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题名胞内劳森菌的纳米PCR检测方法的建立
被引量:7
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作者
白云
郑英帅
左奕
孙继国
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机构
河北农业大学动物医学院
天津市动物卫生监督所
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出处
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第12期972-975,共4页
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文摘
为建立一种猪增生性肠炎(PPE)的快速诊断方法,本研究根据Gen Bank中已登录的胞内劳森菌(LI)基因组16S rDNA基因序列,设计1对引物,以疑似PPE的病料样品,通过PK-15细胞培养,分离到一株LI,建立了LI的纳米金PCR检测方法。结果表明该方法能够扩增得到与实验设计相符的202 bp(LI)的特异性片段;与大肠杆菌、沙门氏菌、流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪轮状病毒无交叉反应,特异性良好。与普通PCR法进行比较,该方法检测灵敏度比普通PCR高100倍。经临床检测,从50份病料样品中检出5份阳性样品,并且发现回肠粘膜和粪便中LI的检出率明显高于组织中LI的检出率。该方法可以用于LI的临床快速检测与流行病学调查。本研究为进一步研究LI的人工培养和实验室诊断PPE奠定了基础。
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关键词
胞内劳森菌
猪增生性肠炎
分离
检测
纳米金pcr
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Keywords
Lawsonia intracellularis
porcine proliferative enteropenthy
detection
Nano-pcr
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分类号
S852.61
[农业科学—基础兽医学]
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题名耐热型产肠毒素大肠杆菌检测方法的建立及应用
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作者
吴玉娟
孔繁德
徐淑菲
王仍瑞
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机构
集美大学食品与生物工程学院
厦门出入境检验检疫局
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出处
《集美大学学报(自然科学版)》
CAS
2014年第5期344-349,共6页
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基金
厦门市科技计划项目(3502Z20124003)
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文摘
为建立检测产肠毒素大肠杆菌(ETEC)耐热型肠毒素STa和STb的纳米金PCR方法,根据ETEC耐热型肠毒素STa和STb的基因序列,用Primer 5.0软件设计了2对特异性引物,优化得到最佳反应条件,并进行灵敏度和特异性的测试.实验结果表明:本文所建立的体系均能扩增到目的条带,灵敏度为47.5 cfu/mL,且特异性良好;所建立的纳米金PCR方法在人工染菌实验中也获得了较高的灵敏度和特异性.
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关键词
ETEC
耐热型肠毒素
纳米金pcr
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Keywords
ETEC
heat-stable enterotoxins
nanogold-assisted pcr
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分类号
S852.612
[农业科学—基础兽医学]
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题名两种新型快速检测猪SP-A基因方法的建立及对比
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作者
马妍妍
彭永刚
宋铭忻
崔尚金
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机构
东北农业大学动物医学学院
哈尔滨兽医研究所
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出处
《黑龙江畜牧兽医》
CAS
北大核心
2014年第6期25-29,共5页
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基金
黑龙江杰出青年基金项目(JC201216)
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文摘
为了研究如何提高SP-A基因表达量的检测效率,试验建立了实时荧光定量PCR法以及纳米金PCR方法,根据猪表面活性蛋白A(SP-A)基因的mRNA序列(NM_214265.1)设计并合成引物及配套TaqMan探针,采用猪SP-A基因CDS区全序列连接pMD-18T载体构建新质粒pMD-SPA为阳性标准品,扩增方程为:Y=-3.375X+40.41,扩增效率为98%,R2达到0.999,Ct值批内变异系数及批间变异系数都小于3%。标准品的Ct值与模板的起始浓度有良好的线性关系,最低检测浓度可达2.53×101copies/μL,沿用上述引物建立了纳米金PCR方法,摸索了该方法的最佳反应条件,并对其灵敏度进行了测定。结果表明:钠米金PCR法亦能扩增得到与试验设计相符的特异性条带,灵敏度与荧光PCR方法相当。
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关键词
SP—A基因
实时荧光定量pcr
TAQMAN探针
纳米金pcr
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Keywords
surfactant protein A ( SP - A) gene
real - time quantitative pcr
TaqMan probe
Nano - gold pcr
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分类号
S82
[农业科学—畜牧学]
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