约氏乳杆菌对产蛋鸡生产性能、蛋品质和免疫机能的影响

本试验旨在研究饲粮中添加约氏乳杆菌对产蛋鸡生产性能、蛋品质和免疫机能的影响。试验选取体重和产蛋率相近的540只130日龄海兰褐产蛋鸡,随机分成6组(每组6个重复,每个重复15只):对照组饲喂基础饲粮,试验组饲喂在基础饲粮中分别添加1.0×104、1.0×105、1.0×106、1.0×107和1.0×108 CFU/g约氏乳杆菌的试验饲粮,试验期24周(168d)。结果表明:1)饲粮中添加1.0×105 CFU/g约氏乳杆菌可以在一定程度上改善产蛋鸡产蛋率、平均蛋重、平均日采食量和料蛋比,其中对试验17～24周时的料蛋比影响显著(P<0.05);2)饲粮中添加1.0×104～1.0×108 CFU/g约氏乳杆菌对产蛋鸡蛋壳强度、蛋白高度和哈氏单位均无显著影响(P>0.05),但能够显著提高鸡蛋的蛋黄颜色(P<0.05);3)仅饲粮中添加1.0×106 CFU/g约氏乳杆菌能够提高试验第35天时的血清新城疫抗体效价(P<0.01),但与添加1.0×105、1.0×107和1.0×108 CFU/g约氏乳杆菌一样会降低试验第7天和第35天时的免疫球蛋白A水平(P<0.01),同时可提高试验第28天时的免疫球蛋白A水平(P<0.01)。结果提示,饲粮中添加适量的约氏乳杆菌能够改善产蛋鸡的生产性能和蛋品质,调节机体的免疫功能。

约氏乳杆菌菌粉对断奶仔猪生产性能、免疫机能、肠道pH值及有机酸含量的影响

本试验研究了日粮添加不同水平约氏乳杆菌菌粉对断奶仔猪生产性能、免疫指标、肠道p H值和有机酸含量的影响。试验选用180头28日龄平均初始体重为8.03 kg杜×长×大三元杂交断奶仔猪,随机分为5个处理,每个处理6个重复,每个重复6头猪。对照组日粮为玉米-豆粕型基础日粮,4个试验组日粮分别在基础日粮中添加1.0×10^5、1.0×10^6、1.0×10^7、1.0×10^8CFU/g约氏乳杆菌菌粉,试验期28 d。结果表明：日粮添加约氏乳杆菌菌粉显著改善了断奶仔猪的耗料增重比（P〈0.05）;日粮添加1.0×10^6～1.0×10^8CFU/g约氏乳杆菌菌粉极显著降低仔猪的血清Ig M含量（P〈0.01）,显著降低了盲肠p H值（P〈0.05）;日粮中添加1.0×10^7、1.0×10^8CFU/g约氏乳杆菌菌粉显著降低了回肠p H值（P〈0.05）;而日粮中添加1.0×10^8CFU/g约氏乳杆菌菌粉显著提高仔猪结肠食靡的乳酸含量（P〈0.05）。因此,日粮中添加约氏乳杆菌菌粉可以提高耗料增重比,改善肠道内环境。

