线性探针法检测云南地区结核分枝杆菌耐药的应用评价

目的评价线性探针法的检测效能,探讨云南地区耐药结核分枝杆菌的基因突变规律。方法采集云南地区肺结核患者的407份涂阳痰标本,采用线性探针法进行耐药性检测,同时采用比例法药敏试验作为对照。结果线性探针法检测异烟肼(INH)耐药的敏感性为71.84%,特异性为97.29%;检测利福平(RFP)耐药的敏感性为88.36%,特异性为94.38%;检测耐多药(MDR)的敏感性为67.46%,特异性为94.54%,阳性预测值为87.63%,阴性预测值为86.24%。传统药敏试验与线性探针法均显示INH耐药的125株菌中kat G 315位点发生突变的有116株(92.80%),inh A发生突变的有14株(11.20%),同时发生kat G 315和inh A突变的有5株(4.00%)。RFP耐药菌株中,rpo B基因突变频率从高到低依次是531或533位(59.69%)、526位(25.58%)、516位(8.53%)。结论云南地区耐药结核分枝杆菌的基因突变有自己的特点。线性探针法对结核分枝杆菌进行耐药性检测具有较高的敏感性、特异性。在耐药率较高的定点医院和耐药高危人群中,线性探针法检测MDR具有较高的阳性预测值和阴性预测值,其结果具有较好的参考价值。

反向线性探针杂交技术检测慢性乙型肝炎病毒拉米夫定耐药研究

目的:建立起简单、快速、灵敏、准确的慢性乙型肝炎病毒拉米夫定耐药位点的反向线性探针(reverse lineprobe,RLP)检测方法.方法:根据HBV野生及耐药基因序列设计通用探针、3’、5’对称加有poly-C的特异性探针和5’标记生物素的扩增引物.将探针线性固定在硝酸纤维膜上,使HBV PCR扩增产物与探针进行杂交.通过优化杂交条件,建立RLP检测方法.利用该方法对重庆地区86个慢性乙肝病人进行检测,同时与直接测序结果比较.结果:半巢式PCR可对103拷贝/ml的血清样本进行有效特异扩增,新建的RLP检测方法可对PCR扩增产物在1ng/ml以上,或血清样本中突变型DNA占野生型DNA比例为5%以上的均可有效检测,86例临床的检测灵敏度为100%,野生型和耐药型的检测准确性分别为98.09%(103/105)、100%(43/43),与直接测序法比,RLP检测野生与耐药混合型准确性更好.结论:反向线性探针杂交检测方法检测HBV拉米夫定耐药位点方便、灵敏、准确,是HBV拉米夫定治疗有效的监控工具,该方法适合临床应用.

微透析与高效液相色谱在线联用技术校正大鼠皮下阿魏酸线性探针

采用微透析与高效液相在线联用技术(MD-HPLC on-line)建立并验证大鼠皮下阿魏酸微透析线性探针体内外校正方法。以磷酸盐缓冲溶液为灌流液,微透析灌注液流速为2μL/min,10孔自动进样阀间隔为8 min,在以Hypersil-C18(250 mm×4.6 mm,5μm)为色谱柱,流动相为甲醇-水(含0.5%乙酸)(35∶65,V/V),流速1 mL/min,检测波长314 nm的HPLC色谱条件下进行在线检测,阿魏酸在0.1～80 mg/L范围内回归方程线性关系良好,A=159044C-2607(r=1),阿魏酸日内精密度RSD分别为0.8%,0.3%和0.5%(n=5);日间精密度RSD分别为0.2%,0.3%和0.4%(n=5),重现性与稳定性RSD分别为0.7%和1.1%(n=5)。增量法和减量法测定阿魏酸线性探针体内外回收率分别为47.23%±0.94%和20.37%±1.37%,阿魏酸适宜进行微透析实验。应用MD-HPLC on-line对中药当归阿魏酸进行测定,使取样、进样和分析监测同时进行。

