凝集素化昔萘酸沙美特罗纳米粒-微粒的药效和药动学研究

目的研究小鼠体内干粉吸入麦胚凝集素(WGA)化修饰的昔萘酸沙美特罗(SalX)纳米粒-微粒(NiMS)的药效学及药动学。方法通过皮下和腹腔注射卵清蛋白(OVA)建立小鼠肺哮喘病理模型,经气道干粉吸入给予WGA-SalXNiMS粉末,采用对照实验法,检测给药后的肺组织及气道炎症情况,并对药物在小鼠血浆和肺组织中的药代动力学行为进行研究。数据用Sigma State统计软件包处理。结果与模型组相比,SalX-NiMS组和WGA-SalX-NiMS组小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞总数、嗜酸粒细胞、淋巴细胞及巨噬细胞数目呈下降趋势。WGA-SalX-NiMS组小鼠BALF中淋巴细胞及巨噬细胞数与SalX-NiMS组相比减少(P<0.05)。在小鼠血浆中,SalX-NiMS组的tmax为1.500h,Cmax为57.366mg/L,t1/2β为69.315h,AUC0-∞为2 427.205mg·L-1·h,MRT0-∞为55.294h;WGA-SalX-NiMS组的tmax为1.000h,Cmax为62.581mg/L,t1/2β为69.315h,AUC0-∞为4 071.838mg·L-1·h,MRT0-∞为75.094h。在小鼠肺组织中,SalXNiMS组的tmax为0.083h,Cmax为0.497μg/mg,t1/2β为11.231h,AUC0-∞为3.936μg·mg-1·h,MRT0-∞为13.854h;WGASalX-NiMS组的tmax为0.083h,Cmax为0.796μg/mg,t1/2β为27.294h,AUC0-∞为5.578μg·mg-1·h,MRT0-∞为26.330h。WGA-SalX-NiMS组的血浆及肺组织药物浓度均高于SalX-NiMS组(P<0.05)。结论 WGA修饰后的SalX-NiMS在小鼠体内易于释药,血浆和肺组织中药物浓度较高,有利于哮喘发作时炎症的控制与改善。

疏水性药物昔奈酸沙美特罗纳米粒-微粒系统的研制

目的:制备疏水性药物昔奈酸沙美特罗的纳米粒-微粒给药系统。方法:以壳聚糖为载体材料,采用离子交联法联合喷雾干燥工艺制备昔奈酸沙美特罗纳米粒-微粒给药系统,并考察其体外释药及沉降特性。结果:制得的纳米粒-微粒粉末外观较为圆整、规则,粒径分布主要集中在2～8μm范围内,堆密度和休止角分别为(217.28±1.47)mg/ml和(30.24±0.77)°,粉末流动性较好,包封率和载药量分别为(71.40±2.88)%和(7.67±0.31)%。昔奈酸沙美特罗纳米粒-微粒和昔奈酸沙美特罗原药在体外释放初期均表现出一定的突释效应(2h累积释药百分数达到50%以上),24h达到95%以上,其中昔奈酸沙美特罗纳米粒-微粒的体外释药速度与其原药相比较慢。微粒粉末的有效部位沉积百分比为22.07%。结论:本研究可以成功制得昔奈酸沙美特罗纳米粒-微粒给药系统,其载药量和包封率较高,体外释药可控,可吸入性良好,为进一步的载体修饰奠定了基础。

盐酸万古霉素缓释壳聚糖纳米粒-微粒系统的研制

目的：制备盐酸万古霉素的缓释微粒给药系统。方法：以生物相容性好的壳聚糖为载体材料,采用离子交联法制备盐酸万古霉素的壳聚糖纳米粒,通过喷雾干燥法将纳米胶体液进一步制成纳米粒-微粒粉末,并考察其体外缓释特性。结果：离子交联法制备壳聚糖纳米粒简便、易行,喷雾干燥制得的微粒外观圆整,粒径为1~3μm。盐酸万古霉素微粒的载药量为（9.25±1.36）%,12 h的体外累积释药百分数为55.93%,96 h时达到85%。结论：盐酸万古霉素的壳聚糖纳米粒-微粒系统具有明显的缓释效应。

