猪链球菌2型四川人源分离株ZYH18纤连蛋白结合蛋白基因的克隆和序列分析

目的对2005年猪链球菌2型(Streptococcus suistype 2,S.suis2)四川资阳人源分离株ZYH18纤连蛋白结合蛋白(FBPS)基因进行克隆和序列分析。方法以ZYH18的基因组DNA为模板,采用PCR方法扩增出纤连蛋白/血纤蛋白原结合蛋白基因片段,克隆于pMD-T18载体,构建成载体pMD-T-fbps,转化到宿主菌TG1中,进行序列测定(GenBank登录号为DQ345444)。测序结果与实验室保存的其它7株猪链球菌2型临床分离菌株测序结果及GenBank提交序列AF438158进行编码区基因的同源性比对。结果成功克隆了实验室保存的分离于不同时间和地点的,包括ZYH18在内的8株S.suis2临床分离菌株的fbps基因,并对其编码区基因进行了同源性比对。结论实验室保存的8株菌的FBPS编码区基因同源性高达100%,并不因分离时间和地点的不同而不同;与GenBank提交序列AF438158同源性为99%,存在两个氨基酸的差异。

猪链球菌2型的纤连蛋白／血纤维蛋白原结合蛋白基因的序列分析

目的为确定猪链球菌2型(SS2)江苏分离株9801是否具有纤连蛋白／血纤维蛋白原结合蛋白基因(fbps)。方法根据已发表的SS2 fbps序列,设计并合成1对引物,以SS2江苏分离株的基因组为模板,采用聚合酶链反应(PER)方法扩增fbps,克隆于pMD-T18载体。测定阳性质粒插入序列。利用DNAstar软件,比较所测序列与不同来源SS2的fbps和FBPS与链球菌属其他种同源蛋白的同源性。结果扩增的fbps为1 938 bp,江苏分离株与猪源致病性SS2荷兰分离株的fbps序列有5个碱基不同,与ATCCA3765株有3个碱基不同,同源性均达99．99％以上。推导的氨基酸序列比较,分别有4个和2个氨基酸不同,同源性均为99％以上。纤连蛋白结合蛋白(FBPS)无前导序列,无锚定序列,与链球菌属其他种的同源Fn结合蛋白的同源性为68．8％～76．0％。结论FBPS是一种无锚的黏附素。

猪链球菌2型FBPS的纤连蛋白结合部位的初步确定

根据猪链球菌2型江苏分离株HA9801的fbps基因序列,设计合成不同的引物,用含全长fbps的pMD-T-FBPS质粒为模板,通过PCR技术,扩增不同片段fbps,并按正确的阅读框架定向克隆到表达载体pET-32a(+),构建分别表达全长7～82、7～165和87～320氨基酸FBPS的重组表达质粒pFBPS、pFBPS(7～82)、pFBPS(7～165)和pFBPS(87～320);将重组质粒转化大肠杆菌BL 21(DE)株,经IPTG诱导,表达rFBPS(7～82)、rFBPS(7～165)、rFBPS(87～320)和rFBPS(全长),分子量分别为29、34、42及83kD的融合蛋白.配基亲和Western blot试验表明,表达的融合蛋白除rFBPS(7～82)外,均可与人纤连蛋白(Fn)结合,由此可以推断SS2的纤连蛋白/血纤蛋白原结合蛋白(FBPS)N端87～165氨基酸区域为具有结合活性的线性部位.

脑室注射Aβ_(1-40)对大鼠皮质和海马纤连蛋白基因表达的影响

目的 研究脑室注射Aβ1-4 0 对大鼠皮质、海马纤连蛋白基因表达的影响。方法 通过脑室注射Aβ1-4 0 ,建立大鼠AD模型 ,采用逆转录PCR方法研究纤连蛋白在皮质、海马的表达情况。结果 通过Morris氏水迷宫实验、脑片刚果红染色及胆碱乙酰转移酶表达水平等方面验证AD模型成功 ,在AD鼠皮质、海马纤连蛋白基因高表达。结论 纤连蛋白为整合素的配体 ,Aβ1-4 0 诱导其基因高表达可能介导Aβ1-4 0 与小胶质细胞的结合 ,激活小胶质细胞促进神经元死亡。

