携双抗体纳米微泡对卵巢癌细胞增殖活性的影响

背景:免疫治疗可通过多种途径增强抗肿瘤免疫反应,联合免疫治疗是一个更好的选择。超声靶向微泡破坏技术可将药物、基因、抗体和细胞因子直接输送到免疫细胞的细胞质中,进一步增强免疫应答。然而,通过超声靶向微泡破坏技术将携趋化因子受体4抗体和细胞程序性死亡配体1抗体双靶向纳米微泡应用于卵巢癌的治疗尚未见报道。目的:探讨超声辐照携趋化因子受体4抗体和程序性死亡配体1抗体双靶向纳米微泡对卵巢癌细胞增殖、迁移的影响。方法:对IOSE-80正常卵巢上皮细胞及SKOV3、CAOV3卵巢癌细胞进行培养及扩增,采用双标记荧光免疫法对3种细胞中的趋化因子受体4和细胞程序性死亡配体1蛋白进行共定位,蛋白质印迹法检测3种细胞中趋化因子受体4和程序性死亡配体1蛋白相对表达量,并筛选出实验细胞。制备携不同配体的靶向纳米微泡后,即单纯的纳米微泡、携趋化因子受体4抗体的纳米微泡、携趋化因子受体4和程序性死亡配体1抗体的纳米微泡。取对数生长期的SKOV3卵巢癌细胞,分6组处理:A组加入McCoy’s 5A培养基,B组加入含基质细胞衍生因子1的McCoy’s 5A培养基,C组加入单纯的纳米微泡溶液与含基质细胞衍生因子1的McCoy’s 5A培养基,D组加入携趋化因子受体4抗体的纳米微泡溶液与含基质细胞衍生因子1的McCoy’s 5A培养基,E组加入携趋化因子受体4和程序性死亡配体1抗体的纳米微泡溶液与含基质细胞衍生因子1的McCoy’s 5A培养基,F组加入单纯的纳米微泡溶液,超声辐照120 s,孵育48 h后,采用CCK-8法检测细胞存活率,通过伤口愈合实验检测B-E组细胞的愈合迁移能力。结果与结论:①免疫荧光染色显示,3种细胞均可表达趋化因子受体4和程序性死亡配体1蛋白;蛋白质印迹法检测显示,SKOV3、CAOV3卵巢癌细胞中的趋化因子受体4和程序性死亡配体1蛋白表达量均高于IOSE-80正常卵巢上皮细胞(P<0.05);②CCK-8检测结果显示,B组细胞存活率高于A组(P<0.05),F组细胞存活率低于A组(P<0.05),B-E组细胞存活率逐渐降低,组间两两比较差异有显著性意义(P<0.05);③伤口愈合实验显示,B-E组细胞愈合率逐渐降低,组间两两比较差异有显著性意义(P<0.05);④结果表明,超声靶向微泡破坏技术联合携趋化因子受体4抗体和程序性死亡配体1抗体双靶向纳米微泡可显著抑制卵巢癌细胞的增殖迁移。

