基于纳米磷脂盘包被CD44v6的特异性多肽筛选

目的本研究对噬菌体展示进行改良,拟获取对Nanodiscs组装即体外膜蛋白模拟后的CD44v6具有结合力及特异性的多肽配体序列。方法对真核来源CD44v3-v10蛋白进行Nanodiscs包被,采取SDS-PAGE、分子排阻色谱验证。以Nanodiscs组装后的CD44v3-v10蛋白为靶蛋白,采用液相筛选磁珠吸附及抗体特异性竞争洗脱的方法获得针对于CD44v6的候选噬菌体,测序获得多肽配体序列。用ELISA法以及噬菌体洗脱试验验证并选择最佳序列。结果SDS-PAGE显示Nanodiscs包被后出现新增条带,分子排阻色谱提示产物峰形成。噬菌体筛选过程中出现明确的富集效应,测序后发现30个克隆包含6条序列。噬菌体ELISA结果显示待测克隆和靶蛋白结合的OD值,与待测克隆和对照蛋白结合、对照克隆和靶蛋白结合的OD值的差异存在统计学意义(P<0.05)。选取OD值最高的3个克隆进行噬菌体洗脱试验。待测克隆与CD44v6阳性的SGC-79细胞结合数量,与待测克隆与CD44v6阴性的HEK-293细胞结合,对照克隆与SGC-7901细胞结合数量间差异存在统计学意义(P<0.05)。选取与阳性细胞结合数量最多、阴性细胞结合数量少的噬菌体克隆(携带多肽序列HNTYVTSFHRNY)为最佳克隆。结论本研究成功对CD44进行Nanodiscs包装,并利用其筛选出CD44v6特异性多肽序列。

天然构象GPRC5D磷脂纳米盘的组装研究

将G蛋白偶联受体GPRC5D蛋白组装进磷脂纳米盘类膜体系内以维持蛋白天然构象的稳定性并对其进行生物活性的验证.首先通过蛋白表达和纯化得到了GPRC5D蛋白,然后以GPRC5D蛋白、膜支架蛋白(MSP)和磷脂按一定比例混合制备GPRC5D磷脂纳米盘.组装后GPRC5D蛋白依旧展现出与阳性抗体结合的能力,充分表明磷脂纳米盘能够有效保留GPRC5D蛋白的生物活性.该研究为制备GPRC5D蛋白磷脂纳米盘提供了新的思路和方法,为探究其蛋白的结构与功能和药物研发奠定基础.