硼酸抑制纸片扩散试验检测肺炎克雷伯菌中的KPC

目的评估利用硼酸的纸片扩散试验检测肺炎克雷伯菌中肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶(KPC)的效能。方法收集经基因鉴定非重复的36株产KPC肺炎克雷伯菌株;采用琼脂稀释法测定所有菌株对亚胺培南、美罗培南和厄他培南的最低抑菌浓度(MIC)值;聚合酶链反应(PCR)和DNA测序鉴定β-内酰胺酶基因型;使用标准和超过标准的2种测试菌量进行改良Hodge试验(MHT)以检测碳青霉烯酶表型;利用8种抗菌药物纸片含或不含硼酸抑制剂的纸片扩散试验检测KPC表型,以两者抑菌圈直径差值≥5 mm判定阳性结果。结果所有36株产KPC菌株至少对1种碳青霉烯类药物耐药。MHT检测碳青霉烯酶的敏感性和特异性为97.2%和91.0%,增加菌量后的敏感性和特异性为100.0%和87.0%。利用硼酸联合头孢吡肟、亚胺培南或美罗培南的纸片扩散试验检测肺炎克雷伯菌产KPC表型,敏感性和特异性均达到100.0%。结论硼酸联合头孢吡肟、亚胺培南或美罗培南的纸片扩散试验能检测出KPC表型,而且该方法操作简单、结果易读。

纸片扩散试验检测β-内酰胺酶的研究进展

在产酶细菌感染的治疗和预后中，美国临床实验室标准化协会（CLSI）M100－S20文件弱化了细菌产酶机制的检测，而认为细菌最小抑菌浓度（MIC）与临床治疗结局的相关性更好，但是除了参考新修订的抗生素折点外，β内酰胺酶的检测和报告规则不变。该文件作为临床治疗重要的参考依据不容忽视，对于感染的控制及流行病学调查更是至关重要。

重视纸片扩散法药敏试验的主要影响因素

纸片扩散法药敏试验操作简便、结果准确,可在各级医院的细菌室使用,是适合国情的药敏试验方法。我国已经统一操作规程,但因各实验室条件的不同,要特别注意MH琼脂质量、药敏纸片稳定性、菌液浊度、抑菌环边缘不齐等因素影响纸片扩散法药敏试验结果的准确性。

纸片扩散法检测阴沟肠杆菌超广谱β-内酰胺酶的结果评价

目的评价双纸片扩散确证试验检测阴沟肠杆菌超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的可靠性。方法以头孢曲松三维试验为标准,用双纸片扩散确证试验检测阴沟肠杆菌产ESBLs的情况。结果用双纸片扩散确证试验检测为ESBLs阴性的40株阴沟肠杆菌,头孢曲松三维试验检测也均为阴性;双纸片扩散确证试验检测为ESBLs阳性的61株阴沟肠杆菌,用头孢曲松三维试验检测出18株阴性。结论双纸片扩散确证试验检测阴沟肠杆菌的ESBLs敏感性较理想,但易造成假阳性,特异性仅为70.5%。

用纸片扩散法和微量稀释法进行药物敏感性测定的比较

目的探讨纸片扩散法和微量稀释法用于临床常见葡萄球菌和肠杆菌的药物敏感性测定的相关性和一致性,为抗菌药物的选用提供参考依据。方法收集2011年3月至2012年2月临床分离的97株葡萄球菌和86株肠杆菌,用纸片扩散法与微量稀释法对以上临床分离的菌株进行药物敏感性测定,分析两种方法的差异。结果纸片扩散法和微量稀释法对葡萄球菌和肠杆菌药物敏感性测定结果比较,差异均无统计学意义(P<0.05);但个别药物敏感性测定结果不在可接受范围内。结论纸片扩散法和微量稀释法用于微生物药物敏感性测定的一致性较好,应注意个别药物敏感性测定结果不在可接受范围内。

3-氨基苯硼酸纸片法检测大肠埃希菌高产AmpC酶的探讨

AmpC酶又称诱导酶,属于Bush分类中的Ⅰ类酶及分子生物学中的C类酶[1]。AmpC酶多数由染色体介导,部分呈诱导型表达。近年也陆续发现了质粒介导AmpC酶,其耐药基因可在同种或不同种属细菌间广泛传播,使细菌耐药日趋复杂,给临床治疗提出了严峻的挑战,迫切需要临床实验室能快速而准确地检测产AmpC酶的细菌。目前临床实验室标准化委员会（CLSI）尚未确定检测的标准方法,本研究以三维试验和聚合酶链反应（PCR）为参照,

