纳米材料在基因转染中的应用——Starburst PAMAM dendrimers研究现状

提高重组DNA对培养细胞及活体水平的转染效率是利用重组DNA进行预防和治疗疾病所必须解决的难题之一。一种新型阳离子多聚物———StarburstPAMAMdendrimers的出现为解决现存的难题带来了一线曙光。StarburstPAMAMdendrimers是 1985年之后出现的一类新型星射状树形高分子 ,它们结构规整 ,具有呈辐射状对称的刚性球体结构 ,在生理条件下 ,StarburstPAMAMdendrimers分子具高的表面正电荷密度 ,能与天然状态下存在的带负电荷的生物活性物质 (如核酸 )发生静电相互作用形成复合物。该类树形高分子可极大增强DNA转染真核细胞的转染效率 ,具有许多优于其它现有转染试剂的优良特性 ,并具有在活体内应用的潜力。本文介绍了九十年代以来对该类树形高分子在体外培养细胞及活体水平增强DNA转染效率的研究现状并对今后的研究和应用进行了分析。

共刺激分子CD80基因转染对肝癌细胞恶性表型的影响

目的 观察转染了B7 1基因后肝癌细胞生物学特性的变化。方法 通过逆转录病毒载体介导B7 1基因转入HepG2细胞 ,流式细胞仪 (FCM)检测HepG2和HepG2 /hB7 1细胞表面B7 1分子的表达水平 ,RT PCR检测HepG2和HepG2 /hB7 1细胞B7 1mRNA的水平。观察HepG2和HepG2 /hB7 1细胞的生长曲线。结果 HepG2细胞表面B7 1分子表达水平低 ,其阳性率为 3 6 6 %。而HepG2 /hB7 1的B7 1分子阳性表达率达到 92 6 % ,转染B7 1基因后较转染前增大了 2 8倍多。HepG2和HepG2 /hB7 1的生长曲线相比 ,后者生长曲线上升减缓 ,生长速率减慢。结论 (1)HepG2表面B7 1分子的低水平表达是其弱免疫原性的主要原因。 (2 )逆转录病毒载体介导B7 1基因转染HepG2可以获得B7 1高表达的阳性克隆。 (3)B7 1基因的转染可以降低肝癌细胞的恶性表型。

叶酸聚乙二醇接枝支化聚乙烯亚胺纳米载体转染螺旋神经节细胞

背景:新型阳离子纳米材料叶酸聚乙二醇接枝支化聚乙烯亚胺易于合成和改性,稳定性好,结构及性能容易调控,已被作为基因治疗转染载体应用于多种疾病的研究。目的:观察叶酸聚乙二醇接枝支化聚乙烯亚胺转染体外培养小鼠内耳螺旋神经节细胞的可行性及特点。方法:分别以叶酸聚乙二醇接枝支化聚乙烯亚胺(实验组)、阳离子脂质体Lipofectamine?2000(对照组)作为载体,制备携带增强型绿色荧光蛋白的转染载体系统。将昆明小鼠螺旋神经节细胞分别培养于含实验组和对照组转染载体系统的DMEM/F-12培养基中,培养24 h后,MTT法观察载体系统的细胞毒性,倒置荧光显微镜观察细胞形态及绿色荧光蛋白表达强度,流式细胞仪检测细胞转染率。结果与结论:两种载体分别转染后,螺旋神经节细胞形态均未发生明显改变,但两组载体对螺旋神经节细胞均有一定的毒性,实验组载体毒性较小且转染效率较高(P<0.05)。结果说明叶酸聚乙二醇接枝支化聚乙烯亚胺基因转染体外螺旋神经节细胞的转染效率及细胞毒性均优于传统的阳离子脂质体。

B7转染人肝癌细胞株的建立及生物学特性的实验研究

研究共刺激信号在肿瘤免疫中的作用。脂质体介导DNA转移法将人B7基因转入人肝癌细胞株Smmc772 1,建立新的细胞株B7+ Smmc772 1,PCR及逆转录PCR(RT -PCR)法鉴定。四唑盐 (MTT)比色试验体外检测白细胞介素 - 2 (IL - 2 )激活的LAK细胞 (LAK -C)对两种肝癌细胞的杀伤活性。PCR ,RT -PCR法证实B7+ Smmc772 1细胞稳定表达B7基因 ,LAK细胞对B7+ Smmc772 1细胞的杀伤活性明显高于Smmc772 1,结果有统计学意义。B7基因可以体外转染人肝癌细胞 ,并表达有活性的B7分子 ,并可明显增强IL - 2激活的LAK细胞的肿瘤杀伤作用 。