约氏乳杆菌对0～17周龄蛋鸡生产性能、脏器指数及血清抗体水平和生化指标的影响

本试验旨在研究不同剂量约氏乳杆菌对0～17周龄蛋鸡生产性能、脏器指数及血清抗体水平和生化指标的影响。选用1日龄京红蛋雏鸡540只,随机分成6组,每组6个重复,每个重复15只鸡。Ⅰ组为对照组,饲喂基础饲粮,Ⅱ～Ⅵ组为试验组,饲喂在基础饲粮中分别添加1.0×104、1.0×105、1.0×106、1.0×107和1.0×108 CFU/g约氏乳杆菌的试验饲粮,试验期120 d。结果表明:1)0～17周龄,Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ组蛋鸡采食量显著低于对照组(P<0.05),Ⅳ组和Ⅵ组蛋鸡料重比显著低于对照组(P<0.05),各组蛋鸡体增重无显著差异(P>0.05)。2)Ⅵ组蛋鸡心脏、肺脏、肾脏指数显著低于对照组(P<0.05),Ⅳ组蛋鸡肾脏指数显著低于对照组(P<0.05)。3)13周龄,Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ组蛋鸡血清免疫球蛋白A水平和新城疫抗体水平显著高于对照组(P<0.05)。4)各组蛋鸡血清生化指标(碱性磷酸酶、谷草转氨酶和谷丙转氨酶活性及葡萄糖、尿素氮、总蛋白、白蛋白、肌酐、总胆红素含量)差异不显著(P>0.05)。综合考虑约氏乳杆菌对0～17周龄蛋鸡生产性能、脏器指数和血清抗体水平的影响可知,饲粮中约氏乳杆菌的最佳添加剂量为1.0×108CFU/g。

约氏乳杆菌对大鼠生长性能、血液指标及脏器指数的影响

本试验旨在研究约氏乳杆菌对大鼠生长性能、血液指标及脏器指数的影响。试验选取SD大鼠80只,雌雄各半。大鼠按照体重相近的原则随机分为4个剂量组,即阴性对照组、试验Ⅰ(5 000 mg/kg体重)、试验Ⅱ(1 000 mg/kg体重)和试验Ⅲ组(200 mg/kg体重)。试验期为30 d。结果表明:试验剂量为200~1 000 mg/kg体重时,约氏乳杆菌对大鼠体增重、总采食量、饲料转化率、血液学指标和病理学指标的影响无显著性差异(P>0.05);试验剂量为5 000 mg/kg体重时,谷草转氨酶、血糖、总胆固醇差异不显著(P>0.05);与其他剂量组相比,大鼠的体增重和总采食量显著降低(P<0.05),但饲料转化率无显著差异(P>0.05);谷丙转氨酶水平显著降低(P<0.05),白蛋白和总蛋白显著增高(P<0.05);雌性大鼠尿素氮和雄性大鼠肌酐显著增高(P<0.05)。综合分析,约氏乳杆菌剂量低于1 000 mg/kg体重时,对大鼠平均日增重、血液指标及脏器指数无影响;约氏乳杆菌剂量高于5 000 mg/kg体重时,对大鼠脏器指数有影响。

鸡约氏乳杆菌的分离鉴定及进化分析

从3日龄健康小鸡肠道中分离到1株乳杆菌,用PCR方法从分离菌株扩增16S rRNA基因,获得大小为1340 bp的DNA片段,该片段的核酸序列已提交GenBank,登录号为EU290749。将分离株的16S rRNA基因核苷酸序列与GenBank上其它乳杆菌进行同源性分析并建立进化树。结果表明,分离株的16S rRNA基因核苷酸序列与NCBI公布的鼠约氏乳杆菌分离株(AB295648)的同源性为99.6%,因此该分离菌株被鉴定为鸡约氏乳杆菌(chicken Lactobacillus johnsonii),命名为HN/0711。

约氏乳杆菌对断奶仔猪生产性能、血液学指标、脏器指数和组织病理学的影响

本试验研究了饲粮添加不同水平约氏乳杆菌对断奶仔猪生产性能、血液学指标、脏器指数和组织病理学的影响,以评价约氏乳杆菌的耐受性。试验选用180头28日龄三元杂交（杜×长×大）断奶仔猪,随机分为5个处理,每个处理6个重复,每个重复6头猪,对照组基础饲粮中不添加约氏乳杆菌,4个处理组分别在基础饲粮中添加1.0×10^5、1.0×10^6、1.0×10^7和1.0×10^8CFU/g约氏乳杆菌,试验期28 d。结果表明：与对照组比较,饲粮添加1.0×10^5～1.0×10^8CFU/g约氏乳杆菌处理组的仔猪,其耗料增重比均显著降低（P〈0.05）,且各处理组间差异不显著（P〉0.05）;饲粮添加1.0×10^7和1.0×10^8CFU/g约氏乳杆菌组,其肝脏指数显著高于其他各组（P〈0.05）,其他指标各组间均无显著差异（P〉0.05）。综上所述,饲粮添加约氏乳杆菌会显著改善断奶仔猪耗料增重比;饲粮添加1.0×10^7和1.0×10^8CFU/g约氏乳杆菌对断奶仔猪肝脏指数有显著影响;饲粮添加高达1.0×10^8 CFU/g约氏乳杆菌对断奶仔猪组织病理观察无不良影响。