纸片法在检测念珠菌药物敏感性中的应用

目的探讨纸片法在临床念珠菌药敏检测中的应用价值。方法采用法国科玛嘉念珠菌显色培养基和生物梅里埃公司Vitec 32进行念珠菌菌种鉴定,用纸片法进行药物敏感性测定。结果临床感染念珠菌菌种分别为白色念珠菌、光滑念珠菌、热带念珠菌、克柔假丝酵母菌、近平滑假丝酵母菌和急落假丝酵母菌,对两性霉素B、酮康唑、氟康唑、伊曲康唑和氟胞嘧啶5种抗霉菌药,上述念珠菌的耐药率分别为:白色念珠菌:0、0、0、0、1.8%,光滑念珠菌和热带念珠菌均无耐药菌株,克柔假丝酵母菌:33.3%、33.3%、66.7%、33.3%和66.7%,近平滑假丝酵母菌无耐药菌株,皱落假丝酵母菌:100%、0、0、0、0。结论显色培养基鉴定念珠菌具有快速、准确的优点,纸片法具有操作简单、成本较低、结果可靠的优点,在临床念珠菌的鉴定和药敏试验中具有良好的应用前景。

幽门螺杆菌克拉霉素纸片扩散法药敏试验标准化研究

目的 比较纸片扩散法和E-test法检测幽门螺杆菌对克拉霉素的耐药性,并进行纸片扩散法检测的标准化研究.方法 从接受胃镜检查患者的胃黏膜活检样本中分离出44株幽门螺杆菌,用纸片扩散法和E-test法检测菌株对克拉霉素的敏感性,并建立直线回归方程评价两种方法的一致性.结果 采用E-test法,克拉霉素的最小抑菌浓度（MIC）为0.016 ～ 256 μg/mL,菌株对克拉霉素的耐药率为27.3％ （12/44）.采用纸片扩散法,抑菌圈直径是0～ 35 mm,两种方法具有良好的相关性（r2 =0.91,P＜0.01）.根据回归方程,抑菌圈直径≥18 mm表示菌株对克拉霉素敏感,≤15 mm为耐药.根据上述折点,两种检测方法检测的一致率为100％.结论 纸片扩散法与E-test法具有良好的一致性,在临床上可以替代E-test法.

多重耐药鲍曼不动杆菌感染64例病原学特点、耐药情况及危险因素分析

目的了解多重耐药鲍曼不动杆菌感染的病原学特点、耐药性及其感染相关危险因素,为基层医院防控鲍曼不动杆菌的感染提供参考。方法统计分析2016年6月至2018年7月庐江县人民医院64例多重耐药鲍曼不动杆菌和70例一般鲍曼不动杆菌感染病人的基本信息、住院治疗情况、药敏资料等数据。结果 64例多重耐药鲍曼不动杆菌感染病人所患基础疾病主要为颅脑损伤及老年慢性疾病(心、肺、脑血管),恶性肿瘤也占一定比例;标本主要来源为痰液(占96.88%);病人分布科室按构成比从高到低排列依次为ICU、神经外科、呼吸内科;病人病原学标本耐药性监测从低到高依次为头孢哌酮/舒巴坦、阿米卡星,其他药物的耐药率均大于77.19%;危险因素分析显示:侵入性操作是多重耐药鲍曼不动杆菌感染发生的最主要危险因素。结论危重症及老年慢性病并发呼吸系统感染病人是多重耐药鲍曼不动杆菌感染的重点人群;耐药率高;侵袭性操作、昏迷以及广谱抗菌药物应用是多重耐药鲍曼不动杆菌感染的危险因素。