激光及光化学法在基因转染中的作用

基因转染是分子生物学领域中一项重要技术 ,也是实现基因治疗的前提条件。寻找高效、安全的基因转染方法一直是基因治疗的热点问题。激光微束技术导入基因和光化学转染是近年来发展起来的新颖而有效的基因转移技术。

内皮型一氧化氮合酶基因体内转染对大鼠颈总动脉损伤后血管狭窄程度的影响

目的将内皮型一氧化氮合酶基因转染至球囊损伤后的大鼠颈总动脉中,观察其对血管狭窄程度的影响。方法将大鼠分为正常对照组、空白对照组、pcDNA3.1(-)组和内皮型一氧化氮合酶组。除正常对照组外均行颈总动脉内膜球囊损伤术,术中采用脂质体载体FuGENE6分别介导真核表达载体pcDNA3.1内皮型一氧化氮合酶和pcDNA3.1(-)转染至损伤后的内皮型一氧化氮合酶组和pcDNA3.1(-)组大鼠血管中。于术后2周处死大鼠,以逆转录—聚合酶链反应法检测转染后体外培养的血管平滑肌细胞中内皮型一氧化氮合酶mRNA的表达,并于术后1月和2月处死大鼠,检测颈总动脉血管狭窄的程度。结果2周后转染pcDNA3.1内皮型一氧化氮合酶基因的血管平滑肌细胞中可以检测出内皮型一氧化氮合酶mRNA的表达,1月和2月后转染pcDNA3.1内皮型一氧化氮合酶基因的颈总动脉狭窄程度明显小于空白对照组和pcDNA3.1(-)组(P<0.01)。结论内皮型一氧化氮合酶基因体内转染可以在血管平滑肌细胞中成功表达,且可以明显改善球囊损伤后颈总动脉狭窄的程度。

siRNA的设计、合成与转染及其在RNA干扰中的应用

基因阻断技术近年来发展迅速,已成为分子生物学研究的主要技术手段之一。RNA干扰(RNA interference,RNAi)是由双链RNA介导的、在转录后mRNA水平关闭相应基因表达的过程。RNAi最初发现于某些植物中,随后在线虫、果蝇、斑马鱼中相续发现存在RNAi现象。最近,在哺乳动物细胞中的研究也取得满意结果。RNAi作为新兴的基因阻断技术,在人类基因功能研究、基因治疗方面已显示出巨大的前景。

野生型P53基因转染对肝肿瘤细胞系的影响

随着肿瘤发生的分子机制研究取得重要进展，肿瘤的治疗技术除外科手术、放疗、化疗以及生物治疗外，人们目前正寻求一种新的治疗方法——基因治疗。P53基因是当今研究的热点之一，它与人类许多肿瘤的发生发展有关。野生型P53基因是显性基因，单拷贝基因的表达就可抑制肿瘤的生长，因此，将野生型P53基因导入肿瘤细胞，

转导、转染和转化

在分子细胞生物学研究中，涉及转导、转染和转化的工作很多，涉及转导、转染和转化的实验技术应用得很广泛。但在一些来稿和论文中，往往发现有混淆转导、转染和转化概念与用法的现象。现将三者的正确概念和表述分列于下，以供参考。

转化、转导、转染和感染的用法

转化（transformation）、转导（transduction）、转染（transfection）和感染（infection）是分子生物学实验中将外源基因导入受体细胞的4种技术,它们词形相近,概念上容易混淆。＂转化＂是指含外源基因的重组质粒（载体）将外源基因直接导入原核细胞（如细菌）;＂转导＂指通过重组病毒载体将外源基因导入真核细胞或原核细胞;＂转染＂指重组质粒载体或游离核苷酸在脂质体等介导下进入真核细胞；“感染”在基因转移实验中强调重组病毒载体入侵受体细胞的过程。在使用这4个名词时，应仔细分析基因转移实验的四要素——转移物、载体、介导方法、受体细胞类型，而正确区分载体和受体细胞类型是辨析的关键点。当载体是重组质粒时，如受体细胞是原核细胞应使用“转化”，如受体细胞是真核细胞则使用“转染”；当载体是重组病毒时，如强调转移物进入受体细胞应使用“转导”，如强调重组病毒载体进入受体细胞的过程则使用“感染”。

