溴莫尼定对视网膜神经节细胞氧化应激损伤的保护作用

目的探讨溴莫尼定对视网膜神经节细胞（RGCs）氧化应激损伤的保护作用。 方法小鼠RGC-5细胞株在含低糖（1 g/L）、体积分数10%胎牛血清和100 U/ml（商品单位）青链霉素混悬液的DMEM培养液中进行培养，将传代的RGC-5细胞分为正常对照组、H2O2处理组和溴莫尼定＋H2O2处理组。H2O2处理组在细胞培养液中加入800 μmol/L H2O2，溴莫尼定＋H2O2处理组在细胞培养中加入1 μmol/L溴莫尼定处理2 h，然后加入800 μmol/L H2O2，各组细胞继续培养24 h。采用Hoechst荧光染色法观察各组细胞的细胞核形态和数量变化；采用Western blot法测定各组细胞中凋亡相关蛋白bcl-2和bax蛋白相对表达量变化；采用荧光标记JC-1试剂盒检测细胞线粒体膜电位改变。 结果正常对照组细胞核呈圆形或椭圆形，细胞核大小均匀；H2O2处理组可见细胞核固缩和碎裂，细胞核数量减少；溴莫尼定＋H2O2处理组出现核固缩和碎裂的细胞核明显少于H2O2处理组。正常对照组、H2O2处理组和溴莫尼定＋H2O2处理组细胞中bcl相对表达量分别为0.76±0.15、0.50±0.13和0.75±0.17，H2O2处理组细胞中bcl-2相对表达量明显低于正常对照组和溴莫尼定＋H2O2处理组，差异均有统计学意义（均P〈0.05）。正常对照组、H2O2处理组和溴莫尼定＋H2O2处理组细胞中bax相对表达量分别为0.65±0.13、0.83±0.07和0.70±0.10，H2O2处理组细胞中bax相对表达量均明显高于正常对照组和溴莫尼定＋H2O2处理组，差异均有统计学意义（均P〈0.05）。正常对照组RGC-5线粒体膜可见较强的橙色荧光，与细胞膜绿色荧光共表达；H2O2处理组细胞中橙色荧光减弱且表达JC-1的细胞数量减少；溴莫尼定＋H2O2处理组细胞线粒体膜橙色荧光较H2O2处理组增强，JC-1阳性细胞数量明显增多。 结论溴莫尼定预处理能够预防氧化应激导致的RGCs线粒体损害，从而发挥视神经保护作用。