脂质过氧化诱导动脉粥样硬化形成与纤连蛋白及P105基因的关系(英文)

目的:初步研究阿霉素导致血管壁脂质过氧化状态下纤连蛋白(fibronectin,FN)及P105基因表达的变化及其意义,并对动脉粥样硬化患者的临床康复介入提供理论依据。方法:将雄性SD大鼠40只随机分成4组,每组10只:正常对照组,阿霉素低剂量组(10mg/kg),阿霉素中剂量组(20mg/kg),阿霉素高剂量组(40mg/kg),对后3组分别一次性腹腔注射不同剂量的阿霉素,制备脂质过氧化模型。采用硫代巴比妥酸(Thiobarbituricacid,TBA)荧光分光光度法测定大鼠血清脂质过氧化产物丙二醛含量。运用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定大鼠主动脉中的纤连蛋白(Fibronectin,FN)、P105共活化因子mRNA的表达。结果:对照组、阿霉素低、中、高剂量组大鼠血清丙二醛的含量分别为(12.6±3.8),(17.4±2.9),(20.9±3.4),(24.5±4.1)μmol/L,其中中、高剂量组大鼠血清中丙二醛含量高于对照组(t=2.27,P<0.05;t=2.89,P<0.01);RT-PCR结果表明FN,P105mRNA在不同剂量模型组呈不同程度的高表达。结论:在阿霉素导致血管壁损伤后,有FN,P105基因的高表达,脂质过氧可能通过多种途径诱导动脉粥样硬化的形成。

梅毒螺旋体纤连蛋白结合蛋白Tp0136前炎症活性的研究

目的初步研究梅毒螺旋体纤连蛋白结合蛋白Tp0136潜在的前炎症活性。方法构建重组质粒p ET-28a/Tp0136并诱导其表达目的蛋白;将不同浓度(1、2、5、10μg/m L)的r Tp0136分别刺激THP-1源性巨噬细胞,ELISA法分别检测其产生前炎症细胞因子IL-1β、IL-6和TNF-α的水平;并同时用二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)预先处理巨噬细胞,检测相应细胞因子分泌量。结果成功构建了p ET-28a/Tp0136重组质粒,并诱导表达和纯化出r Tp0136;重组蛋白能诱导巨噬细胞产生IL-1β、IL-6和TNF-α,并且呈浓度和时间依赖性;重组蛋白刺激经PDTC预处理后的巨噬细胞,其IL-1β、IL-6和TNF-α的分泌水平分别降至32%、35%和27%。结论r Tp0136可诱导巨噬细胞产生前炎症细胞因子,该过程可能受NF-κB调控。

糖链结构不同的纤连蛋白与HT1080细胞结合研究

人血浆纤连蛋白（Ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ，Ｆｎ）与人胎盘纤连蛋白两者在肽链结构上基本相同，但人血浆Ｆｎ的Ｎ－糖链结构为二天线结构，而人胎盘Ｆｎ不仅Ｎ－糖链的数量增加，同时还含有多天线结构，分别用^（１２５）Ｉ标记这两种具有不同糖链结构的Ｆｎ，观察两者与ＨＴ１０８０细胞的饱和结合的亲和性，结果发现，在４℃，人血浆Ｆｎ与ＨＴ１０８０细胞的饱和结合为１２９ｎｇ／１０~５细胞，解离常数为２．８３×１０^（－８）ｍｏｌ／Ｌ，人胎盘Ｆｎ与ＨＴ１０８０细胞的饱和结合为１３３ｎｇ／１０~６细胞，解离常数为２．６４×１０^（－８）ｍｏｌ／Ｌ．因而，人血浆Ｆｎ与人胎盘Ｆｎ上Ｎ－糖链的不同并未影响其与受体的结合．