携单抗载增效剂超声纳米微泡制备实验的探索与研究

目的超声纳米微泡造影剂可携带药物在实现精准成像的同时定向到达目标微环境实现靶向给药。探索制备携单抗超声纳米微泡造影剂的实验条件及验证方式。方法通过乳化法制备超声纳米微泡并用链霉亲和素对其进行修饰;再通过生物素-亲和素系统与被生物素化的帕博利珠单抗(PD-1单抗)进行连接,得到携PD-1单抗载增效剂超声纳米粒;探索高效率的实验条件及验证方式;对实验制得超声纳米微泡的基本性质和实验表征分别进行检测与分析;对纳米微泡进行体外相变及超声显像效果的初步验证。结果成功制备出以高分子聚合物聚乳酸羟基乙酸包载液态氟碳和血卟啉单甲醚、同时用PD-1单抗修饰其表面的携单抗载增效剂超声纳米微泡;血卟啉单甲醚与聚乳酸羟基乙酸的比例在1∶25左右时饱和状态良好,血卟啉单甲醚的包封率为40.4%;吗啉乙磺酸缓冲溶液(MES Buffer)pH=7.4时血卟啉单甲醚的包封状态及聚乳酸羟基乙酸壳膜与链霉亲和素的结合效率可以取得较好的平衡;纳米微泡及链霉亲和素修饰后的生物素化单抗在激光共聚焦显微镜下分别表现出红色和绿色荧光,叠加融合后呈现黄色荧光,间接表明携PD-1单抗载增效剂纳米微泡制备成功;纳米微泡复溶后水溶性及分散度较好,基于其较稳定的物理性质,4℃条件下可短期保存;纳米微泡在扫描电子显微镜下表现为表面光整的类球形结构,大小整体较均匀,局部可见小范围粘连聚集现象;透射电子显微镜下纳米微泡呈内部黑色的类球形结构;动态激光散射仪测得纳米微泡平均粒径为(322.29±83.56)nm,Zeta电位为(-2.41±1.75)mV,聚合物分散指数约为0.287。纳米微泡在40℃左右时开始出现相变表现,一定温度范围(40℃~50℃)内有较好的超声显像效果,但分散性欠佳。结论成功制备出携单抗载增效剂超声纳米微泡;纳米微泡整体大小较均匀,局部存在粘连聚集现象;一定温度范围内可发生相变,体外超声显像效果较好,分散均匀度欠佳。

纳米微泡光动力治疗对肝细胞癌小鼠的作用

目的:分析纳米微泡光动力治疗对肝细胞癌小鼠的作用效果。方法:在7~8周龄雄性无胸腺裸小鼠(BALB/C-nu/nu)四肢腋窝皮下注射H22单细胞悬液,共成功建立40只荷瘤模型小鼠,标准饲养7 d后筛选出30只荷瘤体积相当的小鼠展开研究。采用随机鼠标法将30只小鼠分为观察组和对照组,各15只,观察组小鼠经尾静脉给予FA-CdSe/ZnS-Rluc8、FA-腔肠荧光素超声微泡及聚集诱导发光(AIE)光敏剂混合液后1 h予以超声辐照,活体成像仪观测600~620 nm成像分布及强度,对照组小鼠经尾静脉给予等量生理盐水,两组小鼠均标准饲养21 d。比较两组小鼠不同时刻的荷瘤体积、血清白细胞介素-12(IL-12)、重组人干扰素γ(IFNγ)、CD3^(+)和CD4^(+)水平。结果:标准饲养1 d时两组小鼠的荷瘤体积、血清IL-12、IFNγ、CD3^(+)和CD4^(+)水平比较,差异无统计学意义(P>0.05),标准饲养7 d、14 d、21 d时观察组小鼠的荷瘤体积均小于对照组,标准饲养7 d、14 d、21 d时观察组小鼠的血清IL-12、IFNγ水平均低于对照组,标准饲养7 d、14 d、21 d时观察组小鼠的血清CD3^(+)和CD4^(+)水平均低于对照组,差异统计学有意义(P<0.05)。结论:纳米微泡光动力治疗能够促进肿瘤体积缩小,可在一定程度上改善机体炎性反应和免疫水平。

大黄素脂质纳米微泡对机械牵张引发的Ⅱ型肺泡上皮细胞MAPK信号通路和炎性介质的影响

目的:研究大黄素脂质纳米微泡对机械牵张引发的Ⅱ型肺泡上皮细胞MAPK信号通路和炎性介质的影响和作用机制。方法:以卵磷脂和PVP为载体材料,采用静电纺丝技术制备纳米纤维膜,填充全氟丙烷,通过自组装技术形成大黄素脂质纳米微泡。分离纯化原代大鼠AT-Ⅱ细胞,应用Western-Blot和ELISA方法观察AT-Ⅱ细胞在20%机械牵张应力的4、8、16、24、48h刺激作用下,p-P38/P38、p-ERK/ERK、p-JNK/JNK蛋白表达和TNF-α、IL-1β、IL-6分泌水平的动态变化;及进一步将大黄素脂质纳米微泡加入AT-Ⅱ细胞对VILI进行干预,并检测干预效果。结果:牵张刺激后,AT-Ⅱ细胞p-P38、p-ERK、p-JNK蛋白表达的水平显著升高,并在4～16h范围内表达水平持续升高,但p38、ERK、JNK蛋白表达无变化;AT-Ⅱ细胞TNF-α、IL-1β、IL-6分泌水平在8h内均无变化,而在随后16h的牵张刺激逐渐显著升高。在VILI刺激下,加入大黄素脂质纳米微泡进行干预,均可以不同程度下调p-P38、p-ERK、p-JNK蛋白表达和抑制TNF-α、IL-1β、IL-6的释放水平。结论:大黄素脂质纳米微泡对机械所致肺损伤(VILI)有保护作用,其机制可能与下调MAPK信号通路蛋白表达来调节炎性介质释放有关。

