癌性胸水p16基因纯合性缺失检测的临床意义

目的 :研究癌性胸水 p16基因纯合性缺失检测的临床意义。 方法 :应用PCR技术检测胸水 p16基因第一、二外显子纯合性缺失 ,并结合胸水脱落细胞学检测分析其在临床诊断中的意义。结果 :表明所检 31例肺癌所致癌性胸水标本中均无出现 p16基因第一外显子纯合性缺失 ,12例有p16基因第二外显子纯合性缺失 ,阳性率为 38 71% (12 / 31)。 16例脱落细胞学检测阳性 ,阳性率为 5 1 6 2 % (16 / 31) ;15例脱落细胞学检测阴性 ,其中 6例存在p16基因第二外显子纯合性缺失 ;两者联合检测 ,阳性率提高至 70 97% (2 2 / 31)。统计学分析表明 p16基因第二外显子纯合性缺失和脱落细胞学检测阳性率间无明显差异 ,而两者联合阳性检出率明显高于单独p16基因第二外显子纯合性缺失 (P <0 0 1)和脱落细胞学检测 (P <0 0 1)。 2 1例结核性胸水中均无胸水 p16基因纯合性缺失。结论 :本组资料说明胸水 p16基因第二外显子纯合性缺失与脱落细胞学联合检测可增加诊断的阳性率 。

葡萄胎中CDKN2A基因纯合性缺失和突变的研究

目的:探讨细胞周期依赖性激酶抑制基因(CDKN2A基因,包括p16INK4a和p14ARF基因)外显子1、2的纯合性缺失和突变情况与葡萄胎发生的关系。方法:对38例葡萄胎和30例早孕绒毛的新鲜组织标本进行基因组DNA抽提、PCR扩增,而后应用变性高效液相色谱分析(DHPLC)的方法对扩增产物进行突变检测。结果:1)38例葡萄胎组织样本中,5例发生p16INK4a基因外显子1的纯合性缺失,其纯合性缺失率为13.16%;而30例早孕绒毛组织标本中,未发现p16INK4a基因外显子1的纯合性缺失。p16INK4a外显子1的纯合性缺失率在早孕绒毛组织和葡萄胎组织中差异具有统计学意义(P=0.036);2)38例葡萄胎组织样本和30例早孕绒毛组织样本中,无一例发生p14ARF基因外显子1和p16INK4a外显子2的纯合性缺失;3)经DHPLC检测,38例葡萄胎组织样本和30例早孕绒毛组织样本中,p16INK4a基因外显子1、2和p14ARF基因外显子1扩增产物的所有谱图均为单一峰型,未检测到任何位点的突变发生。结论:p16INK4a基因外显子1的纯合性缺失与葡萄胎的发生具有一定的相关性;在葡萄胎中,CDKN2A基因的遗传变异主要是由于此基因的纯合性缺失造成的,突变可能不是此基因变异的主要形式。

DMBT_1基因纯合性缺失与原发性肺癌临床病理特征的关系

目的 探讨DMBT1基因纯合性缺失与原发性肺癌临床病理特征的关系。方法 采用聚合酶链反应检测原发性肺癌DMBT1基因纯合性缺失 ,分析其与肺癌临床病理特征的关系。结果 37例肺癌组织中 9例有DMBT1基因纯合性缺失 ,而其自身癌旁正常肺组织均无缺失。DMBT1基因纯合性缺失率非小细胞肺癌组高于小细胞肺癌组 ,低、未分化肺癌组高于中、高分化肺癌组 ,伴有淋巴和 /或远处转移组高于不伴转移组 ,有吸烟史组高于无吸烟史组 (P均 <0 .0 5 )。结论 DMBT1基因与肺癌的临床病理特征有密切关系 。

聚合酶链反应分析多肿瘤抑癌基因1第二外显子纯合性缺失

目的 摸索可靠、高效和特异的聚合酶链反应 (PCR)条件 ,分析多肿瘤抑癌基因 1(MTS1)第二外显子纯合性缺失。方法 对一系列PCR参数进行摸索同时设立对照 ,并对PCR产物进行Southernblot分析。结果 PCR产物是特异的MTS1第二外显子。结论 扩增MTS1第二外显子的PCR反应条件可以得到可靠、特异的结果。

