共生菌Hebeloma sp.的线形质粒DNA的分子克隆及测序的研究

共生担子菌滑菇 H ebeloma circinas携带两个线形的染色体外 DNA分子 .全部的菌丝 DNA经蛋白酶 K处理后 ,通过琼脂凝胶电泳观察到 :在染色体 DNA旁有两个大小不等的 DNA带 ,命名为 p HCl和 p HC2 ,其分子量分别为 1 0 .3kb和 9.1 kb.用核酸外切酶处理 p HC DNA,确认其 5′端被保护 .对 p HC2用不同的内切酶处理并确定其内切酶图谱 ,对其 3.2 kb H ind 片段进行克隆 ,亚克隆和测序 .结果表明 :其片段有两个开读框 ( open reading frames) ,携带类似于病毒 B型的DNA和 RNA多聚酶基因编码 .p HC2为该菌携带的一个典型的线形质粒 ,这也是首次在共生担子菌中发现的线形质粒 .

黄瓜线粒体线形类质粒pC4的核酸序列和性质

津研四号黄瓜线粒体中除了主环DNA外, 还有4种类质粒(pC1, pC2, pC3, pC4). 电子显微镜观察结果表明pC4为线形类质粒. 将pC4克隆至E. coli JM109中, 对pC4进行序列测定和分析. pC4全长370 bp, 是已知的植物线粒体类质粒中最短的. pC4富含AT, 有多个正向和反向重复序列, 其两端为 35 bp的正向重复序列. pC4中的ORF都较短, 不足以编码有功能的蛋白. 对pC4进行同源性检测, 发现pC4与线粒体主DNA和叶绿体DNA缺乏同源性, 而与核DNA有同源性. 在其他没有线粒体类质粒的黄瓜品种核基因组中也存在pC4的同源序列, pC4与黄瓜不同品种核基因组的杂交带型有一定差别.