基于纳米金复合探针的基因芯片膜转印检测法

建立了一种基于纳米金复合探针的基因芯片膜转印核酸检测新方法。首先,用纳米金颗粒同时标记检测探针P2和两种长短不同且生物素化的信号探针(T10,T40),其中检测探针与靶DNA5′端互补,两种信号探针起信号放大作用。当靶DNA分子存在时,芯片表面捕捉探针P1(与靶DNA分子3′端互补)通过碱基互补配对原则结合靶DNA分子,将其固定于芯片上,同时检测探针通过与靶DNA5′端互补配对将纳米金复合探针结合于芯片表面,结果在芯片表面形成"三明治"结构,后通过链霉亲和素-生物素反应,使芯片表面对应有靶DNA分子的部位结合上碱性磷酸酶,最后利用BCIP/NBT显色系统使芯片表面信号结果镜面转印至尼龙膜表面。当检测探针和信号探针摩尔比为1∶10,T10和T40摩尔比为9∶1时可以检测1pmol/L合成靶DNA分子或0.23pmol/L结核分枝杆菌16S rDNA PCR扩增产物,检测结果通过普通的光学扫描仪读取或肉眼直接判读信号有无。本芯片检测系统灵敏度高,操作方法简单、快速,不需要特殊仪器设备,在生物分子的检测方面具有较高的应用价值。

基于碳纳米管/纳米金复合材料信号探针的可视化棉线快速免疫层析分析装置的研究

该论文合成了性能稳定的碳纳米管/纳米金复合纳米材料探针,并在棉线免疫层析分析装置上实现了肺癌标志物鳞状细胞癌抗原(Squamous cell carcinoma antigen,SCCA)的快速可视化定量检测。该方法利用该复合纳米材料修饰单克隆检测抗体,构建新型信号探针,然后在棉线免疫层析分析装置的检测区域预先固定捕获抗体。检测时样品溶液中的待测物SCCA将会与捕获抗体和信号探针在检测区域形成夹心免疫复合物,从而导致复合材料在检测区聚集形成一条黑色条带。最优实验条件下线性范围为5~5000 ng/mL,检测限为5 ng/mL,其他蛋白质干扰很小。

环丙沙星生物条形码检测技术的研究

该文对快速检测食品中环丙沙星残留的生物条形码检测技术进行研究。首先将环丙沙星多克隆抗体与条形码DNA链共同修饰在纳米金颗粒上制备纳米金复合探针、环丙沙星单克隆抗体与磁性颗粒结合制备磁性探针,然后对其采用可见光光谱法、透射电镜法进行鉴定;其次将上述探针与环丙沙星标准品进行杂交反应,在磁场的作用下,去除未结合的纳米金复合探针,然后收集标记成功的纳米金复合探针释放出的DNA链,采用微孔板银染的生物条形码技术进行检测,得到环丙沙星残留量。检测环丙沙星的最低检出限为2.13 ng/mL。该方法与常规免疫检测方法相比灵敏度增强,具有实用性,为未来检测小分子物质残留量提供了新思路,也为制备环丙沙星生物条形码检测试剂盒奠定了基础。

氧氟沙星单克隆抗体的制备及生物条形码检测技术的研究

目的制备氧氟沙星单克隆抗体,采用生物条形码技术测定氧氟沙星残留量。方法采用碳二亚胺法合成氧氟沙星完全抗原后,用免疫原免疫小鼠,将特异性强的小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合。通过杂交瘤细胞的多次“筛选-亚克隆”过程,制备氧氟沙星单克隆抗体。其次,制备纳米金复合探针、磁性纳米探针,建立基于荧光定量聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)的生物条形码检测方法,在最优条件下采用荧光定量PCR生物条形码检测方法间接测定动物源性食品中氧氟沙星残留量。结果氧氟沙星线性回归方程为Y=14.4263logX+0.09184,r^(2)=0.96。在0.1~128.0 ng/mL范围内,检出限为1.14 ng/mL,添加回收实验结果显示,氧氟沙星平均回收率和相对标准偏差分别为85.8%~102.6%、1.8%~2.6%。结论基于荧光定量PCR生物条形码免疫分析方法检测氧氟沙星的结果可靠,能够应用于实际样品的检测,为氧氟沙星的检测技术提供新的方向。

快速检测仪鉴别食用油品质

随着我国人们生活水平的提高,人们越来越关注食品安全,所以加强对当前食用油品质的检测是非常重要的,是保证食用油品质的重要途径,而想要实现这一目标必须借助科学的检测方法,所以本文就针对这一问题探讨了如何快速检测仪2min鉴别食用油品质。