紫杉醇纳米粒-微球系统的研制

目的制备紫杉醇纳米粒-微球系统(taxol nanoparticals-in-microsphere system,TAX-NiMS),并考察其体外释放特性。方法以聚乳酸-羟基乙酸共聚物(poly(lactic-co-glycolic acid),PLGA)为载体,采用乳化溶剂挥发法制备紫杉醇纳米粒(taxol nanoparticals,TAX-NPs)。以包封率、载药量及粒径为考察指标,采用单因素试验法优化处方。采用内源乳化凝胶法,以海藻酸钙为包裹材料,制备包覆TAX-NPs的微球系统。在扫描电镜和透射电镜下观察TAX-NiMS的表面和内部形态,并测定其粒径及体外释放特性。结果纳米粒优化处方:PLGA质量浓度为100 g·L-1,聚乙烯醇质量浓度为10 g·L-1,油相与水相体积比为1∶10,超声功率为300 W。微球优化处方:海藻酸钠(NaALG)质量浓度为15 g·L-1,Span-80质量浓度为10 g·L-1,Ca CO3与Na ALG质量比为1∶3,油相与水相体积比为1∶5。此条件下制备的TAX-NiMS的包封率、载药量和平均粒径分别为(84.33±1.11)%、(1.12±0.15)%和(2.678±0.014)μm。TAX-NiMS的12h释放量仅达到16.51%。结论 TAX-NiMS的制备方法稳定可控,且突释效应显著减小,为药物新剂型的开发提供了思路。

抗大肠杆菌卵黄抗体及其纳米粒-微球对大肠杆菌腹泻预防效果评价

试验旨在探讨抗大肠杆菌卵黄抗体(IgY)及其纳米粒-微球对大肠杆菌腹泻的预防效果。采用IgY连续饲喂小鼠8 d,记录并计算小鼠体重变化、血常规变化、器官指数、巨噬细胞吞噬指数和吞噬百分数;建立小鼠大肠杆菌腹泻模型,将小鼠随机分为IgY组、纳米粒-微球组、空白对照组,分别以口服、腹腔注射、腹腔注射+口服3种方式给药,其中空白对照组以磷酸缓冲盐(PBS)代替IgY。结果显示,IgY饲喂试验中,IgY组小鼠的平均日增重高于对照组,增幅为11.25%;IgY组小鼠的肝脏指数、脾脏指数、巨噬细胞吞噬百分数显著高于对照组(P<0.05),IgY组小鼠的巨噬细胞吞噬指数极显著高于对照组(P<0.01)。在小鼠腹泻预防试验中,IgY与IgY纳米粒-微球对小鼠大肠杆菌腹泻均具有一定的保护作用,IgY组口服、腹腔注射、腹腔注射+口服3种给药方式下小鼠死亡率分别为16.67%、33.33%、0,IgY纳米粒-微球组对应给药方式的死亡率为83.33%、0、16.67%。研究表明,IgY对小鼠的生长及免疫具有促进作用,抗大肠杆菌IgY及其纳米粒-微球对小鼠大肠杆菌腹泻有显著的预防作用。

氢溴酸东莨菪碱纳米粒-微球系统的研制

制备氢溴酸东莨菪碱纳米粒-微球系统(scopolamine hydrobromide nanoparticles-in-microsphere system,SH-NiMS)并考察其体外释放特性。以三聚磷酸钠(TPP)为交联剂,以壳聚糖为载体材料,采用离子交联法制备SH纳米粒,以包封率和载药量为考察指标,采用正交设计综合评分法优化纳米粒处方。调整喷雾干燥仪器参数,以HPMC为载体材料,将制得的SH纳米粒在喷雾干燥作用下制备成包裹纳米粒的微球系统,即NiMS系统。在电镜下观察SH-NiMS的外观、红外检测其结构变化并测定其体外释放特性。纳米粒制备处方经正交试验优化为:壳聚糖/TPP为3∶1(w/w),HPMC浓度0.3%、SH浓度0.2%。喷雾干燥的制备条件调节为蠕动泵速度15%,进口温度110℃,在此条件下制得的SH-NiMS包封产率、载药量和平均粒径分别为94.2%、20.4%和1256.5nm。SH-NiMS外观圆整,性质稳定。结果表明,SH-NiMS制备方法稳定可控,为开发药物新剂型提供了新的思路。