蓝狐源约氏乳杆菌菌株ZJBF004分离鉴定与体外益生潜能的评价

为获得犬科动物源乳酸菌并对其益生潜能进行评价,本研究通过测定生长曲线、产酸能力、对低pH和高胆盐环境的耐受性、在体外模拟胃肠道溶液中的存活能力、抑菌能力、抗生素抗性、对蓝狐小肠上皮原代细胞的黏附能力及抗氧化性评价了菌株ZJBF004的益生特性。结果表明:利用固体乳酸细菌培养基从蓝狐的肠道内容物中分离到1株优势乳酸菌,将其命名为菌株ZJBF004,经菌落菌体形态、生理生化特性和16S rRNA基因序列分析鉴定其为约氏乳杆菌(Lactobacillus johnsonii)。菌株ZJBF004产酸能力较强且在37℃培养时能迅速进入对数生长期;在pH=5的培养基中耐受6 h时仍能保持较好的生长情况,在胆盐浓度为3 g/L的条件下至少可耐受6 h,且存活率高于70%,在人工模拟胃液和肠液中耐受3 h时存活率高于90%;对大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌具有良好的抑菌效果;对蓝狐小肠上皮原代细胞的黏附能力为(18.67±3.12)个/细胞;1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基清除率为28.50%,表明菌株ZJBF004具有一定的抗氧化活性。由此可见,新分离的蓝狐源约氏乳杆菌菌株ZJBF004具有优良的体外益生性能,可作为潜在犬科动物用益生菌进一步研究。

约氏乳杆菌活菌冻干制剂的研制

本研究对分离鉴定的一株抗逆性较强的约氏乳杆菌LY7株的培养条件进行了优化,探索了其大规模培养的工艺条件,并按照优化的工艺条件制成冻干制剂。同时研究了其对妊娠母猪、新生仔猪及小白鼠的安全性,结果表明,该活菌冻干制剂安全可靠,并对仔猪腹泻有一定的预防作用。

约氏乳杆菌对LPS诱导的奶牛子宫内膜上皮细胞炎症反应的影响

子宫内膜炎是影响奶牛生产的重要疾病之一,该病的有效防控至关重要。本试验探讨了约氏乳杆菌对LPS诱导的奶牛子宫内膜上皮细胞炎症反应的预防作用。约氏乳杆菌悬浮至104,105,106 CFU/mL后,与奶牛子宫内膜上皮细胞共同培养3h,添加1mg/L LPS处理3h,检测趋化因子IL-8和促炎因子TNF-αmRNA、蛋白分泌量和NF-κB信号通路关键蛋白表达量。结果表明,LPS处理奶牛子宫内膜上皮细胞3h后,IL-8和TNF-αmRNA和蛋白分泌量均显著上升(P<0.05),104 CFU/mL约氏乳杆菌预处理后IL-8、TNF-α表达和NF-κB信号通路关键蛋白均显著降低(P<0.05),而105或106 CFU/mL约氏乳杆菌预处理并未影响IL-8和TNF-α表达。结果提示,约氏乳杆菌具有预防奶牛子宫内膜炎的作用,且104 CFU/mL表现出良好的抗炎效用。