分子线性探针技术在检测脊柱标本中结核分枝杆菌及其耐药性中的应用价值

目的 :评估分子线性探针技术(HAIN)应用于检测脊柱标本中的结核分枝杆菌(MTB)及其耐药性的临床价值。方法:回顾性分析首都医科大学附属北京胸科医院骨科2015年6月~2016年12月收治的脊柱感染的患者235例,其中男132例,女103例,年龄1~84岁,平均42.8±18.1岁,根据伽马干扰素释放试验、标本普通细菌培养和真菌培养结果进行分组,脊柱结核(结核组)219例,脊柱感染其他细菌或真菌(非结核组)16例,通过穿刺或手术获取脓液或组织标本(含肉芽组织、干酪样坏死物和骨质),然后在2h内采用HAIN技术和联合培养法对相同标本进行MTB检测,并进行抗结核药物的敏感性试验。比较两种方法检测MTB的敏感度和特异度,以及检测利福平耐药、异烟肼耐药和耐多药的敏感度和特异度。结果:HAIN和联合培养法检测MTB结果为阳性的分别有120例和104例。HAIN和联合培养法检测MTB的敏感度分别为54.8%和47.5%,特异度均为100%。HAIN在MTB培养阳性标本和培养阴性标本中的阳性率分别为63.5%、47.0%,两组的阳性率的差异有统计学意义(χ~2=6.006,P<0.05)。HAIN检测利福平耐药、异烟肼耐药和耐多药的敏感度分别为87.5%、66.7%和85.7%,特异度分别为94.8%、86.0%和93.2%,一致性检验Kappa值分别为0.743(P<0.001)、0.427(P<0.001)和0.664(P<0.001)。结论:HAIN在检测脊柱结核中的结核分枝杆菌及其利福平耐药和异烟肼耐药中展现出了高敏感度和特异度的技术特点,具有良好的临床应用前景。

分子线性探针杂交法在结核分枝杆菌耐药性快速检测中的应用价值

目的探讨分子线性探针杂交法在快速检测结核分枝杆菌耐药性中的效果。方法选择新乡医学院第一附属医院住院治疗的结核患者的临床标本750例,其中结核分枝杆菌临床分离株190例,痰涂片阳性标本560例。所有临床标本分别采用传统方法及分子线性探针杂交法进行检测,对2种方法检测的异烟肼(INH)和利福平(RFP)的耐药结果进行比较,采用分子线性探针杂交法对耐药菌株进行基因分型,分析INH及RFP耐药相关突变位点情况。结果传统方法检测中,560例痰涂片阳性标本中共检测出结核分枝杆菌454例,其对INH、RFP耐药率分别为15.0%(68/454)、17.8%(81/454),190例结核分枝杆菌临床分离株对INH、RFP的耐药率分别为26.8%(51/190)、18.4%(35/190);传统方法检测的结核分枝杆菌对INH、RFP的耐药率分别为18.5%(119/644)、18.0%(116/644)。分子线性探针杂交法检测454例结核分枝杆菌对INH、RFP的耐药率分别为14.1%(64/454)、17.6%(80/454),190例结核分枝杆菌临床分离株对INH、RFP的耐药率分别为23.2%(44/190)、16.3%(31/190);分子线性探针杂交法检测的对INH、RFP的总耐药率分别为16.8%(108/644)、17.2%(111/644)。2种方法检出的结核分枝杆菌对INH、RFP的耐药率比较差异无统计学意义(INH:χ~2=0.140、0.691、0.650;RFP:χ~2=0.011、0.293、0.131;P>0.05)。分子线性探针杂交法检测中,对INH和RFP的灵敏度、特异度分别为85.7%、98.9%和90.5%、98.9%,其中kat G-S315T1为INH耐药主要突变位点,约占88.9%,rpo B-S531L为RFP耐药主要突变位点,约占81.1%。结论分子线性探针杂交法能够快速检测出结核菌株和痰标本中结核分枝杆菌的耐药性,并能对耐药基因进行分型,减少药物敏感性试验的时间,并能根据药物敏感性结果尽快采取有效的治疗方案。