7-羟乙基白杨素聚乳酸-羟基乙酸共聚物纳米粒的制备及体外释放评价

目的:制备和评价7-羟乙基白杨素(7-HEC)聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)纳米粒。方法:采用乳化溶剂挥发法制备7-HEC/PLGA纳米粒,以粒径、多分散系数(PDI)、包封率、载药量及Zeta电位为评价指标,通过单因素考察结合Box-Behnken响应面法优化处方。采用甘露醇作为冻干保护剂制备冻干粉,对最优处方制备的7-HEC/PLGA纳米粒进行表征及体外释放研究。结果:经Box-Behnken响应面法优化后的最优处方为:药载比2.12∶20,油水体积比1∶14.7,乳化剂为2.72%大豆磷脂。最优处方条件制备的7-HEC/PLGA纳米粒的平均粒径为(240.28±0.96)nm、PDI为0.25±0.69、包封率为(75.74±0.80)%、载药量为(6.98±0.83)%、电位为(-18.17±0.17)mV。体外释放48 h内累积释放度达到50%以上。结论:优化所得处方工艺稳定、操作简便。所得7-HEC/PLGA纳米粒粒度均匀,包封率较高。相对于7-HEC原料药,7-HEC/PLGA纳米粒的溶出度显著提高。

乌苯美司-壳聚糖纳米粒的制备及质量评价

目的制备乌苯美司-壳聚糖纳米粒（Uben-CS-NP）,并利用现代科学技术对其进行质量评价。方法采用离子交联法制备Uben-CS-NP,并研究其形态、粒径、电势、pH值、包封率、载药量及体外释药行为。结果 Uben-CS-NP的制备方法可行,其形态圆整规则,粒径为300∽600 nm,平均粒径为442 nm,zeta电势为＋37.8 mV,pH值为6.0,包封率为69.1%,载药量为31.4%;体外释药：在1 h内突释,累积释药量达28.77%,之后缓慢释放,第12、24 h时累积释药量分别为42.56%、50.93%。结论 Uben-CS-NP的质量可控,体外释药符合Higuchi方程,缓释作用明显。

薄膜-超声分散法制备β-榄香烯固体脂质纳米粒

目的制备β-榄香烯固体脂质纳米粒,并对其粒径和包封率进行考察。方法采用薄膜-超声分散法制备,并以包封率为指标采用正交设计法优化β-榄香烯固体脂质纳米粒的制备工艺。结果所得β-榄香烯固体脂质纳米粒的最佳制备条件是β-榄香烯20μL,卵磷脂90mg,硬脂酸90mg,2.5%聚山梨酯805mL,2.5%泊洛沙姆1885mL。结论该处方可用于β-榄香烯固体脂质纳米粒的制备,工艺可行。

载穿心莲二萜内酯有效部位的透明质酸-苯硼酸纳米粒的制备

目的制备载穿心莲二萜内酯有效部位的透明质酸-苯硼酸纳米粒。方法酰胺反应合成透明质酸-苯硼酸后,溶剂挥发法制备纳米粒,并进行表征。MTT法检测体外细胞毒性,HPLC法测定细胞摄取效率,UPLC-MS/MS法考察药动学行为。结果所得纳米粒呈球形,形态均一,平均粒径为(112.3±0.92)nm,Zeta电位为-48.4 mV,载药量为(47.50±0.62)%,包封率为(90.1±1.60)%,30 d内稳定性良好,24 h内累积释放度为90%。与原料药相比,纳米粒对HepG2、A549、MCF-7细胞的细胞毒性显著增强(P<0.05,P<0.01),摄取量显著升高(P<0.05),并呈时间依赖性。纳米粒体内消除缓慢,延长了药物循环时间。结论载穿心莲二萜内酯有效部位的透明质酸-苯硼酸纳米粒具有较强的体外抗肿瘤活性,并可促进大鼠体内药物吸收和生物利用度。

