全胚制备鸡成纤维细胞生产鸡传染性法氏囊病双价活疫苗的试验

采用传统法和全胚法制备鸡成纤维单层细胞 ,生产了鸡的传染性法氏囊病双价活疫苗。传统法和全胚法制备的细胞苗的效价无明显差异 (TCID50 /ml) ,配置的双价活疫苗效价也无明显差异 (EID50 /羽 )。全胚法可简化生产工序 ,鸡胚利用率比传统法提高了

鸡全胚成纤维细胞在鸡痘细胞活疫苗生产中的应用

采用鸡胚全部组织(全胚法)制备鸡胚成纤维单层细胞和采用鸡胚部分组织(常规法)制备鸡胚成纤维单层细胞生产了鸡痘细胞活疫苗,接毒后均产生大量的感染多核细胞和典型细胞融合性病变(胡椒粒样)。鸡胚效价检测表明,鸡痘细胞苗和鸡痘组织苗均可引起鸡胚绒毛尿囊膜水肿、增厚或痘斑,但鸡痘细胞苗产生痘斑数量明显高于鸡痘组织苗。鸡体刺种结果表明,鸡痘细胞苗诱发的免疫反应(发痘)好于鸡痘组织苗;与常规法相比,全胚成纤维单层细胞制备方法可提高鸡胚利用率2倍以上。全胚法也可应用于制备其他鸡成纤维细胞疫苗。

鸡胚成纤维细胞原代培养与纯化的初探

本文利用鸡胚成纤维细胞(CEF)进行原代培养与纯化,了解鸡胚成纤维细胞在一定生理状态下所需的各种条件,从而控制培养基的成分,选择最适合于鸡胚成纤维细胞生长的各种因素。在此实验中消化液的浓度及消化的时间是关键,此外实验过程的无菌也是保证实验成功的重要因素。

新城疫病毒在鸡胚成纤维细胞中的培养及纯化

利用鸡胚成纤维细胞对新城疫毒株GM0511株进行增殖培养和蚀斑法纯化,通过对最适细胞密度、病毒最佳接种浓度、覆盖琼脂糖浓度、蚀斑形成时间等条件进行优化摸索,最终获得产斑时间一致,蚀斑大小一致、出斑整齐的纯化新城疫毒株,并使原病毒血凝效价提高2个滴度,为后续实验奠定基础。

鸡胚成纤维细胞原代培养及应用

原代培养是指在体外模拟体内生理环境,使从体内取出的组织细胞生存、生长和传代,并维持原有组织细胞的结构和功能特性。鸡胚成纤维细胞具有相对容易获得、增殖能力强、适应性强、良好的耐受性、性状比较稳定等特点,使得其被广泛地应用于分子和细胞生物学研究的许多方面。论文综述了近年来有关鸡胚成纤维细胞的培养技术,如鸡胚的取材、细胞的分离、纯化和培养,同时介绍了应用进展和未来研究方向。

利用雉鸡胚成纤维细胞制造鸡马立克氏病疫苗的研制与应用

采用经检测无鸡新城疫、鸡痘、鸡马立克氏病、鸡支原体、鸡沙门氏菌、禽白血病等致病性微生物感染的11日龄雉鸡胚、10日龄普通京白鸡胚以及SPF胚制成鸡胚成纤维细胞,然后接种火鸡疱疹病毒(HVTFc-126)制成冻干疫苗各50万羽份。将以上3种鸡胚疫苗同时进行蚀斑计数、特异性检测和安全检验,发现除普通鸡胚苗轻度污染外源病毒外,其它各项检验均符合标准,而且雉鸡胚苗保护率高于普通京白鸡胚苗20%以上,低于SPF胚苗10%左右。

不同消化液对鸡胚成纤维细胞贴壁率的影响

细胞是培养和研究病毒及制造病毒疫苗的有效工具,细胞培养还广泛地应用于病毒的分离、鉴定,人工感染制成的弱毒疫苗和灭活疫苗以及筛选异源和同源的弱毒株都离不开细胞的培养工作。利用细胞培养技术已经生产出多种生物制品,随着病毒学等研究工作的发展，鸡胚成纤维细胞培养工作越来越受到重视，采用不同的消化液对长成单层的成纤维细胞进行消化，通过消化后细胞的贴壁率比较其优缺点，