正电荷载基因纳米微泡的超声成像及靶向杀伤肝癌细胞的研究

目的:制备载基因纳米微泡并探讨其体内外超声成像和靶向杀伤肝癌细胞的效果。方法:采用薄膜水化-机械震荡法制备磷脂为壳膜、六氟化硫(suphurhexafluoride,SF6)气体为核心的正电荷纳米微泡,再偶联甲胎蛋白(alpha fetoprotein,AFP)启动子的单纯疱疹病毒胸苷激酶(simplex herpes virus thymidine kinase,HSV-TK)质粒DNA制备载基因纳泡。对其形态、平均粒径、zeta电位、DNA结合力、基因转染进行检测;然后对其体内外超声成像特性进行考察;最后采用CCK-8和流式细胞(FCM)分析检测载基因纳泡联合超声靶向微泡击破(ultrasound-targeted microbubble destruction,UTMD)技术对BEL-7402和SMCC-7721细胞的杀伤作用。结果:电镜显示纳泡呈圆球形壳核结构;平均水合粒径约为667 nm,带正电;琼脂糖凝胶电泳显示质量比≥5时,纳泡可有效结合质粒DNA;体内外超声显示载基因纳泡具有良好的超声对比增强特性;RT-PCR检测显示纳泡联合UTMD能使HSV-TK在AFP阳性肝癌细胞内表达。CCK-8和FCM分析显示载基因纳泡+UTMD组能显著抑制BEL-7402细胞的增殖和诱导其凋亡,与其他组相比差异具有显著性(P <0.05)。结论:具有良好超声成像功能的载基因纳泡能够高效靶向杀伤AFP阳性的肝癌细胞。

大黄素脂质纳米微泡的制备及性能研究

目的:制备大黄素脂质纳米微泡,并对其理化性能进行初步研究。方法:以卵磷脂和PVP为载体材料,采用静电纺丝技术制备纳米纤维膜,填充全氟丙烷,通过自组装技术形成脂质纳米微泡,并对其粒径、分布、形态、表面电位等性能进行研究。结果:所制备的脂质纳米微泡为圆形,粒度分布均匀,平均粒径235.9 nm,电位-31.6mV,多分散指数PDI=0.331。结论:整合运用高压静电纺丝技术和自组装技术制备大黄素脂质纳米微泡是可行的,该方法简单可靠,有开发的前景。

携载G250单克隆抗体的纳米微泡靶向于肾细胞癌的体内外实验研究

目的本研究拟制备携载G250单克隆抗体的纳米微泡,在体内和体外研究其对肾细胞癌的靶向性。方法机械振荡法制备空白脂质纳米微泡并观察其稳定性,生物素-亲和素连接技术将纳米微泡与G250单克隆抗体相连,采用免疫荧光进行验证。细胞免疫荧光实验鉴定所使用的两种肾细胞癌细胞(786-O和ACHN细胞)中G250的表达情况,靶向结合实验鉴别靶向纳米微泡对786-O和ACHN两种肾细胞癌细胞的体外寻靶能力。在肾细胞癌的裸鼠皮下移植瘤模型中,使用纳米微泡进行超声造影,并将采集到的动态图像在定量分析软件Qlab 8.1中进行数据分析。结果成功制备了平均粒径为404.9 nm空白纳米微泡和平均粒径为611.4 nm靶向纳米微泡,稳定性能好,同时免疫荧光证实了靶向纳米微泡构建成功,能够与FITC标记的二抗结合,从而显示出绿色荧光;细胞免疫荧光证实G250抗原在786-O细胞中呈膜表达,而ACHN细胞中不表达。在细胞结合实验中发现靶向纳米微泡能够特异性的结合786-O细胞,但不能结合于ACHN细胞。体内超声造影显像从平均值和最大值分析,靶向纳米微泡和空白微泡在786-O肾细胞癌细胞的裸鼠模型的显影效果存在显著差异[平均值:(11.74±0.52)vs(16.34±0.40),P=0.001;最大值:(13.07±0.94)vs(18.09±0.82),P=0.003]。结论 G250靶向的纳米微泡可在体外能够特异性的结合G250表达阳性的肾细胞癌细胞,在动物体内能够明显的增强移植瘤的超声显影效果。