转化、转导、转染和感染的用法

转化（transformation）、转导（transduction）、转染（transfection）和感染（infection）是分子生物学实验中将外源基因导人受体细胞的4种技术，它们词形相近，概念上容易混淆。“转化”是指含外源基因的重组质粒（载体）将外源基因直接导人原核细胞（如细菌）；“转导”指通过重组病毒载体将外源基因导入真核细胞或原核细胞；“转染”指重组质粒载体或游离核苷酸在脂质体等介导下进入真核细胞；“感染”在基因转移实验中强调重组病毒载体入侵受体细胞的过程。在使用这4个名词时，应仔细分析基因转移实验的四要素——转移物、载体、介导方法、受体细胞类型，而正确区分载体和受体细胞类型是辨析的关键点。当载体是重组质粒时，如受体细胞是原核细胞应使用“转化”，如受体细胞是真核细胞则使用“转染”；当载体是重组病毒时，如强调转移物进入受体细胞应使用“转导”，如强调重组病毒载体进入受体细胞的过程则使用“感染”。

转化、转导、转染和感染的用法

转化（transformation）、转导（transduction）、转染（transfection）和感染（infection）是分子生物学实验中将外源基因导入受体细胞的4种技术，它们词形相近，概念上容易混淆。“转化”是指含外源基因的重组质粒（载体）将外源基因直接导入原核细胞（如细菌）；“转导”指通过重组病毒载体将外源基因导入真核细胞或原核细胞；

转化、转导、转染和感染的用法

转化（transformation）、转导（transduction）、转染（transfection）和感染（infection）是分子生物学实验中将外源基因导人受体细胞的4种技术，它们词形相近，概念上容易混淆。“转化”是指含外源基因的重组质粒（载体）将外源基因直接导人原核细胞（如细菌）；“转导”指通过重组病毒载体将外源基因导入真核细胞或原核细胞；“转染”指重组质粒载体或游离核苷酸在脂质体等介导下进入真核细胞；

转基因血吸虫的研究进展

近年来 ,伴随着基因转移等分子生物学技术的突飞猛进 ,转基因血吸虫的研究取得了一定突破 ,该文以血吸虫的生活史、转染方法、绿色荧光蛋白等方面为切入点 。

血管紧张素转化酶反义cDNA对大鼠心脏成纤维细胞胶原合成的抑制作用

为研究血管紧张素转化酶反义cDNA对心脏成纤维细胞胶原合成的影响 ,以脂质体为载体 ,用血管紧张素转化酶反义cDNA转染体外培养的自发性高血压大鼠心脏成纤维细胞 ,测定3H 脯氨酸掺入率以评价对心脏成纤维细胞胶原合成的作用。用反转录聚合酶链反应检测反义基因的表达 ,及其对血管紧张素转化酶基因表达的影响 ,同时检测细胞血管紧张素转化酶活性的变化。血管紧张素转化酶反义cDNA能在心脏成纤维细胞中表达 ,在转染后第 4天达到表达高峰 ,至少持续 1周 ,能减少自发性高血压大鼠心脏成纤维细胞的血管紧张素转化酶mRNA的表达 ,且减少程度与反义cDNA的表达水平呈正相关 ;转染能减少自发性高血压大鼠心脏成纤维细胞的血管紧张素转化酶活性 (14 .2 3± 1.6 2比 2 6 .5 3± 2 .5 0u 10 5个细胞 ,P <0 .0 5 ) ,但对WistarKyoto大鼠细胞血管紧张素转化酶活性无明显影响 (P >0 .0 5 ) ;反义cDNA明显减少自发性高血压大鼠心脏成纤维细胞3H 脯氨酸掺入率 (4 35 5 .7± 75 .9比 6 310 .3± 98.9cpm 10 5个细胞 ,P <0 .0 1) ,但对WistarKyoto大鼠心脏成纤维细胞3H 脯氨酸掺入率无明显影响 (P>0 .0 5 )。以脂质体为载体 ,血管紧张素转化酶反义核酸能抑制自发性高血压大鼠心脏成纤维细胞过高的基础胶原合成活性。

新型纳米粒的研究进展

纳米粒（nanopartilcles NP）是由天然或合成高分子材料制成的粒径介于10～1000nm固态胶体粒子，包括纳米球（Nanospheres）和纳米囊（Nanocapsules）。活性组分（药物、生物活性材料等）溶解、包裹于粒子内部，或者吸附、附着于粒子表面。NP作为新型载体有很多优势：为非生物材料，无免疫原性、细胞毒性；有较高的基因转染效率，可获得靶基因的长期稳定表达；

“逃逸”与抗“逃逸”——现代肿瘤生物学治疗策略评述

“逃逸”与抗“逃逸”——现代肿瘤生物学治疗策略评述王易谢长宜作者单位：上海市免疫学研究所（上海２０００２５）肿瘤能否被机体的免疫系统识别？这在今天似已可定论。但可以被识别的肿瘤细胞又何以能在机体内生存、发展？我们又将如何去对付这些逃脱了识别的肿瘤细胞...