人转化生长因子β3基因转染KLD-12自组装纳米肽纤维支架三维培养前软骨干细胞

背景:作者前期试验证实了外源性细胞因子人转化生长因子β3具有很强的诱导前软骨干细胞向成熟软骨分化并促进其增殖的能力。国外的研究均证实了在自组装肽纳米纤维支架中三维培养有利于软骨源性干细胞的增殖与分化。目的:将人转化生长因子β3基因转染于三维培养于KLD-12肽纳米纤维支架内的前软骨干细胞中,并比较其与二维培养前软骨干细胞转染效率的差异。方法:以免疫磁珠分选法获取并纯化前软骨干细胞,将其种植于KLD-12肽纳米纤维支架内,使用xfectTM stem纳米干细胞转染试剂将人转化生长因子β3基因分别转染入KLD-12三维支架内培养的前软骨干细胞和普通二维培养基培养的前软骨干细胞,通过免疫荧光和反转录-聚合酶链反应法测定转染后48h不同组别转化生长因子β3基因的表达情况,并利用酶联免疫吸附法测定转染后不同时间细胞培养上清液中转化生长因子β3的质量浓度。结果与结论:免疫荧光结果显示,KLD-12三维支架内培养的前软骨干细胞转染后转化生长因子β3阳性细胞率明显高于普通二维培养基内前软骨干细胞(P<0.05),与反转录-聚合酶链反应法检测结果相同。酶联免疫吸附法测定结果显示,转染24h前软骨干细胞上清液中转化生长因子β3蛋白水平呈上升趋势,72h后达到峰值,随后稍下降进入平台期。提示人转化生长因子β3基因在三维培养于KLD-12肽纳米纤维支架内前软骨干细胞中的转染效率高于普通二维培养基培养的前软骨干细胞。

识别免疫复合物的纳米肽研究进展

小分子危害物在食品中残留是重要的食品安全问题之一,现有的方法主要采用竞争免疫分析的模式检测食品中的小分子危害物。与竞争免疫分析技术相比,非竞争免疫分析技术具有灵敏度高的优势。但小分子危害物由于分子量小,只有一个抗原结合位点,无法直接构建非竞争免疫分析模式。纳米肽是近年来兴起的可识别免疫复合物的识别分子,可用于构建识别小分子危害物的非竞争检测模式。就识别免疫复合物的纳米肽制备技术及基于纳米肽的检测技术研究进展进行综述。

大豆分离蛋白对大豆肽纳米颗粒Pickering乳液性能的影响

为提高大豆肽纳米颗粒(SPN)Pickering乳液稳定性,以大豆肽聚集体为原料,采用超声法制备SPN,对超声时间进行了优化;在SPN体系中引入大豆分离蛋白(SPI)构建复合乳化剂,研究不同乳化剂质量浓度下SPI对SPN界面活性和乳化稳定性的影响。结果表明:选取超声时间10 min制备SPN;随着乳化剂质量浓度的增大,乳液粒径逐渐减小,当乳化剂质量浓度较低(5 mg/mL)时,乳液出现桥联,乳化剂质量浓度过高(30 mg/mL)时则出现絮凝;界面蛋白吸附率随着乳化剂质量浓度的增加呈现先升高后降低的趋势。在相同乳化剂质量浓度下,添加SPI的SPN乳液(SPI-SPN乳液)的粒径分布峰左移,其粒径、界面蛋白吸附率显著小于SPN乳液的;在储存过程中,SPN乳液粒径逐渐增大,SPI-SPN乳液粒径没有显著变化;SPI-SPN乳液的乳析指数小于相同乳化剂质量浓度的SPN乳液,当乳化剂质量浓度为30 mg/mL时,储存15 d SPI-SPN乳液未出现分层现象。综上,SPI可以提高SPN的界面活性和SPN乳液储存过程中的絮凝稳定性和分层稳定性。