高强度聚焦超声联合纳米微泡造影剂对兔VX2乳腺移植瘤辐照效果的影响

目的观察高强度聚焦超声(HIFU)联合纳米微泡对兔VX2乳腺移植瘤辐照效果的影响。方法制备纳米微泡,于光镜、电镜下观测微泡的大小、形态、分布及稳定性。采用Zeta SIZIER 3000电位仪测定微泡的粒径、电位。60只健康纯种雌性新西兰白兔,麻醉后种植VX2肿瘤于双侧乳腺组织内。2周后,选取乳腺区肿瘤组织直径大小为10mm的兔进行实验,随机分为实验组(HIFU+纳米微泡)和对照组(HIFU+磷酸盐缓冲液),辐照剂量150 W,辐照时间5s,记录HIFU辐照前后灰阶变化,辐照后行HE染色观察坏死区域大小,并进行统计学分析。结果成功制备纳米微泡,其理化性质稳定,粒径大小合理,电位均衡。实验组靶区平均灰度差明显高于对照组(P<0.05)。HE染色示实验组发生凝固性坏死范围明显大于对照组()。结论纳米微泡能明显增强的损伤效果。

壳聚糖纳米微泡的制备及表征

以壳聚糖为原材料制备一种粒径约100 nm、带正电荷的新型纳米微泡。通过粒度电位仪、透射电镜、扫描电镜、红外光谱及超声成像设备等检测方法对纳米微泡的形貌结构进行表征。探究了壳聚糖纳米微泡的制备工艺,即反应物的用量、反应时间、反应温度、反应条件及冻干条件对壳聚糖纳米微泡的分散性、亲水性和稳定性的影响。结果表明,在氮气保护下,当过硫酸钾为67.5 mg、聚合反应时间80 min、戊二醛为70 mg和甘露醇为5%时,所制备的纳米微泡大小均一,粒径分布范围窄,平均粒径为(108.4±0.37) nm,平均电位为(33.5±0.92) mV;加入甘露醇保护冻干的纳米微泡能较好地复溶于水,当甘露醇的质量分数为2%～5%时,在4℃冷藏21 d后稳定性仍较好;超声谐波成像下纳米微泡具造影能力,证明其具有包裹空气的空心结构。

低频超声联合靶向纳米微泡介导siRNA转染肝癌细胞的实验研究

目的探讨低频超声联合靶向纳米微泡介导的NET-1 siRNA转染人肝癌细胞株HepG 2的最佳输出声功率。方法 1）以磷脂复合物为原料、以半乳糖苷化多聚赖氨酸为靶向配体,利用薄膜水化法配合机械震荡法制备靶向纳米微泡,利用生物素-亲和素系统,将NET-1 siRNA与靶向纳米微泡偶联,制备成肝癌靶向载NET-1siRNA纳米微泡;2）采用CGZZ型低频超声基因转染治疗仪,频率为1.00MHz,单路晶片输出声功率在0.11-3.5W,占空比50%;3）将HepG 2细胞分别接种在培养板中,随机分为6组进行低频超声辐照实验;4）以MTT法检测细胞增殖情况;进行Quantitative Realtime PCR检测NET-1 mRNA表达情况;Western Blot法检测NET-1蛋白的表达。结果 C组、D组、E组和F组的细胞增殖能力与A组比较细胞增殖显著受到抑制（P〈0.05）。C组、D组、E组和F组的细胞增殖在转染后48h分别抑制了54.39%、24.66%、42.49%和63.39%。NET-1mRNA表达抑制率各组间差异有统计学意义（P〈0.05）,D组NET-1 mRNA表达抑制率较其余组明显提高（P〈0.05）。Western Blot电泳结果显示D组的条带表达最弱、范围最小,D组NET-1蛋白表达抑制率92.81%,与同期的B组（26.45%）、C组（43.39%）、F组（25.14%）比较差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论低频超声联合靶向纳米微泡能有效促进NET-1 siRNA对肝癌细胞的转染,并抑制肝癌细胞的增殖。