两性霉素B/聚乙二醇-聚谷氨酸苄酯纳米粒的体外细胞摄取研究

目的:研究聚乙二醇-聚谷氨酸苄酯(PEG-PBLG)纳米粒对两性霉素B(AmB)的增溶作用和纳米粒的体外巨噬细胞摄取特性.方法:透析法制备AmB/PEG-PBLG纳米粒,HPLC法测定AmB的含量,荧光分光光度计测定芘标记纳米粒的细胞摄取率.结果:不同分子量的0.2%(w/v)PEG-PBLG纳米粒分散液中,AmB的浓度为714.1～961.2μg/mL,与在水中的溶解度相比提高了85.0～114.4倍.PEG所占比例高的Py-NP 99(E/G=64/36)的细胞摄取率约为Py-NP 114(E/G=33/76)的1/2.表明Py-NP99能有效抑制血浆蛋白吸附,逃避MPM摄取.结论:PEG-PBLG纳米粒可有效增溶AmB,并且随PEG比例的增加纳米粒抗吞噬能力增强,有利于AmB非RES部位的转运.

工艺因素对超声-挤压过滤法制备β-榄香烯固体脂质纳米粒平均粒径的影响

目的研究工艺因素对β-榄香烯固体脂质纳米粒(SLN)平均粒径的影响。方法以超声-挤压过滤法制备β-榄香烯SLN,研究超声强度、超声时间以及制备温度等因素对其平均粒径的影响。结果绝大多数β-榄香烯SLN的平均粒径小于150 nm。其平均粒径随超声时间的延长和制备温度的提高而有所下降,但是受持续超声时间的影响较小。考察的制剂中,在超声强度为400W、超声温度为80℃、超声时间为6 min条件下制备的β-榄香烯SLN的平均粒径最小。结论采用超声-挤压过滤法可制备β-榄香烯SLN,超声强度、总体超声时间以及温度等是影响其平均粒径的主要工艺因素。

星点设计-效应面法优化青藤碱聚乳酸-羟基乙酸纳米粒的制备工艺

目的制备青藤碱聚乳酸-羟基乙酸共聚物[poly(1actide-co-glycolide acid),PLGA]纳米粒,并优化该处方及其制备工艺。方法采用纳米沉淀法制备纳米粒,以青藤碱和PLGA的质量比、有机相和水相的体积比、表面活性剂聚氧乙烯氢化蓖麻油(RH40)的浓度为考察因素,以包封率和载药量为指标,通过星点设计-效应面法优化处方及制备工艺,并对其进行验证。结果青藤碱PLGA纳米粒的最佳处方和工艺条件为:青藤碱与PLGA的质量比1.4∶10;有机相与水相的体积比为2.2∶10,表面活性剂RH40的浓度为0.7%。制备的纳米粒平均粒径为113 nm,平均包封率为81.53%,平均载药量为7.65%。结论星点设计-效应面法简便可行,适用于青藤碱聚乳酸-羟基乙酸纳米粒的制备工艺优化。

