连蛋白结构域包含蛋白5过表达慢病毒载体抑制内皮细胞凋亡

背景:Ⅲ型纤连蛋白结构域包含蛋白5是一种调节糖脂代谢的蛋白分子,可以调控细胞凋亡,且参与抑制动脉粥样硬化的进程。目的:通过构建Ⅲ型纤连蛋白结构域包含蛋白5过表达慢病毒载体,转染人脐静脉内皮细胞,验证Ⅲ型纤连蛋白结构域包含蛋白5调控内皮细胞凋亡的作用。方法:构建Ⅲ型纤连蛋白结构域包含蛋白5过表达慢病毒载体。取处于对数生长期的人脐静脉内皮细胞,分3组培养:空白组不进行慢病毒转染,对照组转染不含Ⅲ型纤连蛋白结构域包含蛋白5基因的空载体慢病毒,实验组转染Ⅲ型纤连蛋白结构域包含蛋白5过表达慢病毒,转染7 d后,采用RT-PCR和Western blot检测Ⅲ型纤连蛋白结构域包含蛋白5的mRNA与蛋白表达。转染7 d后,向3组细胞内加入氧化型低密度脂蛋白溶液,采用CCK-8法测定细胞活力,Hoechst 33342/PI双染及流式细胞技术检测细胞凋亡程度。结果与结论:①实验组Ⅲ型纤连蛋白结构域包含蛋白5的mRNA与蛋白表达均高于空白组、对照组(P<0.05);②CCK-8检测显示,实验组加入氧化型低密度脂蛋白1,2 h的细胞活力高于空白组、对照组(P<0.05),3组加入氧化型低密度脂蛋白4 h的细胞活力比较差异无显著性意义(P>0.05);③加入氧化型低密度脂蛋白24 h后,流式细胞术检测显示实验组细胞凋亡率低于空白组、对照组(P<0.05),Hoechst 33342/PI双染显示实验组凋亡细胞数量少于空白组、对照组;④结果表明,过表达Ⅲ型纤连蛋白结构域包含蛋白5可以抑制人脐静脉内皮细胞的凋亡。

妊娠糖尿病患者血清S100A4、FNDC5水平及其与妊娠结局的关系

目的 探究妊娠糖尿病(GDM)患者血清S100钙结合蛋白A4(S100A4)、Ⅲ型纤连蛋白结构域包含蛋白5(FNDC5)水平及其与妊娠结局的关系。方法 选取2020年6月至2022年6月该院126例GDM患者作为GDM组,选取同期孕检的126例健康孕妇作为对照组。根据GDM患者妊娠结局情况分为妊娠结局良好组(76例)和妊娠结局不良组(50例)。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清S100A4、FNDC5水平,采用Logistic回归分析GDM孕妇妊娠结局,采用受试者工作特征(ROC)曲线评估血清S100A4、FNDC5预测GDM孕妇妊娠不良结局的价值,采用Spearman相关性分析血清S100A4、FNDC5与不良妊娠结局的相关性。结果 GDM组血清S100A4水平明显高于对照组(P<0.05),血清FNDC5水平明显低于对照组(P<0.05)。妊娠结局良好组血清S100A4水平明显低于妊娠结局不良组(P<0.05),血清FNDC5水平明显高于妊娠结局不良组(P<0.05)。Spearman相关性分析结果显示,GDM患者血清S100A4水平与不良妊娠结局呈正相关(P<0.05),FNDC5水平与不良妊娠结局呈负相关(P<0.05)。Logistic回归分析表明,血清S100A4、空腹血糖、HOMA-IR是GDM患者发生不良妊娠结局的危险因素(P<0.05),FNDC5是GDM患者发生不良妊娠结局的保护因素(P<0.05)。血清S100A4、FNDC5联合预测GDM妊娠结局的曲线下面积大于S100A4(Z=2.045,P=0.041)及FNDC5单项检测(Z=2.010,P=0.044)。结论 GDM患者血清S100A4水平升高,FNDC5水平降低,二者对评估GDM孕妇妊娠结局具有一定的参考价值。