复合纳米抗菌肽在羊皮下脓肿病防治的应用效果

目的:研究复合纳米抗菌肽在羊皮下脓肿病防治中的应用效果。方法:回溯性分析某养殖场于2022年1~12月饲养的山羊200只作为样本,按照是否用复合纳米抗菌肽治疗分为对照组(100只)和观察组(100只),对照组山羊采用羔羊料和育肥料饲养,观察组山羊在羔羊料和育肥料中掺入0.005%复合纳米抗菌肽饲养,对育肥期山羊进行攻毒和外科手术治疗。结果:200只山羊攻毒后有36只出现皮下脓肿,金黄色葡萄球菌、伪结核棒状杆菌、其他菌占比分别为28(80.00)、10(28.57)、2(5.71)。金黄色葡萄球菌对青霉素、庆大霉素、红霉素、头孢氨苄、头孢拉定、苯唑西林、氨苄西林、恩诺沙星的耐药率差异显著(P<0.05)。复合纳米抗菌肽与头孢拉定8h、16h、24h药物抑菌实验结果的抑菌圈直径差异显著(P<0.05)。观察组山羊攻毒后羊皮下脓肿病的发病几率和最大直径情况分别为1.00%、1.02±0.00(cm),与对照组差异显著(P<0.05)。观察组山羊外科手术治疗后30d内治愈率、3个月内复发率、皮下脓肿完全消失时间与对照组差异显著(P<0.05)。观察组山羊复合纳米抗菌肽饲养成本、治疗费用分别为70.46±5.63(元/只)、15.36±4.20(元/只),与对照组差异显著(P<0.05)。结论:羊皮下脓肿病主要为金黄色葡萄球菌感染,采用庆大霉素、红霉素、头孢拉定、氨苄西林、恩诺沙星治疗的效果较好,复合纳米抗菌肽的抑菌效果甚至比头孢拉定更好,复合纳米抗菌肽在羊皮下脓肿病防治中均可以发挥重要作用,而且成本较低、经济效益显著。

功能性纳米自组装多肽KLPP凝胶修复软骨缺损的实验研究

目的探讨功能性纳米自组装多肽KLPP凝胶对关节软骨缺损的修复作用。方法培养人骨髓间充质干细胞(BMSCs),将BMSCs分为BMSCs-KLD-12组(BMSCs与KLD-12凝胶共培养)和BMSCs-KLPP组(BMSCs与KLPP凝胶共培养),分别行软骨诱导分化培养,MTT法检测细胞的增殖活性。将人软骨组织分为软骨-KLPP组(制作软骨缺损区并填充KLPP凝胶进行培养)、软骨-KLD-12组(制作软骨缺损区并填充KLD-12凝胶进行培养)、软骨组(仅制作软骨缺损区)。Calcein-AM/PI双染法检测BMSCsKLD-12组及BMSCs-KLPP组的细胞毒性。培养49 d后,收集软骨组、软骨-KLD-12组、软骨-KLPP组的软骨组织进行切片,并行阿尔新蓝染色。Western blot法检测各组中Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ)、Ⅱ型胶原(Col-Ⅱ)、Ⅹ型胶原(Col-Ⅹ)的表达。结果与BMSCs-KLD-12组比较,BMSCs-KLPP组培养1 d、3 d、7 d的细胞增殖率均明显增加(P<0.05),且Col-Ⅰ、Col-Ⅱ、Col-Ⅹ的相对表达水平明显增加(P<0.05)。Calcein-AM/PI双染色检测表明BMSCs-KLPP组和BMSCs-KLD-12组细胞活性基本一致,KLPP凝胶无细胞毒性。与软骨-KLD-12组比较,软骨-KLPP组软骨修复作用更明显(P<0.05),且Col-Ⅰ、Col-Ⅱ、Col-Ⅹ的相对表达水平更高(P<0.05)。结论功能性纳米自组装多肽KLPP凝胶对关节软骨缺损具有良好的修复作用。