约氏乳杆菌GLJO02通过改善肠道通透性缓解DSS诱导的小鼠结肠炎

目的探究约氏乳杆菌GLJO02对DSS诱导的小鼠结肠炎的影响。方法从灌胃普洱茶的小鼠粪便中筛选得到益生菌约氏乳杆菌GLJO02。将18只SPF级C57小鼠随机分成3组:Control+PBS组(6只)、DSS+PBS组(6只)及DSS+GLJO02组(6只),均自由饮用含3%DSS水7 d以建立结肠炎模型,其中DSS+GLJO02组提前1周灌胃GLJO02菌液;造模期间观察小鼠体质量变化情况及粪便性状改变情况;于造模第8天处死小鼠并留取小鼠血清及肠道样品,检测小鼠血清中LPS水平以评估肠道通透性,通过H&E染色评估小鼠结肠病理情况,通过实时荧光定量技术检测小鼠结肠中炎症因子及紧密连接蛋白的表达情况,通过免疫荧光法检测紧密连接蛋白ZO-1及Occludin的表达情况,并通过高效液相色谱法检测小鼠盲肠内容物中短链脂肪酸的含量。结果与Control+PBS组相比,DSS+PBS组小鼠体质量显著降低、DAI评分提高同时结肠长度缩短。与DSS+PBS组相比,DSS+GLJO02组小鼠症状缓解,体质量下降显著改善(t=6.948,P<0.0001),结肠长度提高(t=3.790,P=0.0034),DAI评分显著降低(t=11.880,P<0.0001);组织病理学评分显著下降(t=10.410,P=0.0001);促炎症因子表达水平降低;免疫荧光检测结果显示ZO-1、Occludin蛋白表达增多;应用高效液相色谱法发现GLJO02处理后能够显著提升盲肠中短链脂肪酸的含量(乙酸:t=4.042,P=0.0054;丙酸:t=12.380,P<0.0001;丁酸:t=7.819,P<0.0001)。结论约氏乳杆菌GLJO02能够通过改善肠道通透性,起到缓解DSS诱导的结肠炎的作用。

培养时间影响约氏乳杆菌胆汁酸耐受力测定结果的规律及机制

以2株约氏乳杆菌为受试菌株分析了培养时间影响其胆汁酸耐受力测定结果的规律及机制。将菌株接种至含不同类型结合胆汁酸的培养基中,分别培养12 h和18 h,测定活菌数、胆汁酸耐受力、吸光度值、胆汁酸解离率、p H值和细胞膜完整性。结果表明,胆汁酸的抑菌活性与破坏细胞膜完整性有关,培养时间通常会显著影响菌株的胆汁酸耐受力测定结果。培养时间延长后,菌株对二羟基结合胆汁酸的耐受力升高,对三羟基结合胆汁酸的耐受力降低,该现象与培养过程中结合胆汁酸解离及培养基p H值变化有关。培养时间达到12 h后,培养基中的全部结合胆汁酸几乎都被水解为二羟基或三羟基游离胆汁酸,二羟基游离胆汁酸在酸性条件下沉淀析出,因此抑菌能力显著下降。

一株新饲用乳杆菌的分离鉴定及益生性研究

从猪粪便中分离得到一株新饲用乳杆菌,对其16S rDNA基因进行了测序,该段基因序列已提交GenBank,登录号为HQ641209。将该菌株16SrDNA基因序列进行在线BLAST比对并与其他乳杆菌属菌株的16S rDNA序列建立系统发育树,结果显示该菌16SrDNA序列与NCBI公布的约氏乳杆菌Lactobacillus johnsonii(AB295648)的同源性为99.7%,因此该菌鉴定为约氏乳杆菌(Lactobacillus johnsonii),将其命名为"Lactobacillus johnsonii Sun001"。经测试,该菌株对E.coli K88、K99菌株的生长有抑制作用,在pH为2.5的模拟胃液中处理3h存活率为68.8%,在0.3%胆盐浓度的模拟肠液中处理3h存活率为21.4%。