重组猪胰蛋白酶在制备狂犬病疫苗(鸡胚成纤维细胞)中的应用

目的探索重组猪胰蛋白酶(简称重组猪胰酶)在制备狂犬病疫苗[鸡胚成纤维细胞(chicken embryo fibroblast,CEF)]中的应用。方法采用SDS-PAGE及Western blot法分析鉴定重组猪胰酶及猪胰酶;用1.25 mg/mL猪胰酶及1、0.25、0.0625、0.015625 mg/mL重组猪胰酶分别消化制备原代CEF,比较细胞活率、单胚细胞收获量、体外培养48 h的细胞增殖比及培养96 h的细胞形态,筛选最适重组猪胰酶工作浓度;用最适浓度重组猪胰酶及1.25 mg/mL猪胰酶消化后原代CEF对狂犬病病毒滴度的影响。结果重组猪胰酶仅有1条蛋白条带,纯度100%,而猪胰酶有多条蛋白杂带,纯度33%;与1.25 mg/mL猪胰酶比较,0.0625 mg/m L重组猪胰酶消化的CEF细胞活率、单胚细胞收获量及培养48 h的细胞增殖比差异均无统计学意义(P均>0.05),且其细胞形态相当,其最适工作浓度为0.0625 mg/mL;2种胰酶制备CEF的狂犬病病毒滴度差异无统计学意义(P>0.05)。结论重组猪胰酶可代替猪胰酶用于狂犬病疫苗(CEF细胞)的生产。

狂犬病病毒在鸡胚成纤维细胞上的传代适应性

目的探讨狂犬病病毒(Rabies virus,RV)aG株在原代鸡胚成纤维细胞上的传代适应性。方法将RV北京株固定毒10aG株豚鼠脑毒种在鸡胚成纤维细胞上连续传代培养,显微镜观察细胞的形态变化,ELISA检测各代次收获液中的病毒量,取11、21、31代病毒收获液,小鼠脑内毒力测定法检测病毒滴度。利用正交试验筛选最适病毒培养条件,以筛选的最佳比例接种病毒,绘制病毒生长曲线,并进行特异性及免疫原性检测。结果狂犬病病毒aG株感染鸡胚成纤维细胞未观察到明显的细胞病变效应,随着传代次数的增加,病毒含量呈上升趋势,11、21、31代病毒收获液的滴度分别为4.0、7.7和7.17 LogLD50/ml;多次传代后,最适培养条件为细胞浓度150×104个/ml、接种比例1∶500、血清浓度2%、收获时间为5 d;病毒连续收获3次后,细胞开始脱落,经检测其病毒滴度可达7.0 logLD50/ml以上,中和指数可达8 500,第21代病毒制备成的试制疫苗效价为2.0 IU/ml。结论 RV北京株固定毒10 aG株豚鼠脑毒种可适应于鸡胚细胞培养,为鸡胚细胞狂犬病疫苗的研究奠定了基础。

人用狂犬病疫苗全球回顾

自巴斯德研制出狂犬病粗制神经组织疫苗以来,各种人用狂犬病疫苗相继问世,其效力和安全性各不相同.如使用得当,新的细胞培养疫苗的保护率几达100%,且安全性很高.尽管如此,每年全世界仍有4万余人死于狂犬病.有些暴露前及暴露后的疫苗对照实验及临床研究表明,纯化的鸡胚细胞疫苗(PCEC)Rabipur的安全性和效力与人二倍体细胞疫苗(HDCV)相同,而后者是目前人用狂犬病疫苗的金标准.此外,用PCEC疫苗加强免疫不会诱生免疫介导的超敏反应,而使用HDCV时约6%的人会发生这样的超敏反应.

纯化鸡胚细胞狂犬病疫苗瑞必补尔^TM临床试验概述

纯化鸡胚成纤维细胞狂犬病疫苗(PCECV)瑞必补尔^TM自问世以来在世界各地得到广泛的使用，并在全球范围内进行了八十多项临床试验，是目前全球应用最多的细胞培养狂犬病疫苗，该疫苗已于2004年正式进入中国市场，为加强中国防疫工作者对这种高品质疫苗的了解，本文对瑞必补尔^TM的临床试验进行了概述。

纯化鸡胚细胞疫苗免疫诱导的抗体对不同种狂犬病病毒交叉中和作用

狂犬病是一种被忽视的人畜共患病,由属于狂犬病病毒属的病毒引起。估计的每年60000例人狂犬病死亡病例中多数发生在亚洲和非洲流行国家,并且主要是由犬传播的经典狂犬病病毒(rabies virus,RABV)引起的。在过去的10年里,已经鉴定了部分狂犬病病毒属的新病毒种。