纸片扩散法检测肺癌患者念珠菌药物敏感性的研究

目的：与微量肉汤稀释法比较，评价丹麦ROSCO纸片扩散法在检测肺癌患者念珠菌药物敏感性方面的应用价值，为临床实验室寻找一种简便的念珠菌药物敏感性检测方法。方法采用丹麦ROSCO公司抗真菌药物敏感性纸片和法国生物梅里埃公司ATB FUNGUR2念珠菌药物敏感性板条检测肺癌患者感染的78株常见念珠菌对5-氟胞嘧啶、两性霉素B、氟康唑、伊曲康唑4种抗真菌药物的敏感性。以美国临床实验室标准化委员会（NCCLS）M27-A方案的微量肉汤稀释法为金标准。结果以NCCLS微量肉汤稀释法作为金标准，纸片法检测5-氟胞嘧啶、两性霉素B、氟康唑、伊曲康唑的药物敏感性的κ值达到了0.89，未出现一种方法敏感而另一种方法耐药的严重错误现象。用纸片扩散法对78株念珠菌的药物敏感性进行分析，各菌对5-氟胞嘧啶、两性霉素B敏感度高，分别为88.20%和89.17%，对氟康唑和伊曲康唑敏感度较低，分别为56.34%和52.12%。白色念珠菌和热带念珠菌对四种抗真菌药物的敏感度较高，分别为90.95%、85.71%，而光滑念珠菌和克柔念珠菌的敏感度低，分别为67.50%、41.67%。结论纸片扩散法与微量肉汤稀释法一致性高，在临床实验室可以替代微量肉汤稀释法进行念珠菌的药物敏感性分析。

天津地区志贺菌耐药性及整合子携带调查

目的:了解天津地区志贺菌抗生素耐药性变迁及1、2类整合子携带状况。方法:K-B纸片法测定1981—1983年及2009年天津地区临床分离的57株志贺菌药敏情况。以煮沸法制备细菌总DNA作为PCR扩增模板。PCR方法扩增1、2类整合子整合酶及可变区并测序分析。PCR产物直接测序,结果经BLAST程序与GenBank数据库标准菌株比对分析。结果:1981—1983年组志贺菌对四环素、链霉素、氯霉素及复方新诺明敏感率低,3种及3种以上抗生素多重耐药率为66.67%;2009年组志贺菌对氨苄西林、链霉素、复方新诺明、哌拉西林和四环素敏感率低,3种及3种以上抗生素多重耐药率为83.33%。1981—1983年组1类整合子阳性率为87.88%(29/33),27株可变区含氨基糖苷类药物耐药基因aadA;1株宋内志贺菌可变区含甲氧苄啶耐药基因dfrA17和氨基糖苷类药物耐药基因aadA5;未发现2类整合子阳性株;2009年组1类整合酶阳性率为79.17%(19/24),可变区及3末端扩增均阴性;2类整合子阳性率87.50%(21/24),可变区含dfrA1+sat1+aadA1,介导甲氧苄啶、链丝菌素和链霉素耐药;其中17株1、2类整合酶均阳性。结论:2009年分离的志贺菌抗生素耐药较上世纪80年代分离的志贺菌增强,多重耐药菌株增加。天津地区志贺菌携带1、2类整合子。′

Ampc酶及超广谱β-内酰胺酶的检测分析

目的了解产Ampc酶及超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的革兰氏阴性杆菌的耐药现状,为临床对症用药提供科学依据。方法选用纸片扩散表型筛选试验检测Ampc酶、采用双纸片确诊法检测ESBLs酶。结果在71株革兰氏阴性杆菌中,33株产Ampc酶(46.5%)、6株产ESBLs酶(8.5%)、14株产Ampc酶和ESBLs酶(19.7%)、18株未产Ampc酶和/或ESBLs酶(25.4%);在对18种常规抗生素的药敏试验中,头孢哌酮/舒巴坦的敏感率最高为92.6%;耐药率最高为氨苄青霉素(100.0%)、阿莫西林和阿莫西林/棒酸(99.5%)、头孢噻肟(98.27%)及替卡西林/棒酸(97.1%)。结论临床治疗产Ampc酶和/或ESBL的杆菌,首选的抗生素是SUF。而AM、AML、AMC、CTX和TIM等5种常用抗生素都已出现很高的耐药率,临床应尽可能结合药敏试验合理使用抗生素。

三种方法检测大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌超广谱β-内酰胺酶的效果比较

用纸片扩散初筛试验从 384株大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中筛选出 73株超广谱 β -内酰胺酶 (ESBL)可疑株 ,同时用纸片扩散确证试验、双纸片协同试验和VITEK全自动微生物分析仪进行ESBL测定比较。结果 经确证 32株大肠埃希菌和 19株肺炎克雷伯菌为ESBL阳性株 ,其阳性率分别为 12 .5 %和 2 2 .7%。双纸片协同试验与纸片扩散确证试验对ESBL检测结果较一致 ,而VITEK全自动微生物分析仪则有一定的漏检率。

