纳米磁微粒化学发光法临床检测总IgE抗体和过敏原sIgE抗体的方法学比对

目的对纳米磁微粒化学发光法平台(纳博克)检测临床样本中的总IgE抗体和过敏原特异性IgE抗体进行方法学比对。方法参考美国临床和实验室标准协会的相关文件,针对总IgE抗体以及屋尘螨D1/粉尘螨D2/交链孢霉M6/蟑螂I6/猫上皮E1/艾蒿W6/牛奶F2/蛋白F1/小麦F4/虾F24/花生F13共计11项过敏原,对纳博克和ImmunoCAP系统的一致性采用卡方检验和Kappa检验进行比较及评价。结果11项过敏原两种方法学比对的Kappa值均>0.75,表明两种方法学具有较好的一致性。除了交链孢霉和小麦两项外,其余项目的阴性、阳性、总符合率和±1级符合率均在90%以上,表明两种方法学的定性一致性良好;Spearman相关系数(r)均位于95%置信区间(CI)内,表明两种方法学的量值具有显著相关性。结论纳博克纳米磁微粒化学发光法过敏原检测平台与ImmunoCAP系统具有良好的一致性,前者的样本用量更少,是一种建议临床推广使用的全定量过敏原检测方法学。

基于纳米磁微粒化学发光技术的S100B蛋白新型检测试剂和仪器的研究

目的:研发一种S100B蛋白新型检测试剂及仪器,为颅脑创伤疾病的诊疗提供参考。方法:将S100B蛋白单克隆抗体与生物素(Biotin)、S100B蛋白抗体与辣根过氧化物酶(HRP)、链霉亲和素与羧基磁珠分别按照一定比例进行交联并稀释,制备R1、R2、R0试剂,再用校准品稀释液稀释S100B蛋白抗原制备校准品。S100B蛋白新型检测仪器由试剂模块、反应模块、清洗模块、检测模块4个部分组成,具体由试剂盘、样本盘、磁微粒盘、装载台、反应盘、清洗盘和检测盘构成。结果:成功制备了用于颅脑创伤患者S100B蛋白检测的新型试剂,研发了配套的化学发光免疫分析仪器,实现了加样、反应、清洗、检测的模块化和自动化。经过临床测试,该试剂和仪器可以准确获得S100B蛋白的浓度。结论:S100B蛋白新型检测试剂和仪器可以提供S100B蛋白的快速批量检测,将为颅脑创伤病情的判断提供重要保证。

牛奶过敏原β-乳球蛋白的重组制备及磁微粒化学发光检测法的建立

运用原核系统表达牛奶β-乳球蛋白(Bos d5)蛋白,建立一种纳米磁微粒化学发光方法用于检测牛奶组分过敏原β-乳球蛋白特异性Ig E抗体的含量。通过优化合成牛奶β-乳球蛋白基因,与质粒重组导入Rosetta原核表达菌株中表达目标蛋白,纯化的重组蛋白采用生物素标记后,在化学发光平台上进行过敏原项目检测。获得纯度﹥85%的22.5 kD重组牛β-乳球蛋白,将生物素化的重组蛋白用于牛奶β-乳球蛋白纳米磁微粒检测试剂盒,检测临床110例血清样本,和Phadia进行方法学比对阳性符合率为88.9%,阴性符合率97.3%,总符合率94.5%,P<0.001,χ^2=84.238,Kappa=0.874,其与Phadia参照试剂盒同样具有良好的检测能力。原核表达系统中获得的重组牛奶过敏组分β-乳球蛋白具有较好的免疫活性,开发的免疫诊断试剂盒具备良好的性能,可用于临床辅助诊断。

纳米磁微粒化学发光法定量检测抗核抗体谱的临床应用

目的研究全自动、定量纳米磁微粒化学发光法(NM-CLIA)检测抗核抗体谱中10种自身抗体的临床应用价值,为抗核抗体谱检测方法的选择提供参考。方法收集2016年10月至2018年2月南方医科大学第三附属医院自身免疫性疾病患者血清1 037例,健康体检者血清200例,用NM-CLIA检测血清抗干燥综合征抗原A60(SSA/Ro60)抗体、抗干燥综合征抗原A 52(SSA/Ro52)抗体、抗干燥综合征抗原B(SSB/La)抗体、抗双链DNA(ds-DNA)抗体、抗核糖核蛋白(RNP)抗体、抗史密斯(Sm)抗体、抗着丝点蛋白B(CENP-B)抗体、抗核糖体P蛋白(Rib-P)抗体、抗核糖体(Nuc)抗体、抗组蛋白(His)抗体,同时应用线性免疫印迹法(LIA)平行检测以上抗核抗体谱,对检测结果进行统计学分析。结果 NM-CLIA在检测血清中10个常见自身抗体时具有较高特异性,均达95%以上;NM-CLIA与LIA对10个自身抗体具有相当的检出率,与文献报道的疾病抗体发生率一致;两种方法在检测抗SSA60抗体、抗SSA52抗体、抗SSB抗体、抗RNP抗体、抗CENPB抗体、抗Nuc抗体和抗His抗体时,表现出良好的一致性(Kappa>0.75,P<0.05),而在检测抗ds-DNA抗体、抗Sm抗体、抗Rib-p抗体时一致性一般(0.4<Kappa<0.75,P<0.05);抗ds-DNA抗体、抗Sm抗体、抗Rib-p抗体在两种方法检测中结果不一致的样本经第三方试剂验证结果显示,NM-CLIA与第三方试剂在检测抗ds-DNA抗体、抗Sm抗体、抗Rib-p抗体时,差异无统计学意义(P>0.05);LIA与第三方试剂检测结果比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 NM-CLIA检测特定抗核抗体谱时具有良好的特异性及检出率,两种方法在检测抗SSA60抗体、抗SSA52抗体、抗SSB抗体、抗RNP抗体、抗CENPB抗体、抗Nuc抗体和抗His抗体时具有良好的一致性,而在检测抗ds-DNA抗体、抗Sm抗体、抗Rib-p抗体时一致性一般,NM-CLIA与第三方试剂的检测结果更吻合。由于NM-CLIA具有全自动、简单、快速、定量、特异性好以及随机组合检测项目等优点,更值得临床推广应用。