胃癌中FHIT基因外显子5、8纯合性缺失及其蛋白表达的研究

目的:探讨FHIT基因外显子5、8纯合性缺失与蛋白表达的关系及其在胃癌发病机制中的作用。方法:应用PCR及免疫组化SP法检测30例胃癌组织、18例正常胃组织中FHIT基因外显子5、8的纯合性缺失和FHIT蛋白的表达。结果:FHIT蛋白阴性表达率及外显子5、8纯合性缺失率在胃癌组织中均高于正常胃组织(P<0.05)。FHIT蛋白表达与胃癌的分化程度有关(P<0.05);胃癌组织中FHIT基因外显子5、8纯合性缺失与FHIT蛋白阴性表达有显著相关性(r=0.59,P<0.05)。结论:胃癌组织中FHIT基因外显子5、8纯合性缺失可能是引起FHIT蛋白表达降低并进而导致胃癌发生的重要机制。

分化型甲状腺癌组织中脆性组氨酸三联体基因外显子5、8纯合性缺失及突变检测

目的:探讨分化型甲状腺癌(DTC)组织中脆性组氨酸三联体(FHIT)基因外显子5、8(E5、E8)纯合性缺失及突变情况。方法:分别采用外显子特异PCR及PCR-SSCP技术检测65例DTC组织及其相应非癌上皮(NCE)组织中FHIT基因E5、E8纯合性缺失及点突变。结果:甲状腺NCE组织中,E5、E8纯合性缺失率均为0;DTC中,E5纯合性缺失率为30.8%(20/65),且与患者淋巴结转移有关(P<0.05);E8纯合性缺失率为29.2%(19/65),且与患者TNM分期、病理分级及淋巴结转移有关(P<0.05)。DTC组织中,FHIT基因E5、E8纯合性缺失的发生相关(χ2=23.212,P<0.01)。所有标本未检测到E5、E8点突变。结论:FHIT基因E5、E8纯合性缺失可作为检测DTC生物学行为的重要标志。点突变可能不是DTC组织中FHIT基因失活的主要机制。

喉鳞癌组织中脆性组氨酸三联体基因编码外显子纯合性缺失检测

目的:探讨喉鳞癌(LSCC)组织中脆性组氨酸三联体(FHIT)基因编码外显子纯合性缺失及其临床意义。方法:分别采用外显子特异PCR技术及免疫组化SP法检测41例LSCC(肿瘤发生部位位于声门上15例,声门24例,声门下2例;TNM分期Ⅰ期10例,Ⅱ期13例,Ⅲ期15例,Ⅳ期3例;病理分级:高分化15例,中分化18例,低分化8例;淋巴结转移阳性15例,阴性26例)及其相对应的喉正常黏膜组织中FHIT基因全部编码外显子E5～E9纯合性缺失及增殖细胞核抗原(PCNA)表达,并分析其与临床病理特征及PCNA的关系。结果:41例喉正常黏膜组织中,E5～E9无1例发生纯合性缺失。LSCC组织中,E5～E9纯合性缺失率分别为26.8%(11/41)、14.6%(6/41)、9.8%(4/41)、29.3%(12/41)和7.3%(3/41)。FHIT基因编码外显子总纯合性缺失率为41.5%(17/41),且与患者TNM分期、淋巴结转移及复发有关(P<0.05)。FHIT基因编码外显子纯合性缺失与PCNA标记指数有明显的负相关关系(P<0.05)。结论:LSCC组织中FHIT基因编码外显子纯合性缺失可能为其基因失活的重要机制之一,可作为检测LSCC生物学行为的重要标志。