重症医学科的病原菌分布及抗菌药物耐药性分析

目的分析重症医学科常见病原菌、分布特点及其耐药性,为合理应用抗菌药物提供参考。方法回顾性分析2010年6月至2012年6月重症医学科送检的分泌物、痰液、尿液、血液及脑脊液等标本分离出的菌株,按照美国国家临床实验室标准委员会(NCCLS)的标准进行分析,药敏试验使用纸片扩散法。结果在524株培养阳性的病原菌中,革兰阴性杆菌占67.1%;革兰阳性球菌占20.0%;真菌占12.9%。大肠埃希菌占革兰阴性杆菌中的34.3%;革兰阳性球菌以金黄色葡萄球菌最常见,约占524株中的8.4%;真菌以白色假丝酵母菌为主。革兰阴性杆菌对亚胺培南耐药率最低。结论重症医学科常见病原菌类型主要以革兰阴性杆菌为主,亚胺培南耐药率最低。

儿童血流感染唐菖蒲伯克霍尔德菌的临床特点及其药敏分析

目的探讨儿童血流感染唐菖蒲伯克霍尔德菌(B.gladioli)的临床特点及其药敏分析。方法回顾性分析2015年1月至2016年1月华中科技大学同济医学院附属武汉儿童医院收治的63例血流感染B.gladioli和81例同期非细菌感染性疾病患儿的临床资料,比较两组患儿的C-反应蛋白(CRP)水平、降钙素原(PCT)水平和白细胞(WBC)计数。分离培养B.gladioli,使用Phoenixtm100型全自动微生物鉴定仪进行细菌初步鉴定,并用MALDI-TOP/MS质谱仪进行验证。采用纸片扩散法(Kirby-Bauer法)进行B.gladioli的体外药敏试验。结果感染B.gladioli的患儿主要集中在婴幼儿时期,年龄≤3岁者占82.54%(52/63)。所有患儿均患有严重的基础疾病,主要为支气管炎、肺炎和白血病等。与非细菌感染组比较,感染B.gladioli组患儿的PCT水平、CRP水平和WBC计数均升高,差异均有统计学意义(P均<0.05)。依据铜绿假单胞菌药敏标准,分离的B.gladioli对阿米卡星、庆大霉素、四环素、米诺环素、复方新诺明、环丙沙星、左氧氟沙星、亚胺培南、美罗培南、头孢吡肟、哌拉西林、哌拉西林/他唑巴坦和头孢哌酮/舒巴坦高度敏感,对氯霉素低度耐药,对头孢他啶、氨曲南高度耐药。结论感染B.gladioli的患者常为年龄≤3岁、免疫力低下、抵抗力差的患儿。血培养及CRP水平、PCT水平和WBC计数可作为疾病转归的判断指标。哌拉西林/他唑巴坦、头孢哌酮/舒巴坦是儿童感染B.gladioli的首选治疗药物。

荧光聚合酶链反应检测在耐甲氧西林金黄色葡萄球菌检测中的应用

目的探讨荧光聚合酶链反应(PCR)检测在耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)检测中的应用。方法收集上海市监狱总医院肺部感染患者的痰液标本,共3768份,分别进行PCR、纸片扩散抗菌试验、琼脂稀释法检测。结果采用一般细菌培养分离鉴定与荧光PCR检测均检出103例金黄色葡萄球菌,阳性率2.7%。采用纸片扩散抗菌试验检测,检出57株MRSA阳性;采用琼脂稀释法检测,检出58株MRSA阳性。采用荧光PCR检测,有58株MecA基因扩增呈阳性。结论荧光PCR检测具有快速、简易、稳定、敏感性强、特异性高的特点,可用于MRSA的快速鉴定。