5-氟尿嘧啶磁性脂质体纳米粒在大鼠体内药物动力学研究

目的探讨5-氟尿嘧啶磁性脂质体纳米粒(FMLNP)在大鼠体内的药物动力学规律,求算药动学参数并进一步考察其靶向性。方法分别经肝动脉给以游离5-Fu、FMLNP肝区不加磁场及FMLNP肝区加磁场三种方式给药,于给药后6min、10min、0.5h、1h、2h、4h、6h、8h测血液及各组织的药物浓度,比较不同给药方式下各组织的药时分布曲线、AUC值(药时曲线下面积)直条图;根据血液的药时浓度,采用3P87药动学处理软件,对三种方法血浆中的药物浓度经时数据进行处理,确定最佳房室模型,求算药动学参数;根据血药浓度及“3P87”软件求得参数、分析结果,应用“MATLAB”软件进行房室仿真,从另一方面检验“3P87”软件拟合的可信度。结果与游离5-Fu组、FMLNP肝区不加磁场组比较,经肝动脉给以FMLNP并在肝区加磁场后,药物在肝内峰值浓度均明显升高(P<0.01),且滞留时间延长,肝外各组织药物浓度均低;经肝动脉给以游离5-Fu组、FMLNP肝区不加磁场组均为二室模型,而FMLNP肝区加磁场组符合三室模型。结论经肝动脉给以FMLNP并配合外加磁场,药物在肝区的靶向选择性最好,滞留时间延长,FMLNP改变了5-Fu在大鼠体内的分布特性,延长了5-Fu的半衰期,提高了5-Fu的生物利用度,具有很强的肝脏靶向性和缓释性。

乳酸-羟基乙酸共聚物包载匹伐他汀纳米粒的制备及其对内皮祖细胞的增殖作用

制备乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)包载匹伐他汀纳米粒,检测其形貌、粒径、载药量、包封率及体外释药特点,研究其对内皮祖细胞的增殖作用。采用溶剂扩散法制备PLGA包载的匹伐他汀纳米粒,扫描电镜观察纳米粒形貌,激光粒度仪测定粒径,高效液相色谱法检测并计算载药量、包封率,体外药物释放实验检测纳米粒的缓释效能,CCK8法检测空白PLGA纳米粒及匹伐他汀纳米粒对内皮祖细胞的活性影响。扫描电镜下匹伐他汀纳米粒呈圆球形,平均粒径在(230.1±45)nm,载药量与包封率分别为(10.00±1.83)%、(35.54±5.40)%,具备缓释性能,不同浓度空白PLGA纳米粒对内皮祖细胞活性均无影响,匹伐他汀纳米粒组(0.01、0.1μmol/L)可显著改善内皮祖细胞的增殖活性,与同浓度匹伐他汀原药组相比差异显著。结果表明,溶剂扩散法可制备形态较好的匹伐他汀纳米粒,具备缓释性能,载体材料具有较好的细胞生物相容性,匹伐他汀纳米粒显著改善内皮祖细胞增殖活性。

槲皮素PLGA-TPGS纳米粒在荷HCa-F细胞小鼠体内肝靶向性的研究

目的评价槲皮素(QT)/香豆素6(C6)乳酸羟基乙酸共聚物-水溶性维生素E纳米粒(QCPTN)在荷肝癌细胞HCa-F异位实体瘤小鼠体内的分布及对小鼠肝脏的靶向性。方法建立RP-HPLC法测定QT在荷肝癌细胞HCa-F异位实体瘤小鼠血浆及肝、实体瘤、脾、肺、肾和心的浓度。将QCPTN和QT溶液(QTS)经小鼠尾静脉注射后,测定不同给药时间后小鼠血浆及各组织中的QT浓度。采用相对靶向效率(Re)和靶向效率(Te),同时通过对各组织进行冰冻切片、荧光倒置显微镜下观察荧光纳米粒QCPTN在各组织的分布,定性、定量地全面评价QCPTN对肝脏的靶向性。结果 QCPTN在血浆、实体瘤、脾、肺、肾、心中的Te均>3,表明QT在肝脏比血浆和其他组织匀浆中的曲线下面积(AUC)高3倍以上。冰冻切片图可见在1 h的QCPTN组小鼠各组织中,肝中荧光分布面积最大。结论 QCPTN对荷肝癌细胞HCa-F异位实体瘤小鼠肝脏有良好的靶向作用。