肺腺癌组织中FNDC1、Napsin A、Smad4表达及临床意义

目的检测肺腺癌中Ⅲ型纤连蛋白结构域1(FNDC1)、天冬氨酸肽酶A(Napsin A)、Smad4的表达及其临床意义。方法回顾性分析2019年12月至2021年12月华中科技大学同济医学院附属协和医院收治的120例肺腺癌患者临床病例资料,收集患者手术切除肿瘤组织和癌旁正常组织。采用免疫组化染色SP法检测肺腺癌组织与癌旁组织中FNDC1、Napsin A、Smad4表达情况,并分析FNDC1、Napsin A、Smad4表达与肺腺癌临床病理特征的关系。随访患者的生存情况,采用Kaplan-meier法绘制生存曲线,生存差异行Log-rank检验;采用Cox风险比例回归模型分析影响肺腺癌患者预后的因素。结果肺腺癌组织中FNDC1阳性表达率为61.67%,高于癌旁组织的20.0%;Napsin A、Smad4阳性表达率分别为41.67%和65.0%,低于癌旁组织的98.33%和90.83%,差异均有统计学意义(P<0.05)。FNDC1、Napsin A、Smad4表达与性别、年龄无关(P>0.05),与TNM分期、病理学分级、肿瘤最大直径、淋巴结转移均有关(P<0.05)。FNDC1阴性表达组患者中位生存时间(OS)为34个月,优于阳性表达组的27个月;Napsin A、Smad4阳性表达组患者中位生存时间分别为30个月和30个月,优于阴性表达组的27个月和25个月;差异均有统计学意义(P<0.05)。单因素Cox风险比例回归模型显示,TNM分期、肿瘤最大直径、淋巴结转移、FNDC1表达、NapsinA表达、Smad4表达是影响肺腺癌OS的因素(P<0.05)。结论肺腺癌组织中FNDC1表达升高,Napsin A、Smad4表达降低,且FNDC1、Napsin A、Smad4表达与临床病理特征、总生存均有关。

血清FNDC5和CTRP12表达水平与代谢相关脂肪性肝病的临床相关性

目的 探究血清Ⅲ型纤连蛋白结构域5(FNDC5)和补体C1q/肿瘤坏死因子相关蛋白12(CTRP12)表达水平与代谢相关脂肪性肝病(MAFLD)患者糖脂代谢、肝功能的相关性。方法 选择2019年6月至2022年6月在洪湖市妇幼保健院和襄阳市中心医院就诊的100例MAFLD患者作为研究对象(设为MAFLD组),另选择同期洪湖市妇幼保健院体检中心的100名健康体检者作为对照组。采用ELISA法检测血清FNDC5和CTRP12表达水平。采用Pearson相关性分析探讨血清FNDC5、CTRP12与MAFLD患者糖脂代谢、肝功能的关系。采用ROC曲线分析血清FNDC5和CTRP12表达水平对MAFLD的诊断价值。采用logistic回归模型分析影响MAFLD发生的危险因素。结果 与对照组相比,MAFLD组的ALT、AST、白蛋白(ALB)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、三酰甘油(TC)、总胆固醇(TG)、空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FINS)水平和胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)均显著升高,差异均有统计学意义(P均<0.05)。与对照组相比,MAFLD组的血清FNDC5表达水平显著升高,血清CTRP12表达水平显著降低,差异均有统计学意义(P均<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,MAFLD组的血清FNDC5表达水平与ALT、FBG、TG、FINS和HOMA-IR均呈显著正相关(r=0.504、0.496、0.474、0.418、0.501,P均<0.001);血清CTRP12表达水平与ALT、FBG、TG、FINS和HOMA-IR均呈显著负相关(r=-0.496、-0.421、-0.403、-0.425、-0.496,P均<0.001)。ROC曲线分析结果显示,血清FNDC5和CTRP12联合检测诊断MAFLD的曲线下面积(AUC)为0.860,分别大于单项检测;此外,联合检测的敏感度、特异度分别均分别高于单项检测。多因素logistic回归模型分析结果显示,TG、HOMA-IR和FNDC5均是MAFLD发生的独立危险因素,而CTRP12是MAFLD发生的保护因素(P均<0.05)。结论 MAFLD患者的血清FNDC5表达上调,血清CTRP12表达下调,且均与糖脂代谢、肝功能密切相关,其可能可以成为诊断MAFLD的生物标志物。

