应用区带离心法纯化地鼠肾细胞乙型脑炎灭活疫苗

目的应用区带离心法纯化原代地鼠肾细胞乙型脑炎灭活疫苗。方法浓缩的原代地鼠肾细胞乙脑灭活疫苗,经36％和60％不连续蔗糖密度、23 000r/min离心4h后,收取纯化的乙脑抗原组分,制成纯化乙脑疫苗。结果浓缩疫苗经一步区带离心纯化后,抗原效价提高3倍以上,蛋白去除99.5%以上。经稀释制成的半成品疫苗与未经浓缩的原疫苗相比,抗原效价提高4倍以上,蛋白去除99％以上。结论区带离心法可用于纯化地鼠肾细胞乙脑疫苗。

肾综合征出血热原代地鼠肾细胞灭活疫苗纯化方法的研究

目的 建立简便、适合大规模肾综合征出血热灭活疫苗的纯化方法。方法 采用超滤浓缩、醋酸锌沉淀和柱层析（亲和层析、离子交换层析和凝胶过滤层析）等方法，对出血热原代地鼠肾细胞灭活疫苗进行提纯对比试验。结果 用超滤浓缩和Sepharose 4FF凝胶柱层析或用醋酸锌沉淀和凝胶柱层析，纯化的疫苗均可达到质量标准，而用 cellufine sulfate gel亲和层析和离子交换层析均不理想。结论 建立了经济、适合大规模肾综合征出血热灭活疫苗的纯化方法。

流行性出血热(EHF)地鼠肾细胞(GHKC)灭活疫苗的初步人体观察

用流行性出血热(EHF)病毒L99株(家鼠型)感染金黄地鼠肾细胞(GHKC),经福尔马林(0.025％)灭活制备EHF灭活疫苗(88-17批),经检定批准,肌肉(1ml)接种志愿者12人(IO人于0、7、28天,2人分别于0、7天及0、28天各一针),进行了安全性及抗体反应的初步人体观察。结果显示,此种疫苗对人体接种无明显不良反应。接种后,12名接种者IFA、ELI-SA及中和抗体(EFRNT)全部阳转,180天和360天后仍分别有10人血清中和抗体阳性。初步表明,此疫苗是安全的,可以有效诱导抗体产生,其中和抗体多数可持续一年以上。

肾综合征出血热地鼠肾细胞灭活疫苗(Ⅱ型)稳定性的研究

采用空斑减少中和试验（ＰＲＮＴ）检测疫苗效力的方法，对肾综合征出血热地鼠肾细胞灭活疫苗（Ⅱ型）进行了系统地稳定性试验研究。结果表明，疫苗置３７℃３ 天，室温３ 周，２～８℃保存一年、一年半、两年和两年半。效力试验检测结果均达到合格标准，证明疫苗稳定性良好。

双价肾综合征出血热沙鼠肾细胞灭活疫苗接种效果观察

现已知我国半数地区间时存在着姬鼠和家鼠二种型别的肾综合征出血热(HFRS)的混合流行,因此,有必要研制能同时预防这二种型别的疫苗。目前我国用于生产疫苗的三株HFRS病毒,对同型各毒株均表现较好的中和作用,但对异型病毒的交叉中和作用较差。经人体免疫三针后,对同型病毒的中和抗体阳转率可达90%,而对异型病毒的阳转率仅30%左右。因而,在我国,研制双价HFRS疫苗的工作早已被提出来了。本文报道我们研制的双价HFRS沙鼠肾灭活疫苗免疫人体的结果。材料与方法一、疫苗:由杭州天元生物药业公司生产的双价肾综合征出血热沙鼠肾细胞灭活疫苗(批号双-4),制造疫苗的毒种为Z10(Ⅰ型)和Z37(Ⅱ型),病毒在沙鼠肾原代细胞培养后,经β-丙内脂灭活,内含0.1%人血白蛋白和0.5mg/ml氢氧化铝佐剂,先分别制成Ⅰ型和Ⅱ型的单价疫苗,再按不同比例混合而成双价疫苗。

肾综合征出血热双价地鼠肾细胞灭活疫苗的安全性及血清学效果评价

目的 :评价肾综合征出血热地鼠肾细胞双价灭活疫苗的安全性及血清学免疫效果。方法 :按统一方法观察接种后副反应发生情况 ,以蚀斑减少中和试验方法测定免疫前后血清中和抗体。结果 :对 10 0人进行系统观察 ,局部反应与全身反应发生率均为 2 .0 0 % ,总反应率为 4.0 0 % ,其中强反应发生率为 1.0 0 % ;无头疼、头晕、恶心、皮疹等全身症状及注射处硬结、痒、烧灼感、淋巴结肿痛等局部症状发生。免疫后Ⅰ型病毒中和抗体阳转率为 92 .5 0 % ,Ⅱ型病毒中和抗体阳转率为 95 .0 0 % ,90 .0 0 %受观察者对两型病毒均阳转。结论