细菌-多肽纳米颗粒复合体的超微结构表征

细菌感染严重危害人类健康和公共卫生安全。基于抗菌肽(AMP)的多肽纳米颗粒在对抗细菌耐药中展现出巨大潜力,在多肽纳米颗粒与细菌相互作用的过程中,其超微结构形态的变化对阐明多肽纳米颗粒的抑菌机制至关重要。本文开发了一种对细菌具有较好亲和力的多肽纳米颗粒(BPN),并利用扫描电子显微镜(SEM)和透射电子显微镜(TEM)观察了金黄色葡萄球菌(S.aureus)和铜绿假单胞菌(P.aeruginosa)在结合BPN前后的超微结构形态。结果显示,与BPN共孵育后,细菌表面覆盖着明显的凸起状物质,表明BPN可以有效结合在S.aureus和P.aeruginosa表面。

牡蛎源肽锌纳米粒体外胃肠道消化稳定性及作用机制

本研究旨在探究体外模拟消化对牡蛎源肽锌纳米粒(OPH-Zn)稳定性及其结构的影响,揭示OPH-Zn在胃肠道消化过程中的动态变化规律。采用各种光谱仪(紫外、红外和荧光)、电镜(扫描和透射)以及粒度仪测定模拟消化液中OPH-Zn的锌含量、表面形貌、二级结构以及粒径分布变化。研究发现,OPH-Zn总锌含量高达228.89±2.53 mg/g;在模拟胃液消化过程中,OPH-Zn和ZnSO_(4)对照中可溶性锌含量变化不大,且两个样品无显著差异(P>0.05);转为模拟肠液消化时,OPH-Zn和ZnSO_(4)的锌溶解性分别降低了28.07%和55.31%(P<0.05),与ZnSO_(4)相比,OPH-Zn可溶性锌含量显著高于ZnSO_(4)(P<0.05);光谱分析发现,OPH-Zn在模拟胃液和肠液中保持相对稳定,但在由胃液过渡到肠液时,Zn2+与肽键中氧原子和氮原子的配位作用发生变化,电镜结果显示不同消化程度的OPH-Zn表面微观结构和颗粒大小也存在一定差异。结果表明,OPH-Zn在模拟胃肠道消化中具有一定的稳定性,是一种有商业潜力的补锌剂,同时其结构变化的规律也为肽锌纳米粒的开发和后续研究提供了一定的研究基础。

自组装纳米短肽RADA16-Ⅰ水凝胶在肿瘤细胞三维培养中的应用

背景：已有研究表明培养在三维环境中的细胞,其基因表达模式和生物学活动更接近生命有机体。目的：拟采用自组装纳米短肽RADA16-Ⅰ水凝胶建立乳腺癌细胞MDA-MB-231的三维培养体系以揭示自组装纳米短肽在肿瘤细胞三维培养中的作用。设计、时间及地点：体外观察实验,于2006-09/2007-12在四川大学华西医院纳米生物医学技术与膜生物学研究所细胞学实验室完成。材料：RADA16-Ⅰ由美国BD公司提供;人乳腺癌细胞株MDA-MB-231由中国科学院上海细胞生物学研究所提供。方法：利用圆二色谱仪、原子力显微镜、流变仪对三维培养基质RADA16-Ⅰ水凝胶进行材料表征。通过F-肌动蛋白及细胞核的荧光复染来揭示细胞在三维环境中的细胞形貌。利用钙黄绿素AM对活细胞进行荧光染色,观察细胞在三维基质中的存活力。主要观察指标：①RADA16-Ⅰ的二级结构,纳米纤维网络,凝胶流变性质。②MDA-MB-231在三维培养中的细胞表型,细胞活性。结果：①自组装短肽RADA16-Ⅰ形成了纳米纤维网络结构,纤维直径20-50nm,具有类似体内细胞外基质的结构,形成基质凝胶后可模拟体内的细胞微环境,用于细胞的三维培养。②MDA-MB-231细胞在三维基质中生长呈现出纺锤状的细胞形貌,在基质中的生存状态均较好,细胞与材料具有较好的生物相容性。结论：自组装纳米短肽RADA16-Ⅰ有良好的结构与性能,能充分支持MDA-MB-231细胞的三维培养。