原发性非小细胞肺癌中p16/MTS1基因外显子纯合性缺失的研究及临床意义

目的 检测原发性非小细胞肺癌 (Non smallCellLungCancer,NSCLC)手术标本 p16基因 (MultipleTumorSuppressorGene,MTS1)第一、二外显子纯合性缺失并探讨其与肿瘤细胞分化程度、组织类型、转移和预后的关系。方法 收集我院 1999年 1月～ 12月原发性支气管肺癌且手术病理证实为非小细胞肺癌 32例。提取DNA ,建立PCR方法分析 p16基因第一、二外显子纯合性缺失 ,用SouthernBlotting方法对p16第二外显子的PCR产物进行鉴定。 结果 32例NSCLC患者中 9例发生 p16基因第二外显子的缺失 ,缺失率为 2 8% (9/ 32 ) ,p16第一外显子未发现缺失。结论 在原发性非小细胞肺癌中 ,p16基因第二外显子的纯合性缺失是 p16基因失活的一个重要方式 ,且影响肺癌细胞其他生物学行为。

DMBT1基因纯合性缺失与乳腺癌病理特征的关系

目的：探讨DMBT1基因纯合性缺失与乳腺癌临床病理特征的关系。方法采用聚合酶链反应检测乳腺癌DMBT1基因纯合性缺失，分析其与乳腺癌临床病理特征的关系。结果60例乳腺癌组织标本中27例有DMBT1基因纯合性缺失，缺失率为45％。浸润性乳腺癌患者的DMBT1基因纯合性缺失率高于非浸润性乳腺癌患者，伴有淋巴和（或）远处转移的患者DMBT1基因纯合性缺失率高于不伴转移的患者，Ⅰ期患者低于Ⅱ∽Ⅲ期患者，差异均有统计学意义（P＜0．05）。结论DMBT1基因与乳腺癌的临床病理特征有密切关系，提示DMBT1的纯合性缺失可能与乳腺癌的病例特征、转移及转化有关，同时对于乳腺癌的诊断、治疗和预后具有重要的临床意义。

小鼠口腔癌模型骨髓播散细胞RB1CC1纯合性缺失的初步研究

目的初步探讨小鼠口腔癌模型重度异常增生时期骨髓播散细胞RB1CC1基因纯合性缺失及其意义。方法应用激光捕获显微切割(LCM)技术捕获35张重度异常增生时期小鼠骨髓单个核细胞涂片的单个细胞角蛋白阳性(CK+)细胞,单细胞全基因组扩增技术(WGA)扩增其DNA,PCR检测其视网膜母细胞瘤诱导卷曲蛋白(RB1CC1)的纯合性缺失情况,并与舌部正常、重度异常增生以及鳞癌组织各4例对照。结果 LCM成功捕获CK+细胞35个,WGA成功扩增3个,RB1CC1纯合性缺失情况分别为单个CK+细胞(2/3),舌癌变组织(2/4),舌部正常组织(0/4),重度异常增生组织(0/4)。结论小鼠口腔癌模型重度异常增生时期骨髓CK+细胞有RB1CC1基因纯合性缺失,该时期骨髓CK+细胞可能是播散肿瘤细胞。

尿路上皮癌外周血死亡相关蛋白激酶的甲基化与纯合性缺失状态及其意义

目的:研究启动子区甲基化及纯合性缺失对死亡相关蛋白激酶(DAPK)表达及尿路上皮癌(UC)生物学行为的影响。方法:使用甲基化特异性PCR(MSP)检测45例UC患者外周血循环DAPK启动子区甲基化情况;使用DifferentialPCR技术检测DAPK纯合性缺失情况,分析DAPK启动子区甲基化及纯合性缺失与肿瘤分级分期的相关性。使用RT-PCR技术检测相应肿瘤的DAPK表达情况。结果:MSP提示10例出现DAPK启动子高甲基化(22%);DifferentialPCR提示6例出现启动子区纯合性缺失(13%);RT-PCR提示15例样本mRNA表达下调或缺失。统计学分析提示DAPK启动子高甲基化及纯合性缺失与DAPK表达下调或缺失明显相关(P<0.01),启动子高甲基化与肿瘤浸润性明显相关(P=0.002),启动子纯合性缺失与肿瘤分级明显相关(P=0.003)。结论:DAPK启动子区高甲基化与纯合性缺失是导致DAPK表达异常的重要因素。

