鱼肉中氯霉素检测用抗体包被金磁纳米微粒修饰安培免疫传感器

研制了基于氯霉素抗体包被Fe3O4/Au金磁纳米微粒(GMP)和三乙撑四胺铜(Ⅱ)(CuL)共固定修饰平面热解石墨电极的安培免疫传感器(PRG|CuL/anti CAP-GMP),用于测定鱼肉中CAP含量。该免疫传感器是利用外加磁场,将antiCAP-GMP吸引到CuL修饰的PRG电极(PRG|CuL)表面制备而成。CuL对H2O2还原具有良好的电催化能力,当该传感器在含CAP样品液中温育后,CAP与电极表面的anti CAP的免疫结合物导致CuL对H2O2的催化还原电流(I)降低,电流下降值(△I)和CAP浓度成正比,可用于CAP定量测定。在25℃的pH=6.5磷酸盐缓冲液(PBS)中温育30 min,该传感器对CAP的检测线性范围为0.6～110 ng/mL,检出下限为0.092 ng/mL(3σ法)。应用于鱼肉中CAP检测并与传统的液相色谱法(HPLC)比较,结果一致,其添加回收率在97%～104%之间。该免疫传感器集分离、富集为一体,电极表面可更新,检测灵敏快速,对于水产品中痕量氯霉素分析提供了一种新颖的方法。

金磁纳米微粒表面蛋白偶联率的测定

金磁纳米微粒因兼具独特的光学性质及超顺磁性而受到广泛关注.对这种复合材料表面标记蛋白的定量为后续应用提供了必要的前提,也为免疫探针的构建提供了空间分布的基本信息.鉴于此,本研究对金磁纳米微粒表面偶联蛋白进行定量.表面改性的金磁纳米微粒表面含有大量羧基,为后续的蛋白偶联提供了偶联位点,以碳二亚胺(EDC)作为连接因子可将链亲合素(SA)化学键合于金磁纳米微粒表面.为得到准确的蛋白偶联率,以三氯乙酸排除EDC对Lowry法的干扰,结合金磁纳米微粒密度的计算以及SA的相对分子量,可以确定其偶联率为18个SA/金磁微粒.

反应条件对配体交换法制备纳米粒子的影响及其在比色检测中的应用

纳米粒子具有极高的比表面积、过剩的表面自由能,极易相互靠近产生团聚,对纳米粒子进行表面修饰及生物功能化是其在生物医药领域应用的前提条件.利用Au-S间的强亲合性,可在CTAB-Fe3O4/Au纳米粒子表面发生配体交换反应,制备MUA-Fe3O4/Au纳米粒子,而配体交换反应条件对表面修饰效果可产生直接影响.本文对比了两种不同反应条件制备的MUA-Fe3O4/Au纳米粒子的胶体分散稳定性,并在表面偶联兔IgG,构建得到了两种免疫探针,且在液相体系中检测对应的羊抗兔IgG抗体.结果表明,长时(24h)水浴超声反应可以得到更好的配体交换效果,且在比色检测中具有更高的灵敏度和更快的检测速度.

基于复合纳米微粒修饰电极的氯霉素快速检测用磁场可控一次性安培免疫传感器研究

在丝网印刷碳电极(SPCE)表面涂敷一层碳纳米管(CNT)/二茂铁(Fc)/Nafion膜,进而通过外磁场作用将包被了氯霉素-牛血清蛋白(CAP-BSA)的纳米金磁微粒[Fe3O4(核)/Au(壳),简称GMP]吸附到其表面,构建了可用于CAP检测的磁场可控一次性安培免疫传感器.采用扫描电镜(SEM)、X射线荧光光谱(XRFS)表征了免疫传感器的制备过程,采用循环伏安法(CV)和示差脉冲伏安法(DPV)研究了免疫传感器的电化学性质,结合竞争性免疫分析法测定了CAP浓度.免疫传感器在含有100ng·mL-1anti-CAP的25μLpH=6.0磷酸盐缓冲溶液(PBS)中加入不同浓度的CAP,并在25℃下温育6min,DPV还原峰电流上升百分比(CI%)与CAP浓度在0.2～80.0ng·mL―1范围内呈线性关系,检测限为0.11ng·mL―1.用于牛奶样品中CAP检测并和标准HPLC方法对照,结果一致,回收率在88%～104%之间.该免疫传感器灵敏快速、外磁场可控、样品用量小、可抛弃,有望用于食品中痕量CAP快速检测.