曲格列酮对转化生长因子-β_1诱导的HK-2细胞纤连蛋白和胶原Ⅰ型基因表达的影响

目的观察曲格列酮对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的人肾近曲小管上皮细胞(HK-2)细胞外基质纤连蛋白和胶原Ⅰ型的影响,探讨曲格列酮抗肾间质纤维化的潜在作用。方法将曲格列酮0,0.25,0.5,1,2.5,5和10μmol.L-1预处理HK-2细胞2h,随后加入TGF-β15mg.L-1作用24h,利用乳酸脱氢酶(LDH)释放实验检测曲格列酮对HK-2细胞的毒性作用;曲格列酮0,1,2.5,5和10μmol.L-1预处理HK-2细胞2h,再加入TGF-β15mg.L-1作用24h,通过实时荧光定量PCR检测HK-2细胞外基质主要成分胶原Ⅰ型mRNA和纤连蛋白mRNA表达。结果曲格列酮0.25～5μmol.L-1对HK-2细胞膜完整性无影响,LDH的释放与正常对照组无明显差异,曲格列酮10μmol.L-1组LDH释放率为(10.7±5.3)%,明显高于正常对照组(P<0.01)。与正常对照组相比,曲格列酮1,2.5,5和10μmol.L-1单独作用并没有增加HK-2细胞外基质中胶原Ⅰ型纤维和纤连蛋白的表达,而TGF-β1刺激下胶原Ⅰ型纤维和纤连蛋白表达明显上调,曲格列酮提前干预下纤连蛋白mRNA及胶原Ⅰ型mRNA表达下降,曲格列酮2.5,5和10μmo.lL-1可显著下调纤连蛋白mRNA表达(P<0.05,P<0.01);曲格列酮5和10μmol.L-1可显著下调胶原Ⅰ型mRNA表达(P<0.05)。结论曲格列酮可能具有拮抗肾间质纤维化的潜在作用,其作用机制可能与抑制HK-2细胞纤连蛋白和胶原Ⅰ型纤维的增加有关。

新基因AngRem104对纤粘连蛋白基因上游序列的调控分析

目的:探讨新基因AngRem104对纤粘连蛋白(FN)基因启动子转录活性的影响,为揭示AngRem104对FN表达的调控机制提供线索。方法:构建了FN基因上游调控序列的系列缺失体-荧光素酶(luciferase)报告基因,瞬时转染人系膜细胞,检测报告基因的活性变化。结果:FN507-pGL3+正义AngRem104质粒转染组和FN1280-pGL3+正义AngRem104质粒转染组的luciferase相对活性较FN122-pGL3+正义AngRem104质粒转染组luciferase相对活性明显升高(P<0.01)。结论:在FN基因上游调控序列中-122到-507之间存在新基因AngRem104的正反应调控区。

MPTP对褐鼠黑质纤连蛋白基因表达的影响

目的 研究腹腔注射 1 甲基 4 苯基 1,2 ,3,6 四氢吡啶 (MPTP)对褐鼠黑质纤连蛋白基因表达的影响 ,初步探讨其参与注射MPTP后的免疫机制。方法 通过腹腔注射MPTP建立帕金森病 (PD)褐鼠模型 ,采用逆转录 (RT) 聚合酶链反应 (PCR)方法研究纤连蛋白在黑质的表达情况。结果 经MPTP腹腔注射后褐鼠模型出现典型PD症状 ,黑质酪氨酸羟化酶表达水平明显降低 ,黑质纤连蛋白基因表达明显上调。结论 纤连蛋白在PD鼠黑质高表达可能促使T淋巴细胞透过血 脑屏障 (BBB)进入脑组织 ,参与PD鼠的免疫反应。

转染Smad2基因的大鼠肾系膜细胞纤连蛋白和Ⅳ型胶原表达的改变（摘要）

目的通过对大鼠肾小球系膜细胞(MsC)转染Smad 2基因,观察转染的阳性细胞克隆纤连蛋白(FN)及Ⅳ型胶原(ColⅣ)表达的改变,以探讨转化生长因子β(TGF-β)/Smad信号转导通路引起细胞外基质积聚导致肾小球硬化发生的分子机制.方法经磷酸钙介导将含有Smad 2重组表达质粒转染大鼠MsC,用G418筛选及Western印迹分析法鉴定,又分别采用Western印迹分析法和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测转染阳性细胞克隆FN及ColⅣ表达的改变.结果成功建立高表达Smad 2蛋白的阳性MsC克隆(T-12、T-31、T-35、T-40),并证实其FN及ColⅣ的mRNA和蛋白的表达水平均明显上调.阳性MsC克隆FN蛋白为对照组2.4倍(P＜0.05),mRNA为对照组的2.7倍(P＜0.05);阳性MsC克隆ColⅣ蛋白为对照组的2.9倍(P＜0.01),mRNA为对照组的3.3倍(P＜0.01).结论TGF-β/Smad信号转异途径中Smad 2可能是促进FN及ColⅣ在肾小球中积聚,是导致肾小球硬化发生的重要信号转导分子.