RGD功能化多肽纳米纤维的制备及其体内肿瘤靶向性研究

目的制备肿瘤靶向RGD多肽纳米纤维,研究其体内分布和肿瘤靶向性。方法通过多肽固相合成法制备靶向多肽Nap-GFFYGRGD(RGD-肽)和对照多肽Nap-GFFYGRGE(RGE-肽),利用核磁和质谱对多肽的分子结构进行表征。多肽溶液经煮沸后冷却可自组装形成纳米纤维(RGD-纤维和RGE-纤维),通过透射电镜(TEM)对纳米纤维的微观形貌进行观察。采用氯胺-T法对多肽进行125I标记,利用放射性HPLC对标记多肽进行分离纯化。建立BALB/c小鼠皮下乳腺癌肿瘤模型,125I标记的多肽自组装形成纳米纤维后经尾静脉注射,分别于注射后1、3、6、12 h进行眼球取血并处死小鼠,取肿瘤、心、肝、脾、肺、肾、胃、大肠、小肠、肌肉和脑等,用γ计数仪测量各组织放射性信号强度。结果 RGD-肽和RGE-肽均可自组装形成直径约为10~20 nm的纳米纤维。RGD-纤维和RGE-纤维在注射后各个时间点在体内主要脏器的分布规律相似,主要分布于胃中,其次是肠。但2者在肿瘤组织的分布规律存在显著性差异,RGD-纤维注射后6 h内在肿瘤组织中呈现出一个逐渐积累的过程,而RGE-纤维在3 h时达最高浓度,在6 h 2者差异达到最大,分别为6.25%ID/g和2.79%ID/g(P<0.01)。结论肿瘤靶向肽RGD能明显提高多肽纳米纤维在体内的肿瘤靶向分布,为该载体作为抗肿瘤药物载体用于肿瘤靶向治疗提供了强有力的数据支持。

靶向血管新生肽修饰的氧化铁纳米粒对荷瘤裸鼠磁热疗的研究

目的:制备一种具有靶向新生血管特点的葡聚糖包覆超顺磁性氧化铁纳米粒(superparamagnetic iron oxide nanoparticles,SPIONs),观察其与人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)的亲和力以及对肿瘤组织的靶向结合能力,观察在外加交变电场条件下对荷瘤裸鼠进行肿瘤局部磁热疗的效果。方法:采用化学共沉淀法制备葡聚糖包覆的SPIONs,并将其共价偶联靶向血管新生肽RGD10,命名为RGD-SPIONs。电子显微镜下观察RGD-SPIONs的形态,纳米粒度分析仪检测其大小,原子吸收分光光度计法检测铁含量,与细胞和组织结合后利用普鲁士蓝法进行铁染色鉴定。在外加交变电场的条件下,观察RGD-SPIONs对HUVECs的热杀伤作用,以及静脉注射后对荷瘤裸鼠进行肿瘤局部磁热疗的效果。结果:RGD-SPIONs形态近似圆形,直径为30～40 nm,核心铁颗粒直径为8～10 nm,铁含量为(1.71±0.16)g/L。SPIONs利用RGD肽与整合素的亲和力结合在HUVECs表面,其结合率为(54.4±8.2)%,用交变电场处理后,显示有(38.4±9.8)%HUVECs发生凋亡。小鼠肿瘤冰冻组织切片观察发现,RGD-SPIONs与肿瘤组织有较好的亲和力。局部热疗后荷瘤小鼠的抑瘤率为54.8%,与对照比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:RGD-SPIONs在大小和性能上符合热疗要求,与HUVECs有较好的亲和力,具有肿瘤组织靶向结合能力,局部热疗后对肿瘤生长具有一定的抑制作用。