聚乙烯亚胺-乳酸羟基乙酸共聚物阳离子纳米粒介导宫颈癌细胞基因转染效率的研究

目的优化聚乙烯亚胺-乳酸羟基乙酸共聚物(PEI-PLGA)阳离子纳米粒介导的癌细胞基因转染效率。方法用二步法制备报告基因质粒pCMVβ/PEI-PLA纳米粒复合物,透射电镜观察粒子形态,Zeta粒度仪测定粒径和表面电荷。以pCMVβ基因质粒与纳米粒的比(N/P)、转染时间和基因转染剂量为条件,转染效率为指标,正交设计法优化pCMVβ/PEI-PLGA纳米粒复合物的转染效率。结果pCMVβ/PEI-PLGA纳米粒复合物呈单分散球形,N/P比为10∶1,Zeta电位为+16.5mV,平均粒径为217nm,基因质粒剂量为每孔3μg时,纳米粒复合物的转染效率最高为16.35%。结论PEI-PLGA纳米粒可有效将报告基因质粒转移入宫颈癌细胞,优化实验条件可提高转染效率。

表阿霉素α-聚氰基丙烯酸正丁酯纳米粒生物安全性的初步评价

目的进行新型抗肿瘤复合材料表阿霉素α-聚氰基丙烯酸正丁酯纳米粒(EPI-PBCA-NP)生物安全性的初步评价。方法使用SD大鼠进行慢性毒性试验,检查一般状态、血液学、心肌酶学、肝肾功能及重要脏器病理学以及可逆性观察等,判断EPI-PBCA-NP的生物安全性。结果低剂量EPI-PBCA-NP与对照组相比无明显差异,中、高剂量均表现出一定的毒性,随剂量的增加,毒性反应也更加明显。结论EPI-PB-CA-NP的生物安全需进行更深入研究,以确保临床使用和应用的安全。

半乳糖-羧化壳聚糖-十四酸纳米粒的制备及其肝靶向性

目的:制备半乳糖-羧化壳聚糖-十四酸纳米粒(galactose carboxyl chitosan myristic acid nanoparticles,GCCMA),观察GCCMA纳米粒在肝癌细胞中的靶向性.方法:本实验组采用自组装法制备GCCMA纳米粒,优化制备条件,并经过本实验组鉴定稳定性及生物相容性,纳米粒经荧光标记后分别取不同浓度转染肝癌细胞及HT22海马神经细胞,对照组、HT22海马神经细胞组和肝癌细胞组,以及对照组、肝癌细胞-low组、肝癌细胞-mid组和肝癌细胞-high组(置入的GCCMA纳米粒浓度由低到高),分别于1、2和4h时间点测定在细胞摄取纳米粒情况.结果:相同浓度的GCCMA纳米粒,Huh7肝癌细胞摄取量显著高于HT22海马神经细胞,肝癌细胞摄取量在特定区间有剂量依赖性,较高浓度时摄取量较大,在1、2和4h时间点所测定的结果显示,4h时肝癌细胞的摄取量最大.结论:GCCMA纳米粒有肝靶向性,为肝脏肿瘤的靶向性基因治疗或化疗药物提供很好的药物载体及给药途径.

人参皂甙Rg3-聚乳酸纳米粒诱导U87-MG凋亡和Caspase-3的表达

目的研究人参皂甙Rg3-聚乳酸纳米粒对U87胶质瘤细胞的作用。方法采用modified-SESD法制备人参皂甙Rg3-聚乳酸(PLA)纳米粒,采用四甲偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT),流式细胞技术(FCM)和Western blot研究人参皂甙Rg3-聚乳酸纳米粒对U87胶质瘤细胞周期和凋亡的影响。结果 Rg3-聚乳酸纳米粒抗肿瘤增殖作用呈剂量依赖性,人参皂甙Rg3-聚乳酸纳米粒通过与细胞核中DNA作用改变细胞生长的周期,造成在G0-G1期阻滞,引起细胞凋亡。结论表明人参皂甙Rg3-聚乳酸纳米粒在胶质瘤的综合治疗方面有广阔的应用前景。