反向线性探针杂交在检测实验动物沙门菌中的研究

目的建立简便、快速、准确、灵敏、特异的沙门菌检测方法。方法根据沙门菌argT基因序列设计通用引物和3'、5'均加有polyC的特异性探针。上游引物5'标记生物素,将探针线性固定在硝酸纤维素膜上,使沙门菌PCR扩增产物与探针进行杂交,通过优化杂交条件,建立反向线性探针杂交检测方法。利用该方法对重庆地区74只实验动物进行检测,同时与传统分离培养方法比较。结果反向线性探针杂交方法灵敏度高,对沙门菌PCR扩增产物在3ng/μL以上可有效检测。从细菌分离培养及DNA提取到PCR扩增及反向杂交结束仅需27h。该检测方法特异性高,对6种非沙门菌的检测中,其特异性为100%。应用传统分离培养方法和反向线性探针杂交方法分别检测42只KM小鼠和32只SD大鼠,两种方法检测结果一致性为100%。结论反向线性探针杂交检测方法,具有快速、可靠、敏感和特异的特点,可用于沙门菌感染时的检测,适合应用于实验动物沙门菌的监测。

应用线性探针技术(HAIN)对临床结核菌分离株进行快速耐药性分析

目的探讨线性探针技术(Hain GenoTypeMTBDR plus,HAIN)检测肺结核菌株耐药性的可行性。方法应用HAIN技术,对200株临床结核菌分离株进行利福平(RIF)和异烟肼(INH)药物敏感性快速检测,并与传统药敏比例法进行比较。结果以HAIN技术、传统药敏比例法检测200株临床分离株,RIF耐药率、INH耐药率和耐多药率差异均无统计学意义(P值均>0.05)。以传统药敏比例法为金标准,HAIN技术检测RIF耐药率灵敏度、特异度分别为93.3%、99.4%,检测INH耐药率灵敏度、特异度分别为86.6%、98.9%,耐多药率灵敏度、特异度分别为84.6%、100.0%。以Kappa一致性检验评价,两种方法对RIF、INH耐药率和耐多药率u系数分别为0.92、0.85、0.91。结论 HAIN技术检测临床结核菌分离株RIF、INH耐药率和耐多药率结果与传统药敏比例法一致性较高,适用于临床耐药结核的快速筛查。

线性探针技术在耐多药结核病诊断中的应用评价

目的评价线性探针技术诊断临床耐多药结核病（MDR-TB）的价值。方法收集临床分离的结核分枝杆菌菌株268例,采用比例法药敏试验和线性探针技术检测利福平和异烟肼的耐药性,以比例法药敏试验为金标准,分析线性探针方法检测的敏感度、特异度。结果与比例法药敏试验相比,线性探针技术检测耐利福平敏感度为88.89%,特异度为98.05%,耐药检出率差异无统计学意义（χ^2=0.82,P〉0.05）;耐异烟肼敏感度为84.61%,特异度为97.69%,耐药检出率差异无统计学意义（χ^2=0.69,P〉0.05）;诊断MDR-TB的敏感度为78.26%,特异度为96.85%,耐多药检出率差异无统计学意义（χ^2=0.53,P〉0.05）。结论线性探针技术敏感度和特异度高,可用于MDR-TB的早期诊断。

线性探针技术和传统基因检测技术在耐药结核病诊断中的可靠性和及时性对比

目的探讨线性探针(MTBDR plus)技术和传统基因检测技术在耐药结核病诊断中的可靠性和及时性。方法同时采用MTBDR plus技术、核酸扩增检测技术和传统药敏实验方法对2014年1月至10月期间我院收治的246例涂阳肺结核患者的痰标本进行利福平和异烟肼耐药性的检测。以传统药敏实验检测结果为金标准,分析MTBDR plus技术和核酸扩增检测技术诊断耐药结核病的准确性,并比较MTBDR plus技术和核酸扩增出报告时间。结果 MTBDR plus技术检测所得利福平耐药结核病发生率、异烟肼耐药结核病发生率和耐多药结核病发生率分别为5.28%、7.32%和3.66%,和传统药敏实验检测所得的5.69%、6.91%和3.66%比较差异均无统计学意义(P>0.05)。核酸扩增检测技术检测所得利福平耐药结核病发生率、异烟肼耐药结核病发生率和耐多药结核病发生率则均低于传统药敏实验检测所得结果,差异有统计学意义(P<0.05)。MTBDR plus技术检测利福平耐药、异烟肼耐药和耐多药的敏感度、Kappa值均高于核酸扩增检测技术,差异有统计学意义(P<0.05)。MTBDR plus技术平均出报告时间为(1.26±0.58)d,显著低于核酸扩增的时间(8.89±1.08)d,差异有统计学意义(P<0.05)。结论线性探针技术较传统基因检测技术可更及时、准确地诊断耐药结核病。

