日本血吸虫和曼氏血吸虫成虫31/32kD蛋白的纯化及在诊断中的应用

本研究以前染蛋白为指示,将制备型SDS—PAGE和电渗析技术相结合,分离、纯化日本血吸虫和曼氏血吸虫成虫31/32kD蛋白,用于ELISA中诊断血吸虫病。结果:纯化日本血吸虫成虫31/32kD蛋白(Psj31/32)与急、慢性日本血吸虫病和曼氏血吸虫病人血清反应的阳性率分别为100％、100％和98.4％;纯化曼氏血吸虫成虫31/32kD蛋白(Psm31/32)与上述病人血清反应的阳性率均为100％。与NHS和其它寄生虫病人血清反应的特异性较高。Psj31/32和Psm31/32检测同种血清,它们的OD值具有高度的正相关关系,但OD值与曼氏血吸虫病人粪便中虫卵数量(EPG)无相关关系。结果提示:两种纯化的31/32kD蛋白在血吸虫病诊断中具有较高的敏感性和特异性,并具有共同抗原决定簇存在,不仅可用于诊断急、慢性日本血吸虫病,而且Psj31/32也可作为诊断曼氏血吸虫病的候选抗原,用于我国输入性曼氏血吸虫病的诊断。

日本血吸虫成虫31／32KD蛋白的纯化及其免疫化学特性

本支采用制备型SDS-PAGE和电渗析法分离纯化日本血吸虫成虫31／32KD蛋白，分离纯化的血吸虫31／32KID蛋白经SDS--PAGE、EITB和ELlSA检测证明纯度高，活性不量影响．鉴于血吸虫成虫31／32KD蛋白是一种主要血清学抗原，它的分离纯化为改进和标化血吸虫病的诊断及分子疫苗的研制提供了条件。

日本血吸虫成虫31/32kD蛋白对免疫小鼠TNF-α及sIL-2R影响的研究

为了研究Ｓｊ３１／３２所诱导的保护性免疫机制，探讨细胞因子ＴＮＦ－α及ＩＬ－２与Ｓｊ３１／３２保护力之间的关系，本实验用纯化的Ｓｊ３１／３２免疫小鼠，攻击感染后每隔２ｗｋ取外周血观察ＴＮＦ－α与ｓＩＬ－２Ｒ水平的动态变化。结果表明，Ｓｊ３１／３２可影响宿主ＴＮＦ－α与ＩＬ－２水平的表达。由此推测，Ｓｊ３１／３２的保护性免疫机制可能与宿主体内ＴＮＦ－α及ＩＬ－２水平的变化有关。

日本血吸虫成虫31／32KD蛋白保护性免疫力的研究

采用纯化的日本血吸虫成虫31／32KD蛋白加福氏佐剂免疫小鼠，不仅可减少虫负荷(减虫率28．1％)，还可降低血吸虫成虫的产卵量(减卵率71．4%)。抑制虫卵内芽肿的形成．结果提示，日本血吸虫成虫31／32KD蛋白具有较高的减卵率．可望作为混合多价疫苗的侯选组分．

抗日本血吸虫31/32KD单特异抗体的制备及鉴定

本文首次采用含于聚丙烯酰胺凝胶内的组分抗原免疫家兔,成功制备了抗日本血吸虫成虫31/32KD抗原的单特异抗血清。采用成虫全虫粗抗原作EITB证明此抗血清只识别31/32KD一条区带,而用成虫切片免疫酶染色法定位证明此抗原与血吸虫成虫肠道相关。此与Rupple等人报道的利用单克隆抗体定位的结果一致。本工作采用常规免疫方法获得单特异抗体,为今后开发分子诊断抗原制剂,鉴定保护性抗原、分析抗原特性等研究,提供了较为简便的途径。