纳米顺铂对小鼠卵母细胞体外成熟的影响

纳米顺铂通过纳米载体包载顺铂进而发挥抗肿瘤作用,但纳米顺铂在杀死肿瘤细胞的同时,其对动物生殖细胞的影响尚不明确,试验通过在卵母细胞成熟培养液中添加顺铂及纳米顺铂对比了二者对小鼠卵母细胞体外成熟的影响。采集ICR小鼠未成熟卵母细胞并随机分为对照组、顺铂组和纳米顺铂组,体外培养16 h后统计卵母细胞成熟率;并对比卵丘卵母细胞复合体和裸卵经顺铂和纳米顺铂处理后减数分裂进程的差异,以探究颗粒细胞对纳米顺铂影响卵母细胞减数分裂的作用。通过免疫荧光染色检测染色体、纺锤体及肌动蛋白帽的形态变化以确定纳米顺铂对卵母细胞体外成熟过程中细胞骨架的影响。结果显示,顺铂组卵母细胞成熟率显著低于对照组,纳米顺铂组卵母细胞成熟率显著高于高浓度顺铂组,去除颗粒细胞后,纳米顺铂组停滞于GV期卵母细胞比例显著低于高浓度顺铂组。与对照组相比,顺铂组和纳米顺铂组的染色体排列正常率和细胞骨架形态正常率均显著降低,但纳米顺铂组染色体排列正常率显著高于顺铂组,两组之间细胞骨架正常率无显著性差异。结果提示,纳米顺铂通过增加减数分裂的完成性及维持核染色体的正常排布来减弱对小鼠卵母细胞的毒性作用,但不能改善顺铂对卵母细胞骨架的损伤,颗粒细胞能够在一定程度上降低纳米顺铂对卵母细胞减数分裂恢复的抑制作用。

磁性纳米顺铂微球联合磁流体热疗对卵巢癌skov-3细胞增殖、凋亡及侵袭的影响

目的探讨磁性纳米顺铂微球联合磁流体热疗对卵巢癌skov-3细胞增殖、凋亡及侵袭的影响,并探讨其可能的机制。方法将对数生长期的skov-3细胞分为5组,即对照组(只加入培养液)、裸药组(顺铂5μmol/L)、纳米药物组(顺铂5μmol/L+Fe3O4磁性纳米顺铂微球1 g/L)、磁热化组(Fe3O4磁性纳米顺铂微球1 g/L)、磁热组(Fe3O4磁性纳米粒子1 g/L)。对照组、裸药组、纳米药物组细胞处理后均置于培养箱培养24 h,磁热组及磁热化组置于电磁场下培养(磁流体热疗)24 h。采用MTT比色法检测细胞增殖情况,RT-PCR技术检测细胞内CD44v6、基质金属蛋白酶2(MMP-2)mRNA表达水平,Transwell小室实验检测细胞侵袭运动能力,流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果与对照组比较,其余4组细胞抑制率、凋亡率、侵袭抑制率均升高(P均<0.05)。纳米药物组MMP-2、CD44v6mRNA表达量与对照组比较,P均>0.05;磁热组、裸药组、磁热化组中MMP-2、CD44v6mRNA表达量逐渐降低,与对照组比较,P均<0.05或<0.01(磁热化组);纳米药物组、磁热组、裸药组、磁热化组中MMP-2、CD44v6mR-NA表达量组间比较,P均<0.05。结论磁感应加热后磁性纳米顺铂微球对卵巢癌skov3细胞增殖、侵袭的抑制作用及诱导细胞凋亡的作用更强,与其降低MMP-2、CD44v6mRNA表达有关。