自聚肽纳米纤维支架承载骨髓源性心肌干细胞移植治疗心肌梗死的实验研究

目的探讨自聚肽纳米纤维支架承载骨髓源性心肌干细胞(MCSC)移植对大鼠心肌梗死后心功能恢复的影响,寻找一种更适合承载心肌干细胞治疗心肌梗死的可注射性生物材料。方法通过单细胞克隆培养技术,从骨髓间充质干细胞中筛选具有心肌特异分化潜能的MCSC,固相合成自聚多肽。将雌性大鼠心肌梗死模型随机分为3组:对照组、MCSC移植组、支架承载MCSC移植组。细胞移植后4周,用M型超声心动图检测心功能恢复情况;对心脏组织切片进行Masson染色,利用图像分析检测胶原纤维比率;用原位荧光杂交法标记心肌组织中Y染色体细胞,并检测其心肌肌钙蛋白T(cTnT)的表达。结果支架承载MCSC移植组与MCSC移植组相比,大鼠的心功能指数明显提高,胶原纤维比率明显减小,Y染色体阳性细胞数明显增多,差异均具有统计学意义。结论支架承载MCSC移植治疗心肌梗死,有利于移植细胞在受损心肌内的存活和向功能性心肌分化,并促进心功能恢复,其疗效优于单纯干细胞移植。

纳米级小肽螯合铜对小白鼠铜排泄和免疫指标的影响

试验的目的是考查以硫酸铜、碱式氯化铜、蛋氨酸铜、纳米铜和纳米小肽螯合铜等不同铜源供给形式对小白鼠铜排泄和血液免疫指标的影响。试验将120只18日龄小白鼠随机分为Ⅰ(小肽+硫酸铜组)、Ⅱ(硫酸铜组)、Ⅲ(碱式氯化铜组)、Ⅳ(蛋氨酸铜组)、Ⅴ(纳米铜组)和Ⅵ(纳米小肽螯合铜)等6个处理组,每个处理组设4个重复,每个重复5只小白鼠。饲喂试验分0～56、～121、3～192、0～26和27～33 d 5个阶段。其中0～5 d为预饲期,后4个阶段为试验期。预饲期和试验期各处理组采用相同的基础日粮。试验期Ⅰ～Ⅵ组饲粮铜的含量(以铜计)在6～12、13～19、20～26和27～33 d 4个阶段分别为2.5、5、10及15 mg/kg。结果表明,纳米小肽螯合铜组小鼠的铜排泄量显著低于其它各组。饲喂第2、3、4阶段,纳米小肽螯合铜组小鼠的血清免疫蛋白IgGI、gMI、gA、胰岛素样生长因子-1(IGF-1)及白介素-2(IL-2)均极显著(P<0.01)高于其它各组。

TGF-β_3诱导大鼠前软骨干细胞向软骨细胞特性方向分化及其在KLD-12自组装肽纳米凝胶中的培养

目的探讨软骨组织工程方法中修复软骨缺损理想的种子细胞和支架材料。方法免疫磁珠分离纯化新生大鼠前软骨干细胞(PSCs),分别采用KLD-12自组装肽纳米凝胶三维培养(实验组)和普通培养瓶平面培养(对照组),用转化生长因子β3(TGFβ-3)诱导两组PSCs向软骨细胞特性方向分化。利用RT-PCR、免疫组化等方法测定其向软骨细胞特性方向分化过程中特异性细胞外基质Ⅱ型胶原(collagenⅡ)和聚集蛋白聚糖(aggrecan)表达的情况。结果RT-PCR和免疫组化检测结果表明KLD-12自组装肽纳米凝胶组细胞在诱导7、14 d后均有collagenⅡ和aggrecan表达,且RT-PCR检测结果表明KLD-12自组装肽凝胶组细胞的collagenⅡ和aggrecan mRNA表达水平较对照组高,其差异有统计学意义(均P<0.05)。结论TGFβ-3诱导后的PSCs可向成软骨方向分化,诱导后的PSCs与KLD-12自组装肽凝胶复合有望构建组织工程化软骨,KLD-12自组装肽纳米凝胶是较好的软骨组织工程细胞支架。