以纤连蛋白(FN)细胞结合片段研究大鼠肝星状细胞FN受体表达及调控

应用亲和层析、凝胶过滤法以及 X型蛋白酶消化结合制备电泳分别提取纯化大鼠 FN及 FN细胞结合片段 (12 0KDa FN - f) ,后者经生物素标记后 ,用亲和细胞化学方法研究大鼠肝星状细胞 (HSC) FN受体 (FNR)表达及调控。结果显示 ,生物素标记的 12 0 KDa FN- f与 FNR的结合具有特异性。原代培养 5 d、 7d的正常大鼠 HSC表达 FNR较培养 1d、 3 d的明显增强。血小板源性生长因子 (PDGF)和转化生长因子 - β1(TGF- β1)可上调大鼠 HSC表达 FNR,全反式维甲酸(at RA)则下调细胞因子再激活的 HSC表达 FNR,并呈剂量依赖性。本文建立了检测 FNR的一种新方法 ,即配体 (12 0 KDaFN- f) -受体 (FNR)亲和细胞化学方法 ,该方法能反映 FNR的总体水平及活性状态。同时初步探讨了影响大鼠 HSC表达FNR的因素 ,确切机制有待进一步研究。

穿透支原体纤连蛋白结合蛋白的鉴定及分离纯化

目的 探讨穿透支原体对宿主细胞的黏附机制。方法 用去污剂Triton X-100提取穿透支原体蛋白,用配体免疫印迹试验鉴定纤连蛋白结合蛋白(FnBP);然后制备纤连蛋白Sepharose 4B亲和柱,运用亲和层析技术从制备的样品中分离纯化FnBP,在非还原状态下进行十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)。结果 配体免疫印迹试验鉴定出一65kDa的蛋白条带,可特异性地结合Fn;亲和层析技术得到相应的FnBP的纯化产物。结论FnBP与穿透支原体对宿主细胞的黏附过程有关。

链球菌属纤连蛋白结合蛋白的生物信息学分析

对链球菌属纤连蛋白结合蛋白进行系统的分析,找出其特征,为以后的研究奠定基础。通过MUSCLE、BLASTP、PSI-BLAST、PHYLIP、Perl编程等生物信息学方法对217条候选纤连蛋白结合蛋白进行研究。发现共有31个序列纤连蛋白结合蛋白重复单元序列模体,绝大部分蛋白由两个或两个以上的不同模体序列构成,其保守结构域组合呈现多样性等特征。表明链球菌属纤连蛋白结合蛋白重复单元序列模体不是严格统一的,总体上具有变异性,但模体之间又有很大的相似性。

血清S100钙结合蛋白B、TIMP金属肽酶抑制剂1、纤连蛋白1联合对子痫前期的诊断价值

目的探讨血清S100钙结合蛋白B(S100b),TIMP金属肽酶抑制剂1(TIMP1),纤连蛋白1(FN1)联合对子痫前期的诊断价值。方法我院收治的妊娠期子痫前期患者70例(研究组),同期健康孕中期妊娠妇女70例(对照组)。检测两组血清S100b、TIMP1、FN1表达量。用受试者工作特征曲线(ROC)的曲线下面积(AUC)分析S100b,TIMP1,FN1检测在子痫前期中的诊断意义。结果研究组血清S100b、TIMP1、FN1表达量均高于对照组(P <0. 05)。血清S100b、TIMP1、FN1单项诊断子痫前期的灵敏度分别为87%、88%、97%,特异度分别为87%、85%、60%;联合诊断子痫前期的灵敏度为94. 29%,特异度为85. 71%,准确度为90. 00%。结论血清中S100b、TIMP1、FN1的表达量检测可作为子痫前期的潜在标志。