提高火鸡疱疹病毒疫苗效价方法的研究

将火鸡疱疹病毒（ ＨＶＴ） 接种于鸡胚成纤维细胞（ ＣＥＦ） 后，用显微镜观察病变（ＣＰＥ） 达５０ ％ 时添加等量的健康ＣＥＦ，继续培养至ＣＰＥ 达８０ ％ 时收获培养物，此时病毒蚀斑数最高。

鸡传染性法氏囊病毒增殖和纯化方法的研究

本试验通过IBDV标准毒株(IBDVBC6/85F4)和IBDV河北分离株分别接种于SPF鸡胚以及鸡胚成纤维细胞(CEF)。吸取接毒后2～5天内死亡鸡胚的尿囊液和绒毛尿囊膜,及细胞病变达到80%时的细胞培养液。经反复冻融,利用氯仿沉淀病毒,聚乙二醇6000浓缩病毒,蔗糖梯密度低温超速离心和葡聚糖G-200凝胶柱过滤等方法纯化病毒。经分光光度计检测,病毒的蛋白含量为1.377毫克/毫升,琼脂扩散试验证实被检抗原为IBDV。

浅谈猪伪狂犬病的防治

猪伪狂犬病是由伪狂犬病毒引起的一种急性、热性传染病,各种家畜和鸟类都可被感染。伪狂犬病毒(PRV)属于疱疹病毒科猪疱疹病毒属,病毒粒子呈圆形或椭圆形,为线性双股DNA,有囊膜和纤突PRV只有一种血清型,但毒株间存在差异;能在猪肾细胞和鸡胚成纤维细胞中增殖,并产生病变,核内有嗜酸性包涵体。病毒主要存在于病猪的鼻分泌物、唾液、乳汁和尿中,有的带毒猪可持续排毒一年本病毒对外界环境的抵抗力很强。

鸡马立克疫苗稀释后置20℃以上环境中对PFU影响的试验

鸡马克氏病(MD)疫苗(HVTFc—126株)用SPG稀释后,在自然温度(20℃～22℃)下,随着时间的延长,蚀斑形成单位(PFU)显著下降,如果在这样的状况下免疫,会严重影响对鸡的防疫效果,如何指导用户正确使用MD疫苗,对有效控制鸡马立克氏病的发生是一关键问题。为了进一步探索在20℃以上温度环境中MD疫苗稀释后随着时间的增加而其PFU下降的程度,特作以下试验。

猪伪狂犬病的鉴别诊断

猪伪狂犬病根据疾病的临诊症状,结合流行病学可做出初步诊断,确诊必须进行实验室检查。同时要注意与猪细小病毒、流行性乙型脑炎病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒、弓形虫及布鲁氏菌等引起的母猪繁殖障碍相区别。1病毒的分离鉴定病毒的分离是诊断伪狂犬病的可靠方法。患病动物的多种病料组织如脑、心、肝、脾、肺、肾和扁桃体等均可用于病毒的分离,但以脑组织和扁桃体最为理想。病料经处理后可直接接种敏感细胞,如猪肾传代细胞(PK-15和IBRS-2)、仓鼠肾传代细胞(BHK-21)或鸡胚成纤维细胞(CEF)在接种后24~72小时内可出现典型的细胞病变。若初次接种无细胞病变,可盲传3代。不具备细胞培养条件时,可将处理的病料接种家兔或小鼠,根据家兔或小鼠的临诊表现做出判定,但小鼠不如家兔敏感。分离到病毒后再用标准阳性血清做中和试验以确诊该病。2组织切片荧光抗体检测取患病动物的病料如脑或扁桃体的压片或冰冻切片,用直接免疫荧光检查。其优点是快速,几小时内即可获得可靠结果。新生仔猪的敏感性与病毒分离相当,而育肥猪与成年猪,该方法不如病毒分离敏感。

抗禽脑脊髓炎病毒单克隆抗体的研究——禽脑脊髓炎病毒抗原的培养和纯化

为获得用于制备AEV单克隆抗体的抗原 ,将禽脑脊髓炎病毒 (AEVVR)接种于鸡胚成纤维细胞 (CEF)盲传 ,通过间接免疫荧光试验 (IFA)监测AEV增殖情况 ,以第六代CEF培养物作为种毒扩大培养 ,将其培养物经差速离心后的半提纯物接种 6日龄SPF鸡胚、1日龄SPF鸡 ,再将半提纯物经密度梯度离心后进行PAGE -SDS电泳 ,电镜观察。结果证实 。