被膜态与浮游态猪源乳杆菌上清液抑菌活性比较分析

试验旨在比较分析猪源约氏乳杆菌L-76和嗜淀粉乳杆菌L-102被膜态和浮游态下其上清液对病原菌的抑菌活性。采用结晶紫染色法测定L-76和L-102的生物被膜形成能力,研究其被膜态和浮游态乳杆菌上清液及上清液与不同影响因素作用后的抑菌活性,并利用扫描电镜观察其两种状态下的上清液对指示菌形态的影响。结果显示,L-76、L-102乳酸菌具有较强的生物被膜形成能力,被膜态和浮游态乳杆菌L-76、L-102具有良好的抑菌活性,其上清液经蛋白酶作用后,被膜态L-76和L-102上清液的抑菌圈直径比浮游态明显变小;经过氧化氢酶和不同温度作用后,两种状态的乳杆菌上清液的抑菌活性无明显变化(P>0.05),但在pH 3.0作用下,两种状态的乳杆菌上清液的抑菌效果最好;扫描电镜结果显示,被膜态乳杆菌上清液对金黄色葡萄球菌的形态影响略大。综上所述,两种状态下乳酸杆菌上清液中均含有抑菌物质,且被膜态乳酸杆菌上清液中的抑菌物质含量略多或活性略高。

猪源生物被膜乳酸菌的筛选、鉴定与体外益生特性评价

将分离自健康猪新鲜粪便的乳酸菌进行功能性和安全性评价,旨在筛选出有利于猪健康生长的优良乳酸菌菌株。结果显示,共分离到2株对猪源大肠杆菌等病原菌具有抑制作用的乳酸菌菌株,并从中成功筛选出1株生物被膜形成能力较强的分离菌株L-8。经鉴定,分离菌株L-8为约氏乳杆菌(Lactobacillus johnsonii),具有一定的产酸能力,能够耐受胃内pH值4.0~10.0和肠道1%胰蛋白酶环境,对猪小肠上皮细胞(IPEC-J2)具有一定的黏附性,其生存能力和生长性能均较好。此外,分离菌株L-8对小鼠无致病性,具有安全性。综上,分离菌株L-8具有作为猪用益生菌的潜在益生特性和开发前景。

不同猪源受体菌表达猪流行性腹泻病毒保护性抗原S1诱导免疫应答的比较研究

旨在比较猪源副干酪乳酪杆菌(Lacticaseibacillus paracasei)、罗伊氏黏液乳杆菌(Limosilactobacillus reuteri)、约氏乳杆菌(Lactobacillus johnsonii)作为口服疫苗载体,表达外源蛋白刺激仔猪产生免疫能力的强弱,以期选取合适乳酸菌作为受体菌载体。本研究首先体外鉴定表达PEDV S1蛋白的重组猪源副干酪乳酪杆菌(pPG-T7g10-S1/L.paracasei 27-2)、猪源罗伊氏黏液乳杆菌(pPG-T7g10-S1/L.reuteri J31)、猪源约氏乳酸杆菌(pPG-T7g10-S1/L.johnsonii 6332)的耐酸耐胆盐能力,考察3株重组菌的抗逆性。结果表明,3株重组菌均能够耐受酸和胆盐环境,且与其野生型菌株没有显著差异。接下来为比较3株重组菌的免疫效果,口服免疫初生仔猪后,利用间接ELISA和中和试验检测仔猪产生的特异性抗体水平及其中和活性;并测定免疫后仔猪血清和肠黏膜中各细胞因子水平。结果显示,口服免疫后,与对照组相比,3株免疫组仔猪血清IgG抗体和鼻拭子、肛拭子、肠黏液中SIgA抗体水平均显著升高,且可持续至第28天左右,其中pPG-T7g10-S1/L.paracasei 27-2组诱导产生的抗体水平显著高于其他两组免疫组(P<0.05);仔猪产生特异性的IgG和SIgA对PEDV均具有中和活性。仔猪血清中细胞因子IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-10水平和对照组相比显著升高(P<0.05),但3株重组菌组间细胞因子水平未见明显差异;仔猪空肠黏膜中细胞因子IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-17、IL-21、TGF-β、APRIL和BALL水平与对照组相比有所升高,且pPG-T7g10-S1/L.paracasei 27-2组IL-4、IL-5、IL-6、TGF-β、IL-17、IL-21和BALL相比其他组显著升高(P<0.05)。综上所述,本研究分别将质粒组成型表达PEDV主要保护性抗原S1的重组猪源副干酪乳酪杆菌、猪源罗伊氏黏液乳杆菌和猪源约氏乳酸杆菌口服免疫仔猪,结果显示能够刺激机体产生针对PEDV的黏膜免疫、体液免疫和细胞免疫,且相较于其他2株重组菌,重组猪源副干酪乳酪杆菌pPG-T7g10-S1/L.paracasei 27-2的口服免疫效果最好。该试验结果为构建更为有效的乳酸菌口服疫苗提供了科学数据。