自组装多肽纳米支架对炎症刺激下成骨细胞迁移、增殖影响的研究

目的:通过改变氨基酸序列的方法,合成具有针对成骨细胞双重作用的多肽(RADA16-NBD),并检测其对炎症刺激下成骨细胞迁移、增值能力的影响。方法:制备RADA16-NBD水凝胶并用扫描电镜观察其结构。同时在多肽水凝胶支架RADA16-NBD上接种炎症刺激下的成骨细胞,观察细胞粘附、伸展、迁移和增殖的情况。结果:炎症刺激下成骨细胞能够在RADA16-NBD水凝胶中粘附、伸展、迁移和增值,并对炎症刺激下成骨细胞的迁移、增殖能力都有较高的表达。结论:自组装多肽水凝胶能够支持炎症刺激下成骨细胞的粘附、伸展、迁移和增殖,显示其既具有成骨又能抑制炎症活化的双重功能,为应用于炎症性骨吸收特别是牙周炎引起的骨缺损的治疗开拓一条新的方向和思路。

自聚肽纳米纤维支架对骨髓源性心肌干细胞的作用研究

目的研究白聚肽纳米纤维支架对骨髓源性心肌干细胞（MCSCs）生长和存活的作用。方法设计和同相合成自聚肽，扫描电镜和原子力显微镜下观察其白组装后的形态结构和与MCSCs的相互关系；通过CCK-8法和免疫荧光染色检测纳米纤维支架对MCSCs增殖和分化情况。结果1％多肽溶液自组装成直径约10nm，长度为100～300nm纳米纤维，并相互交织成孔径为50～200nm的网状结构；MCSCs在纤维支架中培养1d后，可见细胞呈长梭形，位于三维纳米纤维支架的网孔中，生长状态良好；生长曲线显示细胞在纤维支架中的增殖能力明显高于对照组；MCSCs在纤维支架中诱导培养4周时，形态和排列方式均发生明显改变。结论纤维支架与MCSCs有良好生物相容性，纤维支架有利于MCSCs的生长和定向分化。

氨基酸构型对多肽纳米纤维体内分布的影响

目的比较由L构型和D构型氨基酸自组装形成的纳米纤维在体内分布的差异,为不同构型氨基酸自组装纳米多肽的体内应用提供指导。方法固相合成法合成多肽Nap-GFFYGRGD(L-肽)和Nap-GDFDFDYGRGD(D-肽),利用核磁和质谱对多肽分子进行结构表征。多肽溶液通过煮沸、冷却、自组装形成纳米纤维(L-纤维和D-纤维),透射电镜观察纳米纤维的微观形貌。125I标记多肽分子后,由其自组装形成的纳米纤维通过尾静脉注射入小鼠体内,分别在1、3、6和12 h采血并处死小鼠,取心、肝、脾、肺、肾、胃、大肠、小肠、肌肉、脑等主要器官,用γ计数仪测量其放射性强度。结果 L-肽和D-肽均可自组装形成纳米纤维,纤维直径约为10～20 nm,且两者微观形貌无明显差异。两种纳米纤维在体内的分布差异有统计学意义。D-纤维在注射后1 h的血液浓度为(8.17±0.32)%ID/g,但较迅速地从血液中清除;L-纤维浓度为(5.96±0.30)%ID/g,在注射后6 h基本保持不变。D-纤维主要分布于肝中而L纤维主要分布在胃中。结论氨基酸构型(D/L)对多肽纳米纤维在体内的分布影响显著,在未来的医学应用中考虑氨基酸构型对体内分布的影响有可能更好地指导多肽纳米纤维的应用。