p16及p15基因在子宫颈癌中的纯合性缺失及其临床意义

目的 :探讨抑癌基因p16、p15基因的纯合性缺失在子宫颈癌的发生发展中的作用。方法 :应用比较PCR技术检测 34例子宫颈癌组织和 2 0例正常宫颈组织中p16、p15基因的纯合性缺失。结果 :p16、p15基因的纯合性缺失率分别为 11 8%、14 7% ,p16、p15基因的纯合性缺失与组织学类型、临床分期及组织学分级无关。结论 :p16。

胰腺癌MTS1/p16基因纯合性缺失和突变的研究

目的 :研究人胰腺癌组织及正常胰腺组织中 p16基因第 1外显子和第 2外显子的纯合性缺失和突变情况 ,探讨 p16基因异常与胰腺癌的关系。方法 :应用聚合酶链式反应 -单链构象多态性分析 (PCR- SSCP)技术检测 5 1例胰腺癌组织中 p16基因第 1外显子和第 2外显子的纯合性缺失和突变频率 ,以正常胰腺组织 15例为对照。结果 :全部被检胰腺癌组织中有 2 3例发生 p16基因第 2外显子缺失 ,缺失率 45 % ,有 1例发生第 1外显子的突变 ,未发现第 1外显子缺失和第 2外显子突变。正常胰腺组织中均未发生第 1外显子和第 2外显子的缺失及突变。结论 :p16基因缺失与胰腺癌的发生关系密切 。

基因芯片分析亚洲人胰腺癌细胞株纯合性缺失

目的为了探索亚洲人种胰腺癌癌变过程中的基因异常,研究亚洲人胰腺癌基因组的纯合性缺失。方法应用高密度的单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)芯片,检测8种亚洲人胰腺癌细胞株基因组的纯合性缺失,并应用分析软件进行数据分析,用PCR验证纯合性缺失位点。结果8种亚洲人胰腺癌细胞基因组中,发现34个纯合性缺失区域,其中26个区域是编码区,8个区域为非编码区。筛选可能与胰腺癌发生和发展有关的15个编码区,经PCR验证其中12个区域确实为纯合性缺失,芯片的准确度为80%,其中最小缺失区域为0.3kb。染色体9p21.3为缺失频率最高的区域。结论应用高解析度的SNP芯片,可以检测全基因组范围内的胰腺癌纯合性缺失,筛查到很小的缺失位点。这些纯合性缺失区域可能含有新抑癌基因,为今后胰腺癌的研究提供了新的线索和方向。

喉鳞癌中FHIT基因第5,8外显子纯合性缺失及突变研究

目的探讨喉鳞癌(laryngealsquamouscellcarcinoma,LSCC)组织中脆性组氨酸三联体(FHIT)基因第5,8外显子纯合性缺失及突变的情况。方法分别采用外显子特异PCR及PCR-SSCP技术检测41例LSCC中FHIT基因第5,8外显子纯合性缺失及点突变。结果LSCC中,第5外显子纯合性缺失率为26.8%(11/41),且与患者TNM分期及淋巴结转移有关(P<0.05);第8外显子纯合性缺失率为29.3%(12/41),且与患者TNM分期、病理分级及淋巴结转移有关(P<0.05);FHIT基因第5,8外显子的纯合性缺失有明显的相关性(P<0.01);所有标本没有检测到第5,8外显子的点突变。结论LSCC中,FHIT基因第5,8外显子为其基因缺失的重要靶区,两者的纯合性缺失可作为检测LSCC生物学行为的重要标志。LSCC中,点突变可能不是FHIT基因失活的主要机制。