利拉鲁肽通过激活CAMKK2/AMPK通路促进骨骼肌FNDC5的表达

目的:探讨利拉鲁肽(LG)对骨骼肌细胞Ⅲ型纤连蛋白结构域包含蛋白5(fibronectin typeⅢdomain-containing protein 5,FNDC5)表达水平的影响并探讨其机制。方法:小鼠成肌细胞系C2C12经诱导分化后,给予梯度浓度(1~1 000 nmol/L)LG处理不同时间(0~24 h),观察LG对FNDC5表达及磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(adenosine 5'-monophosphate-activated protein kinase,AMPK)信号通路活性的影响,以及应用胰高血糖素样肽1(glucagon-like peptide-1,GLP-1)受体拮抗剂exendin_(9-39)、钙/钙调素依赖的蛋白激酶激酶2(Ca^(2+)/calmodulin-dependent protein kinase kinase 2,CAMKK2)的抑制剂STO609或AMPK的抑制剂Compound C预处理C2C12肌管细胞,观察FNDC5蛋白表达的改变。AMPK的活性及FNDC5的表达用Western blot法检测。结果:LG能够促进C2C12骨骼肌细胞FNDC5的蛋白表达,并具有剂量及时间依赖性,同时激活AMPK。LG的上述作用可被exendin_(9-39)、STO609或Compound C阻断。结论:利拉鲁肽可促进C2C12小鼠骨骼肌细胞合成FNDC5,此作用依赖于GLP-1受体,可能是通过激活CAMKK2/AMPK信号通路实现的。

代谢调节因子Irisin与2型糖尿病危险因素的研究进展

鸢尾素(Irisin)作为一种新激素,其前体物质为Ⅲ型纤连蛋白结构域5(FNDC5),受过氧化物酶体增殖受体γ辅助激活因子α(PGC1-α)调控。肌肉收缩运动可增加PGC1-α表达,后者正反馈调控促使FNDC5水解断裂产生Irisin。Irisin能够诱导白脂肪棕色化、促进代谢、增加能耗、减轻体质量、改善糖耐量和胰岛素抵抗。这为2型糖尿病、肥胖症、代谢综合征等代谢性疾病患者带来了希望,众多学者积极探索Irisin靶向治疗的可行性,在不久将来其有望成为一种新型治疗手段用于此类疾病的防治。

小鼠成肌细胞低氧/复氧模型的建立及验证

目的:构建体外小鼠成肌细胞间歇性低氧/复氧模型并验证。方法:设定三气培养箱的混合气中1%或4%O2含量为低氧培养条件,二氧化碳培养箱中的条件为复氧条件,将小鼠成肌细胞(C2C12)分别按不同氧浓度(1%和4%)及复氧循环周期(6 h和8 h)处理,结束后观察细胞增殖情况,测定细胞培养液中葡萄糖、乳酸脱氢酶(lactic dehydrogenase, LDH)及分泌性蛋白质分子--含Ⅲ型纤连蛋白结构域蛋白5(fibronectin type Ⅲ domain containing 5, FNDC5)浓度,测定细胞低氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor-1α, HIF-1α)蛋白的表达水平。结果:(1) 1%低氧浓度组较4%低氧浓度组细胞增殖慢、FNDC5含量低,培养液中葡萄糖浓度高、LDH活性及细胞中HIF-1α蛋白表达较高(P<0.05)。(2)1%低氧浓度条件下,与循环周期6 h组相比,循环周期8 h组细胞活力显著下降(P<0.05)。结论:本研究模拟了体外小鼠成肌细胞在不同低氧/复氧条件下的损伤状况及FNDC5的差异表达,1%低氧浓度和复氧循环周期6 h可作为较佳的体外C2C12细胞实验模型建立条件。

FSD1蛋白对胶质瘤干细胞侵袭的影响

目的研究具有SPRY结构域的纤连蛋白Ⅲ型(FSD1)在胶质瘤干细胞侵袭中发挥的作用,探索新的胶质瘤肿瘤标志物或治疗靶点。方法利用TCGA数据库数据,分析比较在多形性成胶质细胞瘤(GBM)组织、正常脑组织及不同分型级别胶质瘤组织中的FSD1的mRNA表达水平,并分析FSD1 mRNA表达水平与胶质瘤患者预后的相关性。利用慢病毒感染体系,在胶质瘤干细胞(GSC)T4121和D456中稳定过表达FSD1蛋白,通过Transwell侵袭实验检测过表达FSD1蛋白对T4121和D456两种GSC侵袭能力的影响。结果 FSD1基因在GBM组织中mRNA表达水平显著低于正常脑组织(P<0.01);FSD1的mRNA表达水平随胶质瘤分型级别提高而降低(Ⅱ级与Ⅲ级比较,P<0.05,Ⅲ级与Ⅳ级比较,P<0.01);FSD1 mRNA低表达的胶质瘤患者的生存期显著低于高表达患者(P<0.01)。在T4121和D456两种GSC细胞系中,过表达FSD1蛋白的GSC侵袭细胞数显著低于空白对照组(2株细胞系中均为P<0.01)。结论 FSD1表达水平是胶质瘤恶性程度的一个临床相关因素,低水平FSD1有利于维持GSC的侵袭能力。