前列腺癌EpCAM特异性分子探针的构建及其在体MR成像研究

目的:利用金磁纳米微粒偶联核酸适配体构建前列腺癌EpCAM特异性分子探针Ep1-GoldMag,探讨其对EpCAM阳性前列腺癌的亲和性及其在体MR成像能力。方法:将金磁纳米微粒偶联前列腺癌EpCAM核酸适配体制备分子探针Ep1-GoldMag。采用免疫荧光实验检测Ep1-GoldMag靶向EpCAM阳性前列腺癌组织细胞的能力;构建前列腺癌EpCAM荷瘤裸鼠模型,采用免疫组化检测裸鼠肿瘤及其重要脏器组织的EpCAM表达情况。将Ep1-GoldMag注入裸鼠体内,在注射后不同时间点行MRI扫描,比较注射前后各时间点的肿瘤T_(2)WI信号强度,探讨分子探针在体MR成像的可行性。结果:成功制备Ep1-GoldMag,并证实其能特异性识别EpCAM阳性前列腺癌组织细胞。对裸鼠注射Ep1-GoldMag前后行MRI扫描,结果显示注入1 h后,肿瘤T_(2)WI信号明显减低,6 h后T_(2)WI信号持续减低,12 h后T_(2)WI信号略升高,但与注射前相比仍呈低信号,而对照组注射前后T_(2)WI信号强度未见减低,实验组与对照组组间以及实验组内部注射前后各时间点的信号差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:本研究制备的分子探针Ep1-GoldMag具有良好的EpCAM前列腺癌组织细胞特异性,并能在MR上特异性成像。

PSCA特异性MR分子探针的构建及其免疫活性检测

目的应用纳米金磁微粒标记抗人前列腺干细胞抗原(PSCA)单抗7F5,构建PSCA特异性MR分子探针7F5@GoldMag,检测其理化性质和免疫活性。方法将金磁微粒作为MR对比剂标记7F5,应用非共价键偶联方法构建PSCA特异性MR分子探针7F5@GoldMag,计算偶联效率;采用激光共聚焦显微镜观察、流式细胞术、透射电镜观察等方法,检测探针与前列腺癌PC-3细胞结合的特异性。结果成功构建了PSCA特异性MR分子探针7F5@GoldMag。流式细胞术检测结果:7F5@GoldMag与PC-3细胞结合率为92.1%;激光共聚焦显微镜观察见PC-3细胞与7F5@GoldMag有特异性结合,红色荧光位于细胞膜;透射电镜观察PC-3近细胞膜处可见多个团块状致密电子密度颗粒聚集。结论 PSCA特异性MR分子探针7F5@GoldMag可与前列腺癌PC-3细胞特异性结合。

自组装制备Fe3O4@Au复合纳米粒子用于固定化葡萄糖氧化酶

用化学共沉淀法合成了6～12nm的超顺磁性Fe304纳米晶体，在室温下用3-氨丙基三乙氧基硅烷（APTES）对其表面氨基化，然后加入Frens法合成的金溶胶，自组装制备了磁性Fe3O4@Au复合纳米粒子。用透射电子显微镜（TEM）、紫外可见吸收光谱（UV-Vis）、傅里叶变换红外光谱（FT-IR）、震动样品磁场计（VSM）等方法对合成的金磁微粒的表面形貌、光学、结构、磁性质等进行表征。结果表明，合成的金磁微粒粒径分布均匀，在15～20nm，磁响应性好。金磁微粒有超顺磁性和易与生物分子结合的特点，以葡萄糖氧化酶（GOx）为模型，详细研究了固定化酶条件及固定化酶的酶学性质。固定化酶的最优条件为：Fe3O4：HAuCl4摩尔比为0．5：1，pH5．5，温度为28℃。固定化后葡萄糖氧化酶耐热性提高，保存时间延长，且能在外部磁场下分离反复使用。

Magnetic yolk-shell structured anatase-based microspheres loaded with Au nanoparticles for heterogeneous catalysis

Magnetic yolk-shell structured anatase-based microspheres were fabricated through successive and facile sol-gel coating on magnetite particles, followed by annealing treatments. Upon loading with gold nanoparticles, the obtained functional magnetic microspheres as heterogeneous catalysts showed superior performance in catalyzing the epoxidation of styrene with extraordinary high conversion （89.5%） and selectivity （90.8%） towards styrene oxide. It is believed that the construction process of these fascinating materials features many implications for creating other functional nanocomposites.