肽修饰羧基化多壁碳纳米管基因载体的构建与体外评价

目的:制备一种肽修饰羧基化多壁碳纳米管(peptide modified carboxylated multiwalled carbon nanotubes,MHR)基因载体,考察其对HEK293细胞的转染效率及细胞毒性。方法:将羧化的多壁碳纳米管(MWCNTs)与精氨酸(arginine,R)和组氨酸(histidine,H)组成的短肽(HR)按照一定的质量比反应,通过酰胺键连接得到MHR。采用1 H-NMR、红外光谱以及热重分析对其结构进行鉴定。取纯化后的MHR,用激光粒度测定仪测定粒径和zeta电位,凝胶电泳法测定载体MHR对pEGFP质粒的包裹能力。用MHR/pEGFP纳米复合物与HEK293细胞共同培养,考察细胞摄取情况及相关基因转染情况,并测定MHR和MWCNTs-COOH对DU145和RAW264.7细胞的细胞毒性。结果:通过结构鉴定确定MHR合成成功。在氮磷比(N/P)=20时,HEK293细胞对MHR/pEGFP的摄取及转染效率高于其他N/P值时,其中N/P=20时,RAW264.7细胞对MHR/pGL3复合物的摄取率约为单体pGL3的2.4倍,差异具有统计学意义(P<0.05)。细胞毒性实验表明,MHR作用于DU145和RAW264.7细胞24和48h后,当MHR浓度达640μg/ml时,DU145和RAW264.7细胞的活性仍然>80%;而MWCNTs-COOH浓度达320μg/ml时,DU145和RAW264.7细胞活性明显降低;当浓度达640μg/ml时,细胞活性低于20%。结论:MHR有望成为一种高效、低毒的基因载体。

移植自聚合肽纳米纤维材料与RhoA-siRNA复合物修复脊髓损伤

背景:脊髓损伤后RhoA表达增高是神经再生困难的主要原因之一,本课题在前期研究证明自聚合肽纳米纤维材料能较好地促进脊髓损伤后结构与功能修复的基础上,构建了自聚合肽纳米纤维材料与RhoA-siRNA复合材料用于修复脊髓损伤。目的:探讨自聚合肽纳米纤维材料介导siRNA干扰RhoA表达促进脊髓损伤修复。方法:54只昆明小鼠随机数字表法分为4组。假手术组仅作脊髓暴露,其他3组在切除1mm脊髓组织制备全横断脊髓损伤模型后,分别于损伤腔内填充生理盐水、自聚合肽纳米纤维支架或含有RhoA特异性siRNA复合物。通过FAM标记检测siRNA转染效率;免疫组化检测RhoA表达;免疫组化和定量分析检测再生神经纤维;行为学检测评定后肢功能恢复。结果与结论:移植FAM标记的含有RhoA特异性siRNA复合物后,在脊髓内的神经纤维及大脑皮质运动区神经元胞体内均可检测到FAM荧光信号,提示siRNA可从复合材料中释放到组织中并成功导入靶细胞。与SAPNS组和生理盐水组相比,含有RhoA特异性siRNA复合物和自聚合肽纳米纤维支架组可显著降低RhoA在神经元的表达,提高脊髓损伤区内NF阳性神经纤维的密度,促进后肢功能的恢复。结果提示通过自聚合肽纳米纤维支架的介导,含有RhoA特异性siRNA复合物能有效干扰RhoA表达,从而促进脊髓损伤的修复。

自组装纳米短肽基质在肿瘤细胞三维培养中的应用

目的研究人肺癌细胞A549在自组装纳米短肽RADA16三维基质材料中培养时的细胞学行为,揭示肿瘤细胞在三维环境与传统二维环境中培养的差异。方法用透射电子显微镜对材料进行表征;MTT检测细胞对5-氟尿嘧啶的敏感性;黏附性实验分析二维及三维培养的细胞对胞外基质蛋白(Ⅳ型胶原、层粘连蛋白、纤粘连蛋白)黏附率的差异。结果RADA16形成了类似体内细胞外基质的纳米纤维网络。A549在三维基质中的状态较好,随着时间增加、抗药性增加,药物敏感性降低。对不同的胞外基质蛋白黏附率揭示,与二维培养的细胞相比,RADA16三维培养的细胞克隆对不同胞外基质蛋白的黏附性有显著性差异。结论细胞在RADA16三维培养中,细胞的生长、形貌、药敏性及对胞外基质黏附性等细胞行为与二维培养的细胞具有显著性差异,展示了纳米短肽材料在细胞三维培养研究中的应用前景。