线性探针技术快速检测耐药结核分枝杆菌的应用评价

目的评价线性探针技术(Geno-Type~?MTBDRplus)检测结核分枝杆菌耐药性的可靠性和及时性。方法用线性探针技术对240株结核分枝杆菌进行利福平、异烟肼耐药性检测,以比例法药敏试验作为金标准,比较线性探针法与比例法药敏试验耐药结果的符合程度,评价其准确性和应用价值,同时比较二者检测报告时间。结果与比例法相比较,线性探针技术检测异烟肼敏感性96.8%,特异性95.3%;阳性预测值97.4%,阴性预测值94.3%;检测利福平敏感性95.8%,特异性91.8%;阳性预测值94.4%,阴性预测值93.4%。比例法检出耐多药88例,检出率为36.7%,线性探针法检出耐多药87例,检出率36.3%,一致率为98.9%,检测耐多药的敏感度98.9%,特异性100%;阳性预测值100%,阴性预测值99.3%,两种方法检出率差异无统计学意义(校正x^2=0.0000,P=1.0000)。结论线性探针技术检测利福平、异烟肼耐药性与比例法具有高度一致性,有较高的敏感性和特异性,而且操作简便、结果准确,报告时间短,可以作为地市级快速检测结核分枝杆菌耐药性的方法。

线性探针法用于分枝杆菌菌种快速鉴定的应用研究

目的探讨线性探针法用于分枝杆菌菌种快速鉴定的可行性和应用价值。方法收集2017年1月至2018年12月深圳市慢性病防治中心、光明区人民医院和盐田区人民医院登记疑似结核病患者的分枝杆菌阳性培养物3420份。经GenoType MTBDRplus结核分枝杆菌耐药检测试剂盒初筛和剔除患者的重复样本后,筛选出127株非结核分枝杆菌(NTM)进行菌种鉴定。采用线性探针法和PCR基因测序法(16S rRNA和ITS)对NTM菌株进行菌种鉴定,并以测序结果为菌种鉴定的“金标准”。结果127株NTM的菌种分布为:脓肿分枝杆菌47株(37.0%),偶发分枝杆菌20株(15.8%),胞内分枝杆菌18株(14.2%),戈登分枝杆菌11株(8.7%),堪萨斯分枝杆菌8株(6.3%),鸟-胞内分枝杆菌复合群7株(5.5%),慢生黄分枝杆菌6株(4.7%),奇美拉分枝杆菌2株(1.6%),龟分枝杆菌1株(0.8%),蟾分枝杆菌1株(0.8%),瘰疬分枝杆菌1株(0.8%),外来分枝杆菌1株(0.8%),土分枝杆菌1株(0.8%),美容品分枝杆菌1株(0.8%),熊本分枝杆菌1株(0.8%)和富养二氧分枝杆菌1株(0.8%)。与PCR相比,线性探针法对127株NTM全部检出,其中112株(112/127,88.2%)能准确鉴定到菌种,2株(2/127,1.6%)不能区分为瘰疬/胞内分枝杆菌,12株(12/127,9.4%)超出试剂盒鉴定范围,1株外来分枝杆(1/127,0.8%)鉴定错误。结论线性探针法可以快速、准确地鉴定常见的分枝杆菌菌种,但菌种鉴定范围有限,不能完全满足临床菌种鉴定的需求。