原代地鼠肾细胞乙脑灭活疫苗中残余细胞基质的检测

目的找出多批原代地鼠肾细胞乙型脑炎灭活疫苗高过敏反应发生率的原因，提出解决方案。方 法利用ＨＰＬＣ排阻层析结合ＥＬＩＳＡ方法相对定量地分析高反应性和无反应性疫苗的残余细胞基质成分，并利用 凝胶过滤柱层析去除疫苗中细胞源性杂质。结果高反应性疫苗中地鼠肾细胞基质成分的残留量偏高；利用常压 凝胶过滤柱层析法可将残留的细胞基质成分几乎完全去除。结论本次过敏反应事件是由部分疫苗中地鼠肾细 胞基质成分残留量偏高所致，用一步分子筛柱层析处理疫苗是一种简单有效的解决办法。

浙江省肾综合征出血热纯化灭活疫苗的免疫效果和免疫策略研究

目的：观察HFRS（Ⅰ型）鼠脑纯化灭活疫苗全程和加强免疫后18个月的流行病学。血清学效果。方法：采用免疫荧光法检测微量细胞病变试验，分别检测血清中的特异性抗体及中和抗体。结果：全程免疫后15天，中和抗体阳性率为40％，GMT为4．06；360天降为阴性，GMT为2.50；加强后2周抗体阳性率为50％，GMT为4.35.全程免疫后15天IFA抗体阳性率为100％，GMT为81．75；至360天阳性率降至12．50％，GMT为5．69；加强后2周阳性率升至81．25％，GMT为1297。加强免疫6363例，仅2例出现弱反应，无中、强反应。免后18个月经流行病学调查，1年内（经春、秋两个流行高峰）接种组发病2例，发病率为19.12／10万；对照组发病12例，发病率为74.06／10万，保护率为74.18％，保护指数为3.87；加强1针后的6个月中，接种组无病例，对照组发病3例，发病率47.15／10万，保护率达100％。结论：该疫苗安全性好；有较好的免疫应答；近期和中期流行病学防病效果良好。

浙江省肾综合征出血热纯化灭活疫苗现场免疫效果和免疫策略研究

本文报告肾综合征出血热纯化灭活疫苗在浙江省高发疫区大面积人群接种后的安全性、血清学和流行病学近期防病效果。本次共接种１０４６０人，全程接种者占９７．３０％；对照１６１５９人。全程接种后两周荧光抗体阳转率为９８．５５％（６８／６９），中和抗体阳转率为４４．８３％，几何平均滴度分别为６９．３６和４．４４。经一个流行期观察，接种组无发病；对照组发病１２例，发病率为７４．２６／１０万，人群近期保护率达１００％。人群接种后局部和全身反应较明显，注射局部疼痛感达１００％，但均未发生异常反应（包括隐性感染者）。预测疫苗接种后当年发病数减少了３３例，取得一定的经济和社会效益。

双价肾综合征出血热灭活疫苗(地鼠肾细胞)细菌内毒素检查法

目的建立双价肾综合征出血热灭活疫苗(地鼠肾细胞)细菌内毒素检查法。方法细菌内毒素检查的定量测定法与凝胶限量法两种方法进行干扰实验。结果通过样品进行适当的稀释,凝胶法:样品浓度为1.2×10-3mg/mL,使用灵敏度为0,06EU/mL的鲎试剂进行细菌内毒素检查无干扰作用;定量测定:与凝胶法相同的样品浓度回收率好,无干扰作用。结论双价肾综合征出血热灭活疫苗(地鼠肾细胞)可以建立细菌内毒素检查法。

甲型肝炎减毒活疫苗(H2株)和灭活疫苗(L8株)诱导小鼠体液及细胞免疫应答

目的评估甲型肝炎减毒活疫苗和灭活疫苗的免疫学效果。方法用甲型肝炎减毒活疫苗(H2株)和灭活疫苗(L8株)分别经腹腔免疫BALBc小鼠后,用ELISA法检测血清中抗HAVIgG、TNFα、IFNγ和IL2;用流式细胞仪对全血中T细胞亚群分类;3HTdR掺入法检测T淋巴细胞增殖。结果减毒活疫苗组在初免后诱导的体液和细胞免疫水平均低于灭活疫苗组,加强免疫后,与灭活疫苗相当。灭活疫苗组IFNγ的峰值出现时间较减毒活疫苗组晚,但水平较高。结论两种疫苗均可诱导体液和细胞免疫应答,减毒活疫苗进行加强免疫后可诱导更好的系统免疫应答。

