线粒体丝氨酸蛋白酶在甲状腺乳头状癌中的表达水平及其临床意义

目的探讨线粒体丝氨酸蛋白酶(Omi/Htr A2)在甲状腺乳头状癌中的表达及其与临床病理的关系。方法采用免疫组织化学方法和蛋白印迹法检测120例甲状腺乳头状癌、40例结节性甲状腺肿及40例正常甲状腺组织中Omi/Htr A2的表达水平,并分析其与甲状腺乳头状癌的临床病理特征的关系。结果免疫组织化学结果表明,甲状腺乳头状癌组织中Omi/Htr A2蛋白阳性率(71.67%)较结节性甲状腺肿(30.00%)、正常甲状腺组织(32.50%)明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。蛋白印迹法检测结果表明,Omi/Htr A2蛋白在甲状腺乳头状癌组织中的表达量为(1.184±0.060),明显高于结节性甲状腺肿组织(0.599±0.096)和正常甲状腺组织(0.606±0.097),差异有统计学意义(P<0.05)。Omi/Htr A2蛋白的表达与甲状腺乳头状癌的包膜浸润、淋巴结转移、肿瘤临床分期及肿瘤分化有关(P<0.05)。结论 Omi/Htr A2蛋白的表达可能成为判断甲状腺乳头状癌恶化程度及预后的指标。

线粒体丝氨酸蛋白酶抑制MPTP诱导小鼠帕金森病的研究

目的探讨线粒体丝氨酸蛋白酶(HtrA2/Omi)对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)诱导的帕金森病(PD)模型小鼠中脑多巴胺能神经元的影响。方法12月龄C57BL雄性小鼠随机分为生理盐水组(5只)、MPTP组(5只)和MPTP+HtrA2/Omi组(6只),MPTP+HtrA2/Omi组小鼠尾静脉注射腺相关病毒AAV9-HtrA2/Omi表达HtrA2/Omi。腺相关病毒AAV9-HtrA2/Omi注射2周后,MPTP组和MPTP+HtrA2/Omi组1次/d,连续2周腹腔注射MPTP构建PD小鼠模型,生理盐水组注射等量生理盐水。在MPTP注射前1周及注射后第1、2周对3组小鼠进行爬杆实验和转棒实验。在MPTP注射结束后,检测3组小鼠脑组织绿色荧光蛋白(GFP),检测HtrA2/Omi过表达情况;组织切片酪氨酸羟化酶(TH)免疫荧光检测中脑多巴胺能神经元;蛋白免疫印迹检测TH蛋白表达量;组织免疫荧光检测α突触核蛋白聚集。结果MPTP导致小鼠出现行为学功能障碍,成功构建PD小鼠模型。过表达HtrA2/Omi可减轻因MPTP导致的多巴胺能神经元减少,减轻α突触核蛋白聚集,改善小鼠行为功能障碍。结论过表达HtrA2/Omi可改善MPTP所致小鼠的PD症状。

线粒体促凋亡因子Omi/HtrA2在肝癌组织中表达的研究

目的探讨丝氨酸蛋白酶Omi/HtrA2在肝癌组织、癌旁组织与正常肝组织中的表达及意义。方法应用免疫组化SABC法检测43例肝癌、30例癌旁组织及10例正常肝组织中Omi/HtrA2的表达。结果29例(67·44%)肝癌中Omi/HtrA2蛋白表达阳性,30例癌旁组织和10正常肝组织没有或只有少量很弱的表达。肝癌高分化组中Omi/HtrA2蛋白的表达明显高于中、低分化组(P<0·01)。另外,Omi/HtrA2表达与肿瘤大小及临床分期相关,但Omi/HtrA2表达与肝硬化、有无癌栓、HBsAg和AFP无关。结论肝细胞癌可能需要Omi/HtrA2的表达来促进凋亡,Omi/HtrA2的表达对肝癌的发展有重要作用。