线性探针联合HPLC研究六锐胶囊中没食子酸的眼部药代动力学

目的建立线性探针联合高效液相色谱(HPLC)测量兔前房没食子酸的方法,探讨六锐胶囊中没食子酸的眼部药代动力学参数。方法 6只新西兰大白兔前房植入微透析线性探针(CMA402),灌胃给予六锐胶囊(20 ml/kg)。以乙腈和0.1%醋酸水为流动相梯度洗脱,283 nm检测没食子酸浓度,DAS 2.0分析没食子酸的药代动力学参数。结果没食子酸检测限为0.67μg/ml,定量限为1.34μg/ml,在1.34~20.13μg/ml间线性关系良好,精密度和稳定性的相对标准差(RSD)分别为0.77%和2.21%,体内回收率为50.78%。没食子酸前房药代动力学符合二室模型,生物半衰期为54 min,达到最大浓度时间为80 min。结论采用线性探针联合HPLC实时测量兔眼没食子酸前房浓度准确可靠;六锐胶囊中的没食子酸可以进入兔眼前房,其药代动力学符合二室模型特征。

运用线性探针技术快速检测耐多糖结核分枝杆菌的效果评价

目的评估线性探针技术快速检测耐多药结核分枝杆菌的效果。方法选取317例结核分枝杆菌分离株分别进行MGIT960液体药物敏感性试验和线性探针快速检测,以液体法作为金标准,探讨线性探针检测技术的敏感性和特异性以及Kappa值。结果 317株结核分枝杆菌复合群样本分别进行MGIT960液体药物敏感性试验和线性探针快速检测,其中液体法利福平(RFP)耐药率为5.5%,异烟肼耐药率为11.5%,耐多药(MDR)患者检出率为4.7%;线性探针快速检测法利福平(RFP)耐药率为7.4%,异烟肼耐药率为11.7%,MDR检出率为5.7%。以液体法为金标准,线性探针检测技术检测利福平和异烟肼的敏感性和特异性分别为94.3%、97.7%和86.3%、98.0%。结论线性探针检测技术是一个敏感、特异和快速的诊断M DR的有效方法。

基因芯片法与线性探针法对痰标本中结核分枝杆菌检测的应用价值

目的探讨基因芯片法与线性探针法检测痰标本中结核分枝杆菌(MTB)的应用价值。方法海南医学院第二附属医院2018年3—7月门诊和住院的106例疑似肺结核患者纳入研究,采用基因芯片法、线性探针法对患者送检的痰进行检测,并与改良罗氏培养法进行比较;以比例法药敏试验为金标准,分析上述两种方法检测利福平和异烟肼耐药性的效能。结果对106份痰标本进行改良罗氏培养,阳性率为52.83%(56/106),经鉴定其中46份标本为MTB阳性。基因芯片法和线性探针法分别检出MTB46、53株,基因芯片法、线性探针法与改良罗氏培养法检测MTB结果比较,差异均无统计学意义(均P>0.05)。基因芯片法、线性探针法与比例法检测MTB对利福平的耐药性比较,差异均无统计学意义,且具有较好一致性(均P>0.05,均Kappa>0.75)。对利福平的耐药性检测,基因芯片法的灵敏度、特异度分别为84.62%、90.00%,线性探针法分别为84.62%、85.00%。基因芯片法、线性探针法与比例法检测MTB对异烟肼的耐药性比较,差异均无统计学意义,但一致性一般(均P>0.05、均Kappa<0.75)。对异烟肼的耐药性检测,基因芯片法的灵敏度、特异度分别为69.23%(18/26)、95.00%(19/20),线性探针法分别为65.38%(17/26)、85.00%(17/20)。结论基因芯片法和线性探针法均可准确、快速地从大部分疑似结核病患者的痰标本中鉴定出MTB,也适用于利福平和异烟肼耐药结果的快速检测,从而指导临床用药,值得临床推广。

线性探针技术诊断耐多药结核病的临床应用价值研究

目的探讨线性探针技术诊断耐多药结核病的临床应用价值。方法选取2017年1月至2019年2月在该院就诊的247例涂阳结核病患者为研究对象,采集晨起痰标本后3 d内依次完成药敏试验和线性探针技术检测,以药敏试验检测结果作为诊断的“金标准”,应用灵敏度、特异度、准确性和约登指数评价线性探针技术的诊断价值。结果线性探针技术对异烟肼耐药性(53例,21.46%)、利福平耐药性(60例,24.29%)及耐多药结核病(50例,20.24%)的检出率与传统药敏试验比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。线性探针技术对异烟肼耐药性、利福平耐药性及耐多药结核病检测的灵敏度(88.89%、88.52%、84.62%)、特异度(97.41%、96.77%、96.92%)、准确性(95.55%、94.74%、94.33%)及约登指数(0.863、0.853、0.815)均较高。结论线性探针技术对耐多药结核病检测的灵敏度、特异度及准确性均较高,且检测所需时间短,对于耐多药结核病的早期诊断具有重要意义。