微生物所揭示猪链球菌纤连蛋白结合蛋白的结构及功能

中国科学院微生物研究所高福团队最新研究揭示了猪链球菌纤连蛋白结合蛋白（FBPS）的结构及功能。该项研究结果发表在11月7日的《美国国家科学院院刊》（PNAS）上。

人前磨牙牙髓牙本质复合体纤维粘连蛋白在不同年龄阶段的表达及其临床意义

目的 :研究牙髓牙本质复合体纤维粘连蛋白在不同年龄阶段的表达 ,探讨其与牙衰老和老年牙病间的关系。方法 :收集健康新鲜的前磨牙 ,按年龄分组 ,石蜡包埋切片 ,免疫组织化学与图像定量分析。结果 :随年龄增长 ,牙髓内纤维粘连蛋白免疫反应物增加、增粗 ,密度增高 ,积分光密度、体密度、线密度增加 ;牙本质内者与此相反。结论 :随年龄增长 ,牙髓内纤维粘连蛋白增加 ,使其细胞与血管间距离增大 ;牙本质内纤维粘连蛋白减少 ,韧性下降 。

少加样高收效制备创伤修复剂纤维粘连蛋白的方法(英文)

背景纤维粘连蛋白不仅对细胞起支架作用,而且是细胞间重要的连结因子,具有类似调理素作用,可促进单核吞噬细胞系的吞噬功能,在炎症和创伤中起修复作用。目的以新鲜健康男性“O”型血浆为原料,为制备纤维蛋白结合素筛选出加样量小,方法简便、收得率高的纯化方法。设计开放性实验。单位广州市红十字会医院暨南大学第四附属医院创伤外科研究所。材料实验于2000-07/2002-07在广州市红十字会医院创伤外科研究所完成。材料主要包括新鲜健康男性“O”型血浆、明胶、CNBr-activatedSepharose4B、交联葡聚糖G-25、尿素、三羟甲基氨基甲烷等。方法用明胶与溴化氰活化琼脂糖珠偶联的亲和层析柱对纤维蛋白结合素进行纯化。①加人血浆取新鲜健康男性O型血浆150m L,每次向柱内加入25m L,停留20min,流速3.5m L/m in。②去杂蛋白用pH7.5的Tris-柠檬酸钠平衡液洗柱,洗至流出液280nm下吸光度值<0.02,再用含1mol/L NaCl的Tris-柠檬酸钠洗去其他杂蛋白。③收集纤维蛋白结合素用3m ol/L脲-Tris洗脱液洗柱,收集纤维蛋白结合素。④纤维蛋白结合素收集液去尿素取纤维蛋白结合素的收集液,过SephadeG-25,去除尿素。⑤除菌用0.22μm滤菌器过滤除菌。主要观察指标①十二烷基黄酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳结果。②停留时间对提纯纤维蛋白结合素收得率的影响。③加入血浆量对提纯纤维蛋白结合素收得率的影响。结果①十二烷基黄酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳结果分离胶浓度为7%,浓缩胶浓度为3%,纤维蛋白结合素电泳结果为单一蛋白区带。②停留时间对提纯纤维蛋白结合素收得率的影响血浆加样量为150m L,柱内不停留和停留时间为10,20,30m in时纤维蛋白结合素收得率分别是(65.24±3.45)%,(74.77±4.05)%,(86.99±4.10)%,(80.47±3.75)%。③加入血浆量对提纯纤维蛋白结合素收得率的影响柱内停留时间为20m in时,血浆加样量为100,130,150,180m L时纤维蛋白结合素收得率分别是(72.56±3.63)%,(77.61±3.14)%,(86.99±4.12)%,(74.67±3.05)%。结论在明胶亲和柱体积不变的条件下,制备纤维蛋白结合素的量与血浆加样量、血浆在柱内停留时间密切相关。明胶亲和柱的血浆最佳加样量为150m L,每次血浆在柱内停留时间应为20m in,此法制备的纤维蛋白结合素加样量小,收得率高。