构建过表达FNDC5慢病毒载体抑制平滑肌细胞的增殖与迁移

背景:Ⅲ型纤连蛋白结构域包含蛋白5(fibronectin typeⅢdomain containing 5,FNDC5)属于一种肌肉因子,主要表达于骨骼肌及其他肌肉较多的组织中,可通过结合不同受体影响多种细胞增殖与迁移。目的:构建过表达FNDC5基因的慢病毒载体,获得稳定转染FNDC5的平滑肌细胞系,并观察其对平滑肌细胞增殖与迁移的影响。方法:①体外培养血管平滑肌细胞,经鉴定合格后传代培养。②PCR扩增目的基因FNDC5,将目的基因构建入pLVX-mCMV-ZsGreen-IRESPuro慢病毒载体中,在JM109感受态细胞中进行扩增,测序及鉴定合格后转染293T细胞,包装成过表达慢病毒颗粒并测定病毒滴度。将获得的重组慢病毒转染平滑肌细胞系,倒置荧光显微镜下观察细胞形态并计算转染效率,嘌呤霉素筛选获得稳转平滑肌细胞株。③将平滑肌细胞分为3组,分别为对照组、空载组和FNDC5过表达组,Real-time PCR和Western blot检测各组平滑肌细胞FNDC5 mRNA及蛋白表达,CCK-8和细胞划痕实验检测各组平滑肌细胞增殖活性及迁移能力。结果与结论:①成功构建FNDC5过表达慢病毒,并得到稳定转染的平滑肌细胞株,平滑肌细胞转染效率为86%;②与对照组、空载组比较,FNDC5过表达组FNDC5 mRNA及蛋白表达显著升高(P<0.001);③与空白组、空载组比较,FNDC5过表达组细胞增殖活性、迁移率明显下降(P<0.05);④结果显示,得到FNDC5稳定转染的平滑肌细胞株,FNDC5过表达可抑制平滑肌细胞增殖与迁移。

FNDC5基因过表达或沉默对动脉粥样硬化斑块形成中焦亡相关因子的影响及机制研究

目的:探索含Ⅲ型纤连蛋白结构域蛋白5(FNDC5)基因过表达或沉默对高脂饮食喂养的载脂蛋白E基因敲除(ApoE^(-/-))小鼠动脉粥样硬化斑块形成中焦亡相关因子的影响及其机制。方法:建立ApoE^(-/-)小鼠动脉粥样硬化模型;构建FNDC5基因过表达或沉默载体并转染动物模型,分组干预;采用酶法检测血清脂质含量;主动脉行油红O染色、HE染色和Masson染色检测斑块面积;采用免疫组化检测主动脉壁FNDC5、磷酸化核因子κB(pNF-κB)p65、核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)、caspase-1和消皮素D N端片段(GSDMD-N)的定位表达;采用TUNEL+caspase-1荧光双染检测主动脉壁细胞焦亡及其特征;采用ELISA法检测主动脉组织乳酸脱氢酶(LDH)活性;采用RT-qPCR和Western blot分别检测主动脉组织FNDC5、NLRP3、NF-κB p65、cleaved caspase-1、含caspase募集结构域的凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、GSDMD-N、白细胞介素1β(IL-1β)和IL-18的mRNA及蛋白表达水平。结果:成功构建FNDC5腺病毒过表达和沉默载体。过表达FNDC5降低高脂饮食喂养的ApoE^(-/-)小鼠血清低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、甘油三酯(TG)和总胆固醇(TC)水平,减少主动脉斑块面积,降低内膜/中膜比值,降低主动脉LDH活性,降低主动脉NF-κB p65、NLRP3、cleaved caspase-1、ASC、GSDMD-N、IL-1β和IL-18的mRNA及蛋白表达水平,减少细胞焦亡(P<0.05);而沉默FNDC5基因使高脂饮食喂养的ApoE^(-/-)小鼠呈现相反的结果(P<0.05)。结论:FNDC5可调控动脉粥样硬化进程中的细胞焦亡,其机制可能是:通过降低NF-κB活性和表达,抑制NLRP3激活及降低其下游焦亡信号通路相关因子caspase-1、GSDMD、IL-1β和IL-18表达,抑制细胞焦亡,从而延缓动脉粥样硬化斑块形成。