miR-455对Omi/HtrA2介导的人涎腺腺样囊性癌细胞株线粒体凋亡的影响

目的探讨过表达微小RNA-455(miR-455)对线粒体促凋亡分子丝氨酸蛋白酶(Omi/HtrA2)介导的人涎腺腺样囊性癌细胞株线粒体凋亡的影响。方法收集70例因原发病手术切除并经病理诊断为人涎腺腺样囊性癌患者的癌组织为人涎腺腺样囊性癌组,选取正常涎腺组织65例为对照组,无菌操作下取得的新鲜组织放入无菌冻存管后迅速投入液氮中快速冷冻,再转至-80℃冰箱长期保存,采用qRT-PCR法检测两组组织miR-455表达情况。体外培养人涎腺腺样囊性癌患者ACC-M细胞,利用miR-455mimics转染ACC-M细胞为miR-455 mimics组,采用国际通用的与所有基因无同源性序列的miR-455-NC转染为阴性对照组,以未经处理的ACC-M细胞为空白对照组,48 h后收集各组细胞。利用qRT-PCR法检测miR-455表达情况;MTT法检测ACC-M细胞增殖能力;利用流式细胞仪检测细胞凋亡情况;免疫荧光检测细胞色素C释放情况;利用Western印迹检测免抗人增殖细胞核抗原(ki67)、Omi/HtrA2、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(caspase)3、caspase6蛋白表达情况。结果与对照组相比,人涎腺腺样囊性癌组miR-455表达显著降低(P<0.05);与空白对照组、阴性对照组比较,miR-455 mimics组ACC-M细胞中miR-455表达水平、细胞凋亡显著升高(P<0.05);miR-455 mimics组转染后48 h、72 h后OD值显著降低(P<0.05);与空白对照组、阴性对照组比较,miR-455 mimics组细胞色素C呈弥散性分布于细胞质中,围绕在细胞核周围且细胞色素C、线粒体平均光密度显著升高(P<0.05);miR-455 mimics组ACC-M细胞中ki67蛋白相对表达量显著降低(P<0.05),Omi/HtrA2、caspase3、caspase6蛋白相对表达量显著升高(P<0.05)。结论过表达miR-455可促进人涎腺腺样囊性癌ACC-M细胞凋亡,可能是通过激活Omi/HtrA2介导的线粒体凋亡途径而实现的。

槲芪散及其君药槲寄生对大鼠肝癌前病变组织中促凋亡因子Omi/HtrA2表达的影响

目的:探讨槲芪散及其君药槲寄生干预肝癌前病变组织中癌细胞凋亡机制。方法:用电镜观察模型组、正常组以及槲芪散大小剂量组、槲寄生单体组肝细胞线粒体形态学的变化,用免疫组化SP法、Western Blotting法检测各实验组大鼠肝组织丝氨酸蛋白酶Omi/HtrA2的表达。结果:槲芪散治疗组肝细胞线粒体形态较模型组有明显改善;除正常组外,模型组,槲芪散大、小剂量治疗组,槲寄生单体组均有Omi/HtrA2的表达,模型组、正常组、大剂量治疗组、单体组之间丝氨酸蛋白酶的表达量有统计学意义(P<0.05)。结论:槲芪散及其君药槲寄生能够改善肝细胞线粒体的形态和功能,降低Omi/HtrA2总量的表达,并且促使Omi/HtrA2从线粒体释放,诱导肝癌细胞的凋亡。