超声纳米微泡在基因治疗中的应用进展

作为对比增强超声的造影剂,已经被广泛应用至今。近年来,微泡不仅仅用于超声造影,还逐渐和治疗结合在一起,尤其是在药物及基因递送方面。但微泡的粒径较大,难以通过血管壁渗透到周围组织中,尤其是肿瘤组织。然而,粒径为纳米级的微泡,就有这种渗透的可能性。研究发现,纳米微泡的表面可以偶联许多特异性配体,例如单克隆抗体或者多肽。此外许多药物、基因等可以与纳米微泡结合,或者包裹在纳米微泡内部。本文以纳米微泡研究为背景,阐述微泡从对比增强的超声造影剂发展到一种基因递送媒介的演进历程及其发展前景。

超声纳米微泡造影剂在肿瘤诊疗中的研究进展

随着分子生物学的快速发展,超声纳米微泡造影剂已成为研究热点之一。其作为一种新型的造影剂具有纳米级粒径,在成像方面有多种优势,容易实现对肿瘤的靶向性,在肿瘤诊疗中有一定意义。超声纳米微泡造影剂不仅可以结合超声成像、荧光探针及铁粒子等增强成像效果,还可以包裹肿瘤靶向药物进行药物靶向递送、作为载体和免疫增强剂携载目的基因进行基因转染、促进肿瘤的免疫治疗,为肿瘤的诊断和治疗提供了新方法。本文针对超声纳米微泡造影剂在肿瘤中的研究进展进行综述。

超声诊疗一体化的载药壳聚糖纳米微泡的制备

载药微泡在超声诊疗一体化中具有广阔的应用前景。以壳聚糖为原料制备了一种能够实现超声诊疗一体化功能的载药壳聚糖纳米微泡,采用激光粒度仪、透射电镜、扫描电镜、紫外分光光度计、超声成像仪以及圆二色谱仪等对载药纳米微泡进行表征,研究了载药纳米微泡的稳定性,并验证了其体外超声显影和超声释放的能力。结果表明,载药纳米微泡平均粒径为(136.54±4.46) nm,粒径均一且分散性好,药物的包封率和载药率分别为43.1%±1.3%和4.1%±0.01%。体外实验证实该载药纳米微泡具有的空核结构能够实现超声显影功能,且通过聚焦超声可实现对纳米微泡中包裹的药物进行体外定点释放。制备的载药纳米微泡有望在超声诊疗一体化应用中提供技术指导。

MRI介导的低频聚焦超声联合纳米微泡对提高MSCs治疗脑梗死大鼠的效果研究

目的MRI介导的低频聚焦超声联合纳米微泡对提高MSCs治疗脑梗死大鼠的效果研究。方法建立MCAO大鼠模型,制备纳米微泡,标记MSCs的超顺磁氧化铁(SPIO)并采取低频聚焦超声联合微泡注射和MSCs注射治疗。对治疗前后大鼠的神经功能评分脑梗死病大鼠黑质TH阳性和DAT阳性神经元的凋亡情况;提取总蛋白,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测营养因子VEGF、NT-3、NGF和BDNF的含量进行对比分析。结果MRI介导的低频聚焦超声联合纳米微泡对提高MSCs治疗脑梗死大鼠可以显著提高大鼠的神经功能,MRI介导的低频聚焦超声联合纳米微泡对提高MSCs治疗减少脑梗死病大鼠黑质TH阳性和DAT阳性神经元的凋亡,减少了氧化应激对神经元的损伤,营养因子VEGF、NT-3、NGF和BDNF的含量也显著增高。结论MRI介导的低频聚焦超声联合纳米微泡对提高MSCs治疗脑梗死大鼠可以促进脑梗死的神经修复以改善预后,减轻社会负担和经济负担,具有重要的临床价值和社会意义。