地鼠肾细胞狂犬病纯化疫苗临床研究观察

了解地鼠肾细胞狂犬病纯化疫苗接种安全性及有效性。分别以 1.0ml及 0 .5ml的剂量 ,按暴露后及暴露前免疫程序给 313人接种 ,用小鼠中和试验法检测血清中和抗体效价。结果显示 :临床副反应轻微 ,副反应率为0 .89%～ 15 % ;免疫全量疫苗和半量疫苗的人群均获保护力 ,抗体阳转率为 10 0 % ,免后抗体GMT滴度分别为35 .2IU/ml(n =32 )和 31.4IU/ml(n =37) ,经检验两组无显著性差异 (P>0 .0 5 ) ;免疫全量疫苗和半量疫苗两组的免疫前、后相比 ,经检验有显著性差异 (P <0 .0 5 ) 。

肾综合征出血热灭活疫苗免疫大鼠的抗体应答

本文对实验大鼠进行单价肾综合征出血热灭活疫苗免疫，结果表明免疫大鼠能产生较高的同型和异型中和抗体及IFA抗体应答，因而，大鼠可以作为疫苗效力评价的实验动物。

安徽省肾综合征出血热沙鼠肾细胞Ⅰ型灭活疫苗现场实施及防病效果观察

安徽省肾综合征出血热沙鼠肾细胞Ⅰ型灭活疫苗现场实施及防病效果观察宋明宇，魏强，陈家新，陈孝英，丁广修，孙仁品，许中安，花昌华，李含，周本良肾综合征出血热（ＨＦＲＳ）沙鼠肾细胞灭活Ⅰ型疫苗是新近研制的生物制品，经小范围人群接种试验证明是安全的。根据中国...

大鼠效力试验模型对肾综合征出血热灭活疫苗的敏感性

目的 研究实验大鼠效力试验模型对肾综合征出血热灭活疫苗的敏感性。方法 用不同剂量、不同浓度肾综合征出血热灭活疫苗免疫大鼠 ,然后采用直接免疫酶斑减少中和试验检测血清汉坦病毒中和抗体 (NA)。结果与讨论 采用每剂 0 12 5ml的疫苗免疫大鼠可产生有效的免疫应答 ;疫苗应采用原液免疫 ,不宜做稀释 ;大鼠可作为疫苗效力评价的实验动物。

精制地鼠肾细胞狂犬病疫苗纯化工艺的建立

分别用Sepharose 4B、Sephacryl 2 0 0HR和Sepharose 6 Fastflow柱色谱进行地鼠肾细胞狂犬病疫苗浓缩原液纯化试验 ,试制精制地鼠肾细胞狂犬病疫苗。对疫苗的残余牛血清含量、效力、收获率和安全性进行检测 。

乙型脑炎减毒活疫苗工艺中金黄地鼠肾细胞培养液里谷氨酰胺添加的研究

目的比较谷氨酰胺在不同浓度和不同添加阶段的条件下,作为细胞生长液的成分,对乙型脑炎减毒活疫苗生产中金黄地鼠肾细胞的培养效果以及后续生产工艺的影响。方法 (1)以两种添加阶段:将谷氨酰胺作为细胞生长液体培养基的成分加入细胞培养和培养细胞时临时配制后加入细胞培养;(2)以不同的浓度:按0.05、0.1、0.2 g/L的浓度加入细胞培养。结合两种条件后,每种组合条件生产3批地鼠肾细胞,对所有批次细胞的生长情况及后续接种病毒后,对应的病毒生长情况进行比较研究。结果谷氨酰胺在培养细胞时临时配制后加入细胞培养所生产的地鼠肾细胞质量优于其作为细胞生长液体培养基的成分加入细胞培养,采用秩和检验,差异有统计学意义(P=0.002<0.05);谷氨酰胺按0.1 g/L和0.2 g/L的浓度加入细胞培养所生产的地鼠肾细胞质量优于按0.05g/L浓度,在2种添加阶段其,差异有统计学意义(P=0.02<0.05),但0.1g/L和0.2 g/L的浓度之间,无论谷氨酰胺的添加阶段在培养基中添加P=0.513,在培养时临时添加P=0.827),两者差异无统计学意义(P>0.05)。结论在乙型脑炎减毒活疫苗生产所需的地鼠肾细胞培养中,谷氨酰胺适合在培养细胞时临时配制后加入细胞培养容器,浓度不宜低于0.1g/L。