微小RNA-21抑制剂联合基于石墨烯量子点负载顺铂纳米药物系统对黑色素瘤细胞凋亡、迁移和侵袭的影响

目的探讨微小RNA(miRNA)-21抑制剂联合基于石墨烯量子点负载顺铂纳米药物系统(GPt)对黑色素瘤细胞凋亡、迁移和侵袭的影响及其机制。方法培养黑色素瘤B16F10细胞,分为对照组、纳米药24 h组、纳米药48 h组、纳米药72 h组,利用四甲基偶氮唑蓝(MTT)筛选出合适的给药剂量和用药时间;然后再分为miRNA-21抑制剂组、纳米药组、miRNA-21抑制剂+纳米药组。采用Transwell实验检测细胞侵袭能力,划痕实验检测细胞迁移能力,流式细胞仪检测细胞周期和凋亡情况,聚合酶链反应(PCR)和蛋白质印迹法(Western blot)检测miRNA-21、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、p53和Bcl-2相关X蛋白(BAX)的表达情况。再通过皮下注射B16F10细胞制备裸鼠黑色素瘤模型,检测各组肿瘤重量。结果筛选出用药作用时间与剂量分别为72 h和5.0μl,miRNA-21抑制剂具有明显的干扰效果,可用于后期实验。与对照组相比,纳米药组和miRNA-21抑制剂组细胞的侵袭能力、迁移能力均下降,G1期细胞比例升高,S期细胞比例下降,凋亡增多,两者联用后效果更明显。miRNA-21抑制剂组和纳米药组的Bcl-2蛋白和mRNA相对表达量均下降,两者联用后下降更加明显,p53、BAX蛋白和mRNA相对表达量均升高,两者联用后升高更加明显。与对照组相比,其他各组小鼠肿瘤重量均下降,并且miRNA-21抑制剂+纳米药组下降最明显。对照组的肿瘤组织中血管分布丰富,肿瘤细胞排列紧密,肿瘤细胞生长活跃,大小相对一致,其他各组肿瘤细胞排列疏松,细胞生长不活跃。结论GPt联合miRNA-21抑制剂能够诱导黑色素瘤细胞发生凋亡,并能抑制细胞的迁移和侵袭能力。

磁性纳米顺铂微粒联合热疗抑制卵巢癌转移相关基因的表达

目的探讨磁性纳米顺铂微粒热化疗抑制卵巢癌skov-3转移相关基因CD44v6、基质金属蛋白酶2(MMP-2)表达的作用。方法取对数生长期的人卵巢癌skov-3细胞株分为阴性对照组、裸药组、纳米药物组、磁热组和磁热化组。处理并体外培养后采用RT-PCR检测各组MMP-2和CD44v6的表达。结果磁热化组CD44v6、MMP-2 mRNA的表达较其余4组有明显降低(P<0.05)。结论在电磁场介导下的磁性纳米顺铂微粒可以显著抑制卵巢癌侵袭转移相关基因CD44v6、MMP-2的表达,可能有抑制卵巢癌的作用。

叶酸-壳聚糖-碳纳米管-顺铂复合物对卵巢癌细胞的体外抑瘤效应

目的探讨叶酸-壳聚糖-碳纳米管-顺铂(cisplatin-carbon nanotube-chitosan-folic acid,DDP-SWCNT-CHI-FA)复合物对人卵巢癌细胞的影响。方法制备DDP-SWCNT-CHI-FA复合物,测定复合物中顺铂的药载浓度;采用MTT法检测药物对卵巢癌细胞的作用;应用Western blot法检测SKOV3/DDP细胞中铜转运蛋白-1(human copper transporter-1,h CTR-1)的表达。结果 SWCNT-CHI-FA和FA-CHI携载顺铂的载药率分别为125.7%和46.08%;顺铂和DDP-SWCNT-CHI-FA对卵巢癌细胞株SKOV3的IC50分别为(8.27±0.39)μg/μl和(5.18±0.83)μg/μl,对其耐药株SKOV3/DDP的IC50分别为(37.43±1.24)μg/μl和(28.23±1.17)μg/μl;SKOV3/DDP细胞中DDP-SWCNT-CHI-FA组的h CTR-1蛋白表达水平较顺铂组低。结论制备的DDP-SWCNT-CHI-FA复合物具有高载药率;可以增强顺铂对卵巢癌顺铂耐药细胞的抑制作用。

新型光化纳米载药系统的构建及其对荷瘤鼠舌鳞癌模型治疗作用研究

目的 本研究合成了一种新型光化联合纳米载药系统,以期为舌鳞癌综合治疗提供新的策略。方法 通过水热合成法及盐酸蚀刻法,制备介孔普鲁士蓝纳米粒子(PBNP’s);用透明质酸-聚乙二醇共聚物(HA-PEG)进行修饰实现肿瘤主动靶向,形成PBNP’s-HA-PEG(简称PH);继而装载顺铂纳米颗粒,完成新型纳米给药体系Nano CDDP/PBNP’ s-HA-PEG(简称NCPH)的制备;随后对该体系粒径分布、靶向性、药物释放性能及光敏特性等进行表征;最后进行体内外抑瘤实验及生物安全性评价。结果 PH粒径在100 nm左右,靶向性良好,光热性能稳定,光照条件下可加快药物释放速度;体内外抑瘤试验结果表明NCPH在一定浓度范围内可以显著抑制体内外肿瘤生长;生物安全性评估发现,该载药系统毒副作用小,耐受性良好。结论 成功制备了新型载药系统NCPH,实现了抗舌鳞癌的光化联合治疗,生物安全性良好。