对比观察纳米微泡与微米微泡在高强度聚焦超声消融新鲜离体牛肝中的增效作用

目的探讨纳米微泡与微米微泡在增效高强度聚焦超声(HIFU)作用中的差异。方法机械振荡低速离心法制备纳米微泡。分别采用0.2、0.5和0.8 ml的纳米微泡、Sono Vue微泡及PBS溶液联合HIFU消融离体牛肝。HIFU功率为180 W,辐照时间5 s,记录各次消融靶区凝固性坏死体积大小,并行统计学分析。结果各剂量下纳米微泡组与Sono Vue组消融的组织体积均大于PBS溶液组(P﹤0.05);随着纳米微泡组与Sono Vue组剂量的增加,其消融体积均明显增加,而各PBS组差异无统计学意义(P﹥0.05)。在相同的剂量下,纳米微泡组消融体积大于Sono Vue组(P﹤0.05)。结论纳米微泡及微米微泡均能显著增强HIFU的消融效果,在相同剂量条件下,纳米微泡较微米微泡能更好地提高HIFU的治疗效果。

前列腺癌PC3细胞靶向纳米微泡造影剂的制备及体外寻靶研究

目的制备前列腺癌PC3细胞的纳米级靶向超声造影剂,观测其物理性质,并检测体外寻靶能力。方法采用旋转蒸发法、机械震荡法制成普通纳米微泡和生物素化纳米微泡,通过生物素-亲和素法将生物素化抗6次跨膜前列腺上皮抗原(six transmembrane epithelial antigen of the prostate,STEAP-1)抗体与生物素化纳米微泡连接制成靶向前列腺癌PC3细胞的纳米微泡造影剂,并利用免疫荧光观察结合情况;观察及检测微泡的形态、分布、粒径及一周内粒径的变化情况;利用显微镜观察纳米靶向微泡对前列腺癌PC3细胞的体外靶向效果。结果成功制备空白纳米造影剂及载STEAP-1抗体的靶向纳米微泡造影剂;两种超声纳米微泡呈圆形,分布均匀,无聚集;一周后两种微泡粒径的变化无显著性差异(P>0.05)。体外寻靶实验中,靶向纳米微泡聚集在前列腺癌PC3细胞表面,预先用生物素化STEAP-1抗体处理的PC3细胞表面没有靶向纳米微泡聚集。结论通过旋转蒸发法、机械震荡法和生物素-亲和素法可成功制备载STEAP-1抗体的靶向纳米微泡造影剂,此造影剂能够在体外与前列腺癌PC3细胞特异性靶向结合。

载顺铂靶向纳米微泡对小细胞肺癌增殖抑制作用的实验研究

目的制备载顺铂抗前胃泌素释放肽(ProGRP)单抗靶向纳米微泡,并研究其对小细胞肺癌(SCLC)增殖抑制效果及抗癌的分子机制。方法应用薄膜水化法制备载顺铂抗ProGRP单抗靶向纳米微泡,研究其理化性质;建立10只SCLC裸鼠皮下移植瘤模型,以空白纳米微泡作对照,分析载顺铂靶向纳米微泡的超声分子靶向显影效果;另建24只SCLC荷瘤裸鼠模型,随机分为4组:空白纳米微泡组、顺铂组、载顺铂纳米微泡组、载顺铂靶向纳米微泡组,计算抑瘤率。采用CCK8法检测其对SCLC增殖的影响;运用RT-PCR和Western blotting分析4个处理组SCLC增殖相关基因P53、Rb、c-myc的mRNA和蛋白水平变化。结果成功制备载顺铂抗ProGRP单抗靶向纳米微泡,粒径为(467.3±42.3)nm,结构稳定;载顺铂靶向纳米微泡在SCLC裸鼠移植瘤体内具有良好的超声分子显影效果,可明显抑制SCLC增殖;RT-PCR和Western blotting显示,与对照组相比,载顺铂靶向纳米微泡组的增殖相关基因P53、Rb的mRNA和蛋白水平显著上调,c-myc的mRNA和蛋白水平显著下调(均P<0.05)。结论载顺铂靶向纳米微泡对SCLC具有抑制增殖的作用,可作为一种治疗SCLC的新型潜在靶向药物。