有氧训练对慢性心力衰竭大鼠心功能的改善作用及机制

目的:探讨有氧训练对慢性心力衰竭(CHF)大鼠心功能的改善作用及作用机制。方法:选取SPF级健康雄性Wistar大鼠100只,随机分为CHF模型组(n=50)和假手术组(n=50)。CHF模型组造模后随机分为CHF运动组(n=25)和CHF安静组(n=25);假手术组造模后随机分为假手术运动组(n=25)和假手术安静组(n=25)。CHF运动组、假手术运动组进行跑台训练。超声测量心功能,western blot、ELISA和电化学发光法检测过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子1α(PGC-1α)和下游因子Ⅲ型纤连蛋白结构域5(FNDC5)、FNDC5/鸢尾素蛋白表达量及血清鸢尾素、脑钠肽(BNP)水平。结果:CHF运动组左心室收缩末期内径(LVESD)高于假手术运动组、假手术安静组,低于CHF安静组,差异有统计学意义(P<0.05);CHF运动组左心室短轴缩短率(left ventricular fraction shorting,LVFS)、左室射血分数(LVEF)低于假手术运动组、假手术安静组,高于CHF安静组,差异有统计学意义(P<0.05)。CHF运动组PGC-1α、FNDC5/irisin蛋白相对表达量高于假手术安静组、CHF安静组,差异有统计学意义(P<0.05),与假手术运动组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。CHF运动组鸢尾素低于假手术运动组,高于假手术安静组及CHF安静组,差异有统计学意义(P<0.05)。CHF运动组BNP高于假手术安静组,低于CHF安静组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:有氧训练可改善CHF大鼠心功能,减轻心肌损伤,其机制可能与PGC-1α-FNDC5/鸢尾素信号通路有关。

Irisin与糖脂代谢性疾病的研究进展

Irisin是一种新发现的肌肉因子,其前体物质为Ⅲ型纤连蛋白结构域5(FNDC5)。运动使骨骼肌中的过氧化物酶体增殖活化受体γ(PPARγ)辅助激活因子1α(PCG-1α)的表达增加,PCG-1α能诱导FNDC5表达,FNDC5断裂后可形成分泌性的肌肉因子Irisin,从而诱导白色脂肪棕色化,导致能量消耗增多,体质量减轻,改善糖耐量和胰岛素抵抗,调节糖脂代谢和能量代谢。因此,Irisin有望成为治疗糖脂代谢性疾病的新靶点。本文对Irisin与糖脂代谢性疾病的相关性研究进行综述。

多头带绦虫黏着蛋白TmAdh1基因的克隆及原核表达

为研究多头带绦虫黏着蛋白TmAdh1的功能,利用PCR分别以多头带绦虫基因组DNA和cDNA为模板扩增TmAdh1的基因组序列和cDNA序列,并利用生物信息学软件对该基因进行预测分析。将TmAdh1基因片段连接至原核表达载体pGEX4T-1进行原核表达,并利用Western-blot分析该蛋白的抗原性。结果显示,TmAdh1的基因组序列长1 848bp,由2个内含子和3个外显子组成,其开放阅读框的长度为402bp,编码133个氨基酸残基。预测分析表明,TmAdh1蛋白含有1个N端信号肽序列、1个纤连蛋白三型(FnⅢ)结构域、1个糖基化位点和8个线性B细胞抗原表位。在原核系统成功表达了约40ku的重组蛋白TmAdh1,用其免疫小鼠制备超免疫血清。Western-blot试验表明,重组蛋白TmAdh1可以与免疫小鼠血清反应。以上研究结果表明,多头带绦虫TmAdh1基因是带科绦虫宿主保护性抗原的同源基因,可作为脑多头蚴病疫苗的候选分子。