187株洋葱伯克霍尔德菌的临床分布及对抗生素的耐药性

目的了解洋葱伯克霍尔德菌在临床的分布与耐药特征,指导临床更加合理使用抗菌药物。方法使用法国生物梅里埃API20NE系统对菌株进行鉴定,采用药物敏感性纸片琼脂扩散(K-B)法和微量肉汤稀释法进行药敏试验。结果 187株洋葱伯克霍尔德茵临床标本来源以痰液为主,占80.2%。其对复方磺胺甲恶唑、米诺环素、氯霉素、哌拉西林/他唑巴坦、头孢他啶、美罗培南的耐药率较低,分别为4.3%、14.4%、19.8%、26.2%、34.6%、27.3%,而对亚胺培南、氨苄西林/舒巴坦、阿米卡星、庆大霉素、妥布霉素、黏菌素、头孢唑林、阿莫西林/克拉维酸的耐药率在95.0%以上。结论洋葱伯克霍尔德菌引起的感染以呼吸道为主,对临床常用的多种抗生素有极高的耐药性,应积极开展病原学检查,指导临床合理使用抗菌药物。

白及二氢菲类化合物对临床常见病原菌作用的研究

目的探讨白及二氢菲类化合物对临床常见病原菌的作用,为白及药理活性成分的临床应用提供实验依据。方法实验以琼脂稀释法测定不同白及组织的二氢菲类化合物(Dihydrophenanthropyrans,Dihs)对金黄色葡萄球菌等6种常见病原菌及标准菌株的体外最低抑菌浓度(MIC),常见病原菌均采自同一科室的临床菌株,实验时间从2017年5月至2018年5月。接着将菌株接种到Dihs浓度为MIC的培养基及对照培养基上,共培养48 h进行抗生素药敏试验,然后测量抑菌圈直径,结合菌斑图,判断Dihs对临床菌株及抗生素的药理作用。结果白及Dihs具有抑制临床病原菌生长的作用,且不同材料的Dihs对菌株的MIC值影响不尽相同,其中悬浮细胞组织中的Dihs对金黄色葡萄球菌的MIC值相对于其他白及组织最小,为(0.58±0.23)mg/mL。同时,Dihs有增强病原菌对抗生素敏感性的作用,但是对某些抗生素Dihs也有降低病原菌对抗生素的敏感性的作用,其中,Dihs增强白假丝酵母菌对抗生素敏感性作用较大,抑菌圈直径平均增加了(4.4±0.3)mm。进一步从实验结果还可以发现,白及Dihs具有逆转某些病原菌耐药性的作用。结论白及二氢菲类化合物对临床常见病原菌具有抑制作用和逆转耐药性的作用。本研究为白及的药理学研究提供了基础数据的参考,也为江油地区白及的抑菌等活性成分的利用和临床新型抗生素的研究提供理论依据。

VITEK2-COMPACT全自动微生物分析仪的正确度验证

目的验证VITEK2-Compact全自动微生物分析系统鉴定和药物敏感性试验的正确度。方法用纸片扩散(K-B)法和细菌鉴定仪(ATB)鉴定系统作为评价VITEK2-Compact全自动微生物分析系统药物敏感性试验和鉴定的参考方法,14株已知室间质评菌株和19株临床菌株分别用VITEK2-Compact和参考方法鉴定和药物敏感性试验,并对结果做统计学分析。结果 VITEK2-Compact鉴定与所选定ATB参考鉴定方法比较,符合率为100.00%。药敏卡与K-B法结果标准符合率为96.90%:一般错误率为2.35%,严重错误率为0.75%,重大错误率为0.00%。结论 VITEK 2-Compact全自动微生物分析系统的正确度能满足临床要求,可应用于临床微生物实验室临床标本的细菌鉴定及药敏试验。

ATBG-5肠杆菌药敏条对超广谱β-内酰胺酶的检测分析

目的了解ATB Expression全自动微生物鉴定药敏分析仪检测大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、产酸克雷伯菌和胸水培养中分离的奇异变形杆菌产超广谱β-内酰胺酶的可靠性。方法同时应用CLSI推荐的纸片扩散确证法和ATB Expression全自动微生物鉴定药敏分析仪对临床标本分离的140株大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、产酸克雷伯菌和胸水培养中分离的奇异变形杆菌进行ESBLs检测。结果仪器法、确证法检测ESBLs菌株阳性率分别为39.2%、37.9%;仪器法检测ESLBs的灵敏度和特异性分别为98.2%、100%。结论 ATB Expression ATBG-5肠杆菌药敏条分析是检测ESBLs准确快速的检测方法,ATB Expression全自动微生物鉴定药敏分析仪高级专家系统的ESLBs判定结果准确可靠。