自制纳米级E-选择素靶向超声微泡对缺血心肌分子成像

目的采用自制的携E-选择素抗体的纳米级靶向超声造影剂对大鼠缺血再灌注损伤后的缺血心肌进行超声分子成像,评估其检测缺血心肌的可行性。方法采用生物素-链亲和素方法制备纳米级靶向微泡,应用荧光显微镜及流式细胞仪检测微泡形态及抗体连接效率;将26只SD大鼠随机分为E-选择素靶向微泡组(MBE组,n=10)、IGg抗体微泡组(MBIGg组,n=10)、普通微泡组(MBC组,n=6),制备心肌缺血再灌注损伤模型,将冠状动脉左前降支阻断15min后恢复灌注,于再灌注后6h经尾静脉分别注射3种微泡行CEUS。后行病理学检查。结果 MBE组缺血区域声学强度(VI)显著高于非缺血区(P<0.05),也显著高于MBC组、MBIGg组缺血区域的VI(P<0.05);MBC组、MBIGg组缺血区域与非缺血区的VI差异无统计学意义(P>0.05)。结论纳米级E-选择素靶向超声微泡可以早期检测到缺血心肌,有望实现缺血心肌的"记忆"成像。

靶向纳米级脂质微泡超声造影剂的研究进展

靶向纳米级脂质微泡作为一种超声造影剂,已在超声成像、生物医药、基因转染等方面展示出重要的应用前景。靶向纳米级脂质微泡能够特异性的结合靶器官或靶组织,微泡聚集在靶器官或靶组织,从而提高靶器官或靶组织的显像分辨率,为早期精准定位定性诊断提供可能。靶向纳米级脂质微泡也可携带基因、药物穿过内皮间隙结合靶器官或靶组织,就能在细胞分子水平上进行基因或者药物治疗,从而增强治疗效果、减轻不良反应。

载紫杉醇的聚乳酸-卵磷脂纳米级微泡的制备及其在超声介导下对肝癌细胞生物效应的评价

目的:本文旨在了解在超声介导下载药微泡对肝癌的治疗作用.方法:我们的研究中以聚乳酸(poly lactic acid,PLA)和卵磷脂为药物载体,以紫杉醇为模型药物,通过冷冻干燥技术以及改良的超声复乳-溶剂挥发法制备载紫杉醇的聚乳酸-卵磷脂纳米级微泡,考察主要的制备参数:(1)超声时间对载药微泡理化特性(包括:粒径、形态、载药量、包封率和超声介导下体外释药特性)的影响;(2)卵磷脂含量,优化其制备最佳条件;然后考察其对于人肝癌细胞的细胞毒性,及其在超声介导下对荷瘤小鼠的抑瘤率和治疗效果.结果:在制备初乳和复乳过程中我们发现在超声时间均为100 s、PLA与卵磷脂质量比为250∶50时可以制得较好的聚乳酸-卵磷脂纳米级微泡.其平均粒径为615 nm、内部为空心的纳米级微泡,药物包封率可达90.90%±5.79%,载药率可达到8.26%±0.53%,紫杉醇以无定型状态分布在微泡的壳内;其在体外药物释放具有零级释放、缓释以及在超声介导下加快药物释放的特点.并且在紫杉醇浓度为10μg/mL时HepG2人肝癌细胞的增殖率仅为43.37%±3.23%.结论:相对于单纯的紫杉醇注射剂而言,在超声介导下载药纳米级微泡注射剂可以提高抑瘤率并且还能减少对小鼠的不良反应.