基因芯片法和线性探针法在HCV基因分型的应用比较

目的 评价基因芯片技术在丙型肝炎病毒 (HCV)基因分型中的临床应用价值。方法 对HCVRNA阳性血清用基因芯片法和线性探针法进行基因分型。结果 基因芯片法和线性探针法的符合率是 10 0 %。结论 基因芯片法的准确率与国外第二代线性探针法试剂盒相同 ,而操作简单 ,特别是能准确地检出HCV混合感染 ,具有良好的应用前景。

线性探针技术用于快速筛查耐多药结核病的研究

目的评价线性探针技术(LPA)快速筛查临床耐多药结核病人的效能。方法应用病例对照研究方法,连续收集326例临床涂阳病人的痰标本,进行传统比例法药物敏感性试验和线性探针技术检测利福平(RFP)和异烟肼(INH)的耐药性,分析线性探针方法对诊断耐多药结核病的敏感度和特异度。结果以比例法为参照,线性探针技术诊断耐多药结核病的敏感度为70%,特异度为97%,结果无显著性差异,报告结果时间为20d,明显低于传统药敏试验报告时间。结论线性探针耐多药检测技术特异性高,快速便捷,可以用于临床耐多药结核病诊断。

线性探针技术在贵州地区耐药结核病诊断中的应用价值

结核病是全球严重的公共卫生问题之一,据世界卫生组织（WHO）报告[1],每年有约145万人死于该病。我国近年来结核病的发病率也日趋上升,现已有结核病人450万例,且每年病死13万例。其中耐多药结核病是我国现阶段结核病防控工作面临的最大挑战之一[2]。

线性探针技术诊断HIV/结核分枝杆菌感染者结核菌耐药性效能评价

目的评价线性探针技术(line-probe assay, LipA)检测HIV/结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis, MTB)感染者耐药结核菌的效能,并探讨耐药结核菌基因突变特征。方法采用LipA和药物敏感(药敏)试验绝对浓度法检测HIV/MTB感染者涂阳痰标本和临床分离株中MTB对利福平(rifampicin, RFP)及异烟肼(isoniazid, INH)的耐药性,以药敏试验结果为标准评价LipA的检测效能,统计耐药MTB基因突变型。结果 LipA对涂阳痰标本和临床分离株中MTB耐RFP的检测结果与药敏试验结果完全一致,对耐INH的检测结果与药敏试验结果比较,kappa=0.969(P <0.05),耐RFP株及耐INH株的主要基因突变位点分别是rpoB S531L(80.00%)和katG 315(82.76%)。结论 LipA检测HIV/MTB感染者MTB耐RFP和INH的诊断与药敏试验结果一致,主要基因突变位点与结核病总体人群相似,适用于HIV/MTB感染者耐多药结核病的快速筛查。

应用线性探针杂交技术快速检测结核分枝杆菌的多药耐药性

目的:评价线性探针杂交技术(HAIN技术,Geno Type MTBDR plus试剂盒)快速检测结核分枝杆菌多药耐药性的价值。方法:利用HAIN技术检测277例涂阳患者痰标本,并与比例法药敏试验作比较。结果:HAIN技术对肺结核患者耐多药的检出率和传统比例法药敏试验相比无显著差异(P>0.05)。HAIN技术检测耐利福平、耐异烟肼和耐多药结核的灵敏度、特异性分别为100%、81.69%、80.77%和100%、93.90%、95.74%。利福平耐药基因突变频率最高的是rpo B S531L位点[35/60(58.33%)];异烟肼耐药基因最常见的突变是kat G S315 T1位点[42/71(59.15%)],其次是inh A c15t位点[23/71(32.39%)]。结论:HAIN技术能快速、准确诊断结核分枝杆菌利福平、异烟肼的耐药性及多药耐药性。