斑节对虾线性病毒调查初报

斑节对虾线性病毒调查初报张河坚李文武张建群（皇岗动植物检疫局深圳５１８０４５）１９９７年４月，我们在汕尾市某育苗场检查一批进口斑节对虾亲虾时，发现一种线性病毒。据查阅国内外有关虾病资料，证实为首次在对虾体内检出线性病毒［１，２，３，４］。现将调查结...

血清HBcrAg、线性化HBsAg对隐匿性乙型肝炎的诊断价值

目的探讨血清乙肝病毒核心相关抗原(HBcr Ag)及线性化乙型肝炎病毒表面抗原(HBs Ag)对隐匿性乙型肝炎(OBI)的诊断价值。方法选择OBI患者63例(OBI组)、体检健康者150例(对照组),采用化学发光酶联免疫分析法检测两组血清HBcr Ag、线性化HBs Ag,采用荧光定量PCR法检测血清HBV DNA。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析HBcr Ag、线性化HBs Ag二者单独及联合检测对OBI的诊断效能。结果 OBI组和对照组血清HBcr Ag阳性率分别为90.5%和10.7%,线性化HBs Ag阳性率分别为42.9%和6.0%,两组比较差异均有统计学意义( χ~2分别为125.5、42.9,P均<0.05)。相关分析显示,HBV DNA与HBcr Ag、HBV DNA、线性化HBs Ag均呈正相关(R2分别为0.471 4、0.122 2、0.086 8,P<0.05或<0.01)。ROC曲线分析显示,血清HBcr Ag、线性化HBs Ag诊断OBI的曲线下面积(AUC)分别为0.911(95%CI为0.864~0.946)、0.683(95%CI为0.616~0.745),二者联合检测诊断OBI的AUC为0.895(95%CI为0.846~0.933),血清HBcr Ag对OBI的诊断效能显著优于线性化HBs Ag(Z=6.134,P<0.05),二者联合检测并不能提高其对OBI的诊断效能(Z=0.657,P>0.05)。当血清HBcr Ag、线性化HBs Ag的最佳临界值分别为100 U/m L、0.48 IU/m L时,血清HBcr Ag诊断OBI的敏感性显著高于线性化HBs Ag( χ~2=121.4,P<0.05),特异性稍低于线性化HBs Ag( χ~2=3.034,P>0.05),二者联合检测诊断OBI的敏感性和特异性较单独检测HBcr Ag并未明显提高( χ~2分别为1.322、3.802,P均>0.05)。结论血清HBcr Ag与HBV DNA存在良好的相关性,对OBI的诊断效能优于线性化HBs Ag,但联合检测HBcr Ag、线性化HBs Ag并不能提高其诊断效能;血清HBcr Ag可单独作为诊断OBI的血清学指标。

一种快速稳定构建重组杆状病毒的方法

快速稳定地将外源基因插入杆状病毒基因组获得重组杆状病毒,是提高昆虫杆状病毒表达系统应用效率的关键技术之一。在Ac Bacmid的基础上,通过λRed同源重组技术敲除病毒基因组lef2和orf1629基因的3＇端部分序列获得RDAc Bacmid-DualKo,并用Bsu36Ⅰ线性化之后,经重叠PCR获得5＇端和3＇端各含有50 bp同源臂及以绿色荧光蛋白（GFP）基因作为外源基因的表达盒片段,再将线性化杆状病毒载体片段与表达盒片段共转染sf9细胞,3~4 d即可获得重组杆状病毒rvAcBacmid-GFP。SDS-PAGE和Western blot结果表明,被rvAcBacmid-GFP感染的sf9细胞能高效表达绿色荧光蛋白。该方法通过线性化复制缺陷型杆状病毒载体和携带有同源臂及外源基因的重叠PCR片段,在胞内完成同源重组获得重组杆状病毒,避免了繁琐的病毒空斑纯化和分子克隆操作,获得的重组杆状病毒中无不稳定因子BAC及影响下游应用研究的抗性基因,为快速构建重组杆状病毒高效表达外源基因及相关研究应用提供了新的技术平台。

昆虫线性单链DNA病毒表达策略研究进展

昆虫线性单链DNA(linear single-stranded DNA,linear-ssDNA)病毒感染的昆虫种类很广泛。它们主要归属于细小病毒科(Parvoviridae)的浓核病毒亚科(Densovirinae)和二分DNA病毒科(Bidnaviridae)。近年来,随着宏基因组学方法的发展,越来越多的昆虫linear-ssDNA病毒被发现,其基因组转录模式也逐渐被解析。昆虫linear-ssDNA病毒的基因组具有双义和单义两种类型,因此,该文将阐述双义和单义两种类型基因组的表达策略特征。总结来讲,其主要是通过未剪接(unsplicing)、选择性剪接(alternative splicing)、选择性多聚腺苷酸化(alternative polyadenylation)等转录方式产生多种转录本,采用选择性起始(alternative initiation)、漏扫描(leaky scanning)或移框(frameshifing)等方式表达蛋白质。现综述昆虫linearssDNA病毒的表达模式类型和研究进展,为研究其他的linear-ssDNA病毒的表达策略提供理论参考。