ESYT3和FNDC1在肺腺癌中的表达及其与肿瘤进展关系

目的检测肺腺癌患者癌组织中扩展突触结合蛋白3(ESYT3)和Ⅲ型纤连蛋白结构域包含蛋白1(FNDC1)的表达,并分析两者与肿瘤进展的关系。方法纳入2019-06-01-2022-06-01河南省胸科医院收治的137例肺腺癌患者病理组织标本。患者男96例,女41例;年龄43~76岁,平均年龄(65.87±8.14)岁。应用免疫组织化学染色法检测癌组织、癌旁组织(距离癌组织≥3 cm)ESYT3和FNDC1蛋白的阳性表达,分析其与临床病理特征的关系。随访截至2023-10-01,比较不同进展状态患者癌组织ESYT3和FNDC1阳性表达情况。采用χ^(2)检验分析ESYT3和FNDC1阳性表达与肺腺癌临床病理特征的关系,采用多因素Cox比例风险回归模型分析肺腺癌进展的影响因素,绘制Kaplan-Meier曲线分析癌组织ESYT3和FNDC1蛋白表达与肺腺癌进展的关系。结果肺腺癌组织和癌旁组织中,ESYT3阳性表达率分别为33.58%(46/137)和56.20%(77/137),FNDC1阳性表达率分别为43.07%(59/137)和21.90%(30/137),差异均有统计学意义,χ^(2)值分别为14.177和13.995,均P<0.001。有吸烟史、TNMⅢ期、有淋巴结转移、未/低分化、胸膜侵袭患者,癌组织ESYT3阳性表达率分别低于无吸烟史(χ^(2)=7.344,P=0.007)、TNMⅠ/Ⅱ期(χ^(2)=7.766,P=0.005)、无淋巴结转移(χ^(2)=7.161,P=0.007)、中/高分化(χ^(2)=6.742,P=0.009)、无胸膜侵袭(χ^(2)=8.408,P=0.004)患者,癌组织FNDC1阳性表达率分别高于无吸烟史(χ^(2)=9.352,P=0.002)、TNMⅠ/Ⅱ期(χ^(2)=6.691,P=0.010)、无淋巴结转移(χ^(2)=4.258,P=0.039)、中/高分化(χ^(2)=7.421,P=0.006)、无胸膜侵袭(χ^(2)=7.738,P=0.005)患者。随访时间16~52个月,中位随访时间37(18,48)个月,124例患者进展率50.81%(63/124)。多因素Cox比例风险回归模型分析显示,吸烟史(HR=3.254,95%CI:1.339~7.908)、TNMⅢ期(HR=2.125,95%CI:1.279~3.531)、未/低分化(HR=2.032,95%CI:1.230~3.356)、癌组织FNDC1表达(HR=2.980,95%CI:1.570~5.657)是肺腺癌进展的危险因素,癌组织ESYT3表达(HR=0.961,95%CI:0.940~0.983)是其保护因素。癌组织ESYT3蛋白表达阳性和阴性患者的无进展生存时间(PFS)分别为51(95%CI:41.594~60.406)和43(95%CI:35.335~50.665)个月,差异有统计学意义,χ^(2)=6.294,P=0.012;癌组织FNDC1蛋白表达阳性和阴性患者PFS分别为39(95%CI:32.350~45.650)和48(95%CI:44.760~51.240)个月,差异有统计学意义,χ^(2)=8.075,P=0.004。结论肺腺癌中ESYT3低表达,FNDC1高表达,两者与吸烟史、TNM分期、淋巴结转移、组织分化程度及胸膜侵袭相关,且是肺腺癌进展的影响因素。

血清Irisin水平与妊娠期糖尿病的相关性研究

目的探讨血清Irisin水平与GDM患者IR及糖脂代谢的关系。方法选取在湖北医药学院附属东风医院产科住院的足月妊娠(≥37周)单胎孕妇80名,其中GDM患者40例(GDM组),N(T孕妇40名(GNGT组)。ELISA测量两组血清Irisin水平;同时测定FPG、FIns、HbA_1c、TG、TC、HDL-C、LDL-C水平。结果 GDM组血清Irisin水平较GNGT组[(7.35±1.85)vs(6.11±1.54)ng/ml]降低(P<0.05),且与HOMA-IR、FIns呈负相关(r=-0.370、-0.474,P=0.019)。多元线性回归分析显示,GDM组FIns和TC是血清Irisin的独立影响因素。结论血清Irisin可能参与了GDM的发生,与GDM患者IR及糖脂代谢异常有关。