2株猪源乳酸杆菌的抗逆性和生长特性分析

为分析猪源嗜淀粉乳杆菌L-102(Lactobacillus amylovorus)和约氏乳杆菌L-76(Lactobacillus johnsonii)的抗逆性和生长特性,为乳酸菌进一步的体外研究提供理论依据。分别对L-102、L-76乳酸杆菌的耐酸碱、耐胆盐、耐胰蛋白酶、黏附性、抑菌性、产酸能力、生长能力及对小鼠致病性进行了测定和分析。结果表明:乳酸杆菌L-102和L-76对pH 2~11的酸碱环境具有抵抗能力,可耐受生长介质中含0.1%~0.2%的胆盐和1%的胰蛋白酶;对IPEC-J2细胞有一定的黏附作用;能抑制大肠杆菌、沙门氏菌和金黄色葡萄球菌的生长;L-102和L-76乳酸杆菌的产酸在pH 4.1~4.3;培养4 h后进入生长对数期;经50℃和60℃高温作用5~15 min,其活菌数可达到10^(7)CFU/mL;通过腹腔注射和灌胃小鼠发现,小鼠无死亡。表明嗜淀粉乳杆菌L-102和约氏乳杆菌L-76具有潜在的益生菌特性,有望发展成为用于养猪行业的饲用益生乳酸菌。

不同微生物对魔芋低聚甘露糖的降解与利用比较

以体外静态培养的方式探讨了3株不同属微生物(青春双歧杆菌Bifidobacterium adolescentis、单形拟杆菌Bacteroides uniformis、约氏乳杆菌Lactobacillus johnsonii)对魔芋低聚甘露糖(konjac mannon oligosaccharide,KMOS)的降解利用规律及代谢产物产生情况。结果表明,Bacteroides uniformis能快速且完全利用DP 2～3组分,Lactobacillus johnsonii虽然也能完全利用这2个组分,但是利用效率较慢且具有明显的迟滞效应;而Bifidobacterium adolescentis则只能完全利用DP 2组分,对DP 3～4组分的利用不完全且有一定迟滞性。3株菌在含KMOS的发酵培养基中均能积累有机酸和短链脂肪酸(short chain fatty acid,SCFA),但不同菌的产酸规律存在一定差异。

一种治疗奶牛阴道炎症微生态制剂的临床药效学研究

为检验约氏乳杆菌SQ0048菌株所制备的微生态制剂对临床型奶牛阴道炎症的治疗作用,将其应用于患有阴道炎的病牛体内,利用临床兽医学方法观察给药前后患牛的临床症状,采用变性梯度凝胶电泳法检测给药前后患牛阴道内的微生物菌群种属,使用酶联免疫吸附技术检测给药前后患牛血清内细胞因子分泌量。结果显示,此微生态制剂不仅可以缓解临床奶牛阴道炎性症状,提高发情率及受胎率,还可以减少或杀灭阴道内的利氏卟啉单胞菌、铜绿假单胞菌、化脓隐秘杆菌及链球菌等,增加约氏乳杆菌SQ0048菌株及谷氨酸棒状杆菌的数量,改善阴道微生态环境,维持阴道的微生态平衡,同时给药后患牛血清中IL-1β、IL-6、IFN-α、TNF-α分泌量显著低于给药前,而IL-10分泌量则显著高于给药前。研究表明,该微生态制剂具有一定抑制炎症的生物学功能。