化学发光法定量检测食物过敏原特异性IgE抗体性能研究

随着全球食物过敏发生率的逐年升高,食物过敏性疾病已成为人们日益关注的食品安全和公共卫生问题。本实验依据中华人民共和国医药行业标准YY/T 1581-2018,分析了磁微粒化学发光法定量检测过敏原特异性IgE抗体试剂盒产品性能及特点;并就主要食物类过敏原牛奶、鸡蛋、蟹、虾和小麦等5个重点项目与ImmunoCAP过敏原检测系统的检测结果进行了一致性评价。结果显示,该试剂盒检测方法的分析内精密度(CV)<4%,分析间精密度<7%;检出限≤0.10 IU/mL,在0.10~100.00 IU/mL的检测范围内,检测方法的相关系数≥0.9900;其准确度、特异性等各项指标均满足行业标准的要求。所选5个食物过敏原重点项目与ImmunoCAP检测系统比对,阴阳性符合率>90%,Kappa值>0.75。实验所用的过敏原特异性IgE抗体定量检测试剂盒分析性能优良,符合过敏原抗体检测的需求,与ImmunoCAP过敏原检测系统检测结果一致性良好,具有很高的推广价值。

基于纳米磁微粒化学发光分析法的腐食酪螨过敏原特异性IgE抗体检测方法的建立

目的建立用于腐食酪螨过敏原特异性IgE抗体检测的纳米磁微粒化学发光法。方法依据化学发光常规操作步骤,设置条件建立腐食酪螨过敏原特异性IgE检测的化学发光反应体系和合适的免疫反应条件,并以美国Phadia方法为标准,评估所建立化学发光方法的检验性能。应用SPSS21.0软件对两种方法的阳性率x2进行检验,以Pha出a为标准,评价化学发光方法的检测性能。结果化学发光反应体系中,发光底物A液中鲁米诺浓度为0.4mg/ml、发光底物B液中过氧化氢脲浓度为0.2mg/ml,此发光反应体系对辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)的敏感性很髙,可检测到H RP的最小量为0.01mg/m l,在免疫反应中,加人底物A液和B液后室温避光反应5min检测,在5〜30 min内检测数值均有效,37 t:为最佳发光反应温度;选择0.35~H X H U/m l范围作为标准曲线;以Phadia方法为标准,本研究建立的化学发光法敏感度为80.95%、特异度为100%、漏诊率为19%,用于检査腐食酪螨有显著意义。结论本研究成功建立纳米磁微粒化学发光法检测腐食酪蜗过敏原特异性IgE抗体。

纳米磁微粒化学发光法在检测SLE相关自身抗体中的应用价值

目的探讨纳米磁微粒化学发光法(NM-CLIA)在检测系统性红斑狼疮(SLE)相关自身抗体中的应用价值。方法采用NM-CLIA和线性免疫印迹法(LIA)检测108例SLE患者自身抗体,比较两种方法在检测自身抗体的一致性。采用Spearman相关性分析抗体NM-CLIA定量结果与SLE疾病活动性指数(SLEDAI)评分的相关性。结果 NM-CLIA和LIA在检测抗nRNP抗体、抗核糖体蛋白P0抗体、抗Ro-52抗体、抗Ro-60抗体和抗SSB抗体结果一致性较好(Kappa≥0.75),抗Sm抗体和抗双链DNA抗体结果一致性一般(0.40≤Kappa<0.75),抗核小体抗体和抗组蛋白抗体结果一致性较差(Kappa<0.40)。抗双链DNA抗体、抗核小体抗体、抗组蛋白抗体、抗Sm抗体与SLEDAI评分呈正相关(r=0.334、0.362、0.323、0.201,P<0.05)。结论 NM-CLIA可用于检测SLE相关自身抗体,定量结果能够反映SLE疾病活动度。