非何杰金氏淋巴瘤P16基因纯合性缺失及其临床意义

目的 :探讨P16基因纯合性缺失与非何杰金氏淋巴瘤 (NHL)的关系及其临床意义。方法 :采用半定量多重PCR检测了 5 1例非何杰金氏淋巴瘤病人P16基因纯合性缺失情况。结果 :发现 9例病人出现P16基因纯合性缺失 ,缺失率为 17.6 % ,且低度恶性组与高度恶性组有显著性差异 (P <0 .0 5 )。结论 :P16基因纯合性缺失主要发生于恶性程度较高的NHL中 。

卵巢癌p16基因的纯合性缺失、突变及表达异常的研究

目的 :研究p16基因的纯合性缺失、突变及表达异常与卵巢癌的发生是否存在相关关系。方法 :采用PCR SSCP检测卵巢癌 p16基因的纯合性缺失和突变 ;采用RP PCR定性及半定量分析p16基因 ;采用免疫组化技术检测 p16蛋白。 结果 :3 2例卵巢癌中检测到 1例外显子 1突变 ,未检测到 p16基因的纯合性缺失 ;RT PCR分析卵巢癌中p16基因mRNA均有表达 ,半定量分析卵巢癌与正常卵巢组织中 p16基因mRNA表达水平无差别 ;免疫组化检测 9例卵巢癌中的 p16蛋白为阴性 (2 8.2 % )。 结论 :卵巢癌的发生与 p16基因的纯合性缺失和突变无相关关系 。

帕金森病患者parkin基因外显子纯合性缺失及其功能学的意义

目的 :观察不同亚型帕金森病 (PD)患者中 parkin基因外显子 2～ 10的缺失分布 ,探讨parkin基因在PD发病机制中的可能作用。方法 :6 3例患者被分为早发性PD和晚发性PD。以提取的基因组DNA为模板 ,扩增parkin基因第 2～ 10号外显子 ,然后行琼脂糖电泳 ,观察外显子纯合性缺失的分布。结果 :6 3例PD患者中发现外显子 2、4纯合性缺失各 1例 ,外显子 3纯合性缺失 2例 ,这些缺失均出现于早发性PD组。结论 :parkin基因外显子 2～ 4的纯合性缺失是我国早发性PD患者的致病原因之一。

肝细胞肝癌细胞p53基因第2～3,4,11外显子纯合性缺失、杂合性缺失的分析

目的 研究非高发区肝细胞癌 (HCC) p5 3基因外显子 2～ 3、4和 11的纯合性、杂合性缺失 (L OH)。方法 应用 PCR为基础的微卫星多态性分析技术。结果 2 0例 HCC标本中 p5 3基因外显子 2～ 3(TP5 3.A )、外显子 4 (TP5 3.B)、外显子 11(TP5 3.G)纯合性缺失率分别为 0 %、30 %、10 % ;p5 3基因外显子 2～ 3(TP5 3.A)、外显子 4 (TP5 3.B)、外显子 11(TP5 3.G)杂合性缺失率分别为 2 0 %、30 %、0 %。 p5 3基因的缺失率与 HCC病理分级高低之间的差异无统计学意义。结论 以上结果提示 :p5 3基因第 4外显子的纯合性缺失及杂合性缺失在本组肝细胞癌的发生中可能起重要作用 ,而第 11、2～

肺癌组织中P16基因的纯合性缺失及P16^(INK4a)、PRB表达的检测

用PCR法检测了人原发性肺癌中P16基因的纯合性缺失。结果表明,在30例肺癌中,纯合性缺失率为33.3％。P16基因的纯合性缺失率在非吸烟者肺癌中较吸烟者肺癌高(分别为71.4％和21.7％),且有统计学意义(P=0.025)。用免疫组织化学法检测人原发性肺癌组织中P16蛋白和RB蛋白,结果表明,P16蛋白阴性率为56.7％,RB蛋白阴性率为23.3％。在人原发性肺癌组织中P16蛋白和RB蛋白表现为逆相关。逆相关率在鳞癌中显著高于腺癌。在有职业暴露者中和不吸烟者中逆相关率较高,但均无统计学意义。P16基因纯合性缺失及P16蛋白和RB蛋白的逆相关可能与除吸烟外的其他因素引起的肺癌有关。