LIR损伤过程中腹腔给予氢气的兔血清TRAIL、Omi/HtrA2及骨骼肌组织Omi/HtrA2表达观察

目的观察肢体缺血—再灌注(LIR)损伤过程中腹腔注射氢气的兔血清肿瘤坏死因子-相关凋亡诱导配体(TRAIL)、线粒体丝氨酸蛋白酶(Omi/HtrA2)及骨骼肌组织匀浆上清Omi/HtrA2的水平变化,并探讨其可能作用机制。方法 45只新西兰大耳白兔随机分为LIR+氢气组(H组)、LIR组(I组)及对照组(C组),每组各15只。H、I组将袖带绑缚于兔右后肢根部股动脉搏动处(超过收缩压20~30 mmHg可完全阻断血流),束缚4 h时打开球囊开关(再灌注),H组于再灌注前5 min腹腔注射5 mL/kg氢气,C、I组同时刻腹腔注射等体积空气。C组仅用相同袖带缠缚相同部位。分别于再灌注24、72、168 h时取各组大耳白兔,分别取静脉血及胫骨前肌肌组织,检测血清TRAIL、Omi/HtrA2及骨骼肌组织Omi/HtrA2。结果与I组比较,再灌注24、72、168 h时H组兔血清TRAIL、Omi/HtrA2水平低(P均<0.01);与I组比较,再灌注24、72、168 h时H组兔骨骼肌组织匀浆上清Omi/HtrA2水平降低(P均<0.01)。同组不同时间段I、H组血清TRAIL及其骨骼肌组织匀浆上清Omi/HtrA2间比较,P均<0.01,I组血清Omi/HtrA2间差异有统计学意义(P均<0.01)。结论腹腔注射氢气的LIR损伤兔血清TRAIL、Omi/HtrA2及骨骼肌组组织匀浆上清Omi/HtrA2表达均降低。TRAIL、Omi/HtrA2可能参与LIR的发生发展。氢气可通过抑制TRAIL的活化及血清及骨骼肌Omi/HtrA2释放,抑制细胞凋亡。

Omi/HtrA2基因与神经变性疾病的研究进展

人HtrA2(也称作Omi)是HtrA丝氨酸蛋白酶家族的新成员,可以通过破坏X染色体连锁的凋亡蛋白抑制物和caspase的相互作用,和(或)直接利用其蛋白酶活性诱导凋亡,也可以校正、降解错误折叠的蛋白质,抵抗应激,具有细胞保护的作用。研究已经发现它参与了许多疾病的发生、发展。作者就其生物学功能、单核苷酸多态性与神经变性疾病的相关性做一综述。

Omi/HtrA2表达与肿瘤关系的研究进展

Omi/Htr A2是定位于真核生物线粒体中的丝氨酸蛋白酶,是寡聚丝氨酸蛋白酶Htr A（high temperature requirement）家族的成员之一。Omi/Htr A2在内质网合成后,由线粒体定位序列MTS（mitochondrial rargeting sequence）引导进入线粒体中,被线粒体中加工肽酶或自身蛋白酶加工为成熟的Omi,并储存在线粒体膜间隙。

The mitochondrial serine protease HtrA2/Omi cleaves RIP1 during apoptosis of Ba/F3 cells induced by growth factor withdrawal

老鼠 pro-B 房间行 Ba/F3 的 Interleukin-3 (IL-3 ) 剥夺导致被 B 房间淋巴瘤 2 废除的房间死亡(Bcl-2 ) overexpression，而是由 pan-caspase 禁止者 carbobenzoxy-valyl-analyl-aspartyl- 未受影响的遗体[O 甲基]-fluoromethylketone (zVAD-fmk ) 。IL-3 退却引起交往受体的蛋白质(裂开) 进 30 和 25 kDa 的 C 终端碎片的 1 劈开，和仅仅导致前者的劈开被 zVAD-fmk 阻止。siRNA 实验证明 25-kDa 碎片的产生高由于 mitochondrial 丝氨酸朊酶的一个 Bcl-2-modulated 版本温度要求蛋白质 A2 (HtrA2 )/Omi。因此， recombinant HtrA2/Omi 高效地在 vitro 劈开老鼠 RIP1，产生匹配在 IL-3-deprived Ba/F3 房间观察的那些的碎片。在老鼠 RIP1 的 HtrA2/Omi 劈开地点被印射到中间的领域和相应 N 终端， C 终端碎片处于他们激活原子因素的能力被损害 --魏 B， c6 月 N 终端 kinase 和 p38 激活 mitogen 的蛋白质 kinase。有趣地， HtrA2/Omi 击倒面对 zVAD-fmk 对 IL-3 导致退却的死亡负担得起保护，由劈开 RIP1 在生长因素退却期间在 caspase 独立的细胞死亡为 HtrA2/Omi 表明一个角色。

线粒体促凋亡因子Omi/HtrA2在肝癌中的表达及意义

丝氨酸蛋白酶Omi／HtrA2是最近发现的线粒体促凋亡因子。近期研究发现其在肿瘤的发生发展中起到某种作用，在肝癌中的表达及其可能的作用尚无报道。我们研究Omi／HtrA2在肝癌细胞及肝癌组织中的表达情况，探讨Omi／HtrA2在肝癌发生发展中的作用。