槲皮素通过介导JNK信号通路抑制线粒体凋亡途径的神经保护作用

目的研究槲皮素(quercetin,Que)通过调节JNK信号通路抑制Aβ25-35引起PC12细胞线粒体损伤的作用机制。方法培养PC12细胞,使用Aβ25-35诱导其构建阿尔茨海默病(Alzheimer′s disease,AD)受损模型,Que、17β-雌二醇(17β-E2)和金雀异黄素(genistein,Gen)进行干预,并设定SP600125(JNK特异性抑制剂)预处理组。Fluo-4 AM染料荧光检测PC12细胞钙离子;Rhodamine123染色液检测PC12细胞线粒体膜电位;Caspase-3活性检测Caspase-3酶活性;免疫荧光检测p-JNK蛋白表达;Western blot法检测ERα、ERβ、p-JNK、JNK、Bcl-W、Bim和Cytochrome C蛋白表达。并使用雌激素受体α/β拮抗剂MPP/PHTPP和SP600125进行干预,探讨Que发挥神经保护介导的分子机制。结果与Aβ25-35组相比,Aβ25-35+Que组能提高线粒体膜电位(P<0.01);降低钙离子浓度(P<0.01)。免疫荧光、Caspase-3检测和Western blot结果显示,与Aβ25-35组相比,Que可以逆转Aβ25-35诱导的ERα表达降低(P<0.01),当加入MPP抑制Que与雌激素受体α结合后,Caspase-3表达增加(P<0.05);Que抑制p-JNK表达(P<0.01);降低促凋亡蛋白Bim的表达(P<0.01),减少Cyt C的释放(P<0.01),促进抗凋亡蛋白Bcl-W的表达(P<0.01),当加入SP600125后,Que对Bcl-W、Bim和Cyt C的作用和SP600125对Aβ25-35诱导PC12细胞线粒体凋亡途径的保护作用机制相同(P<0.01)。结论Que可通过介导JNK信号通路抑制线粒体凋亡,进而发挥神经保护作用。

叶酸修饰脂质体槲皮素经JAK2/STAT3信号通路介导的线粒体凋亡途径诱导三阴性乳腺癌细胞凋亡

目的探讨叶酸修饰脂质体槲皮素对三阴性乳腺癌细胞增殖、凋亡的影响及潜在的调控机制。方法叶酸修饰脂质体槲皮素处理三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231后,CCK-8法检测细胞活力;平板克隆实验检测细胞增殖克隆能力;流式细胞术检测细胞凋亡、细胞活性氧(ROS)水平及线粒体膜电位的变化;Western blot检测酪氨酸蛋白激酶2(JAK2)-信号转导与转录激活因子3(STAT3)信号通路相关蛋白及凋亡相关蛋白的表达水平。结果叶酸修饰脂质体槲皮素抑制MDA-MB-231细胞增殖(P=0.023)、促进其凋亡(P<0.001),促进MDA-MB-231细胞线粒体膜电位坍塌(P=0.003),提升MDA-MB-231细胞内ROS水平(P=0.034),抑制JAK2和STAT3磷酸化水平(P<0.001),下调抗凋亡蛋白Bcl2、Bcl-xL表达(P=0.037,0.028),上调促凋亡蛋白Bax、Bak、Cyt C、Cleaved-Caspase-3表达(P<0.001)。结论叶酸修饰脂质体槲皮素抑制三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖并诱导其凋亡,其作用机制可能与抑制JAK2/STAT3信号通路活化并激活线粒体凋亡途径有关。

和厚朴酚通过PI3K/AKT信号通路调节线粒体凋亡对小鼠心肌缺血/再灌注损伤的影响及机制研究

目的探讨和厚朴酚(HK)对心肌缺血/再灌注损伤(MIRI)小鼠心脏的保护作用及其机制。方法2022年6月—2023年7月于陕西中医药大学基础医学院中医诊断实验中心进行实验。78只雄性C57BL/6J小鼠随机分为假手术(Sham)组、MIRI组和MIRI+HK组,每组26只。术前对MIRI+HK组小鼠给予HK(0.2 mg·kg-1·d-1)腹腔注射,Sham组和MIRI组给予等量溶剂,连续14 d。造模术中Sham组仅穿线不结扎,其余2组均结扎左前降支30 min后,解开缝线再灌注2 h,构建MIRI模型,再灌注结束后立即取血,剥离心脏。比较各组血清中肌酸激酶同工酶(CK-MB)和心肌肌钙蛋白T(cTnT)水平;超声心动图检测心功能;2,3,5-三苯基氯化四氮唑染色法计算心肌梗死面积;原位末端标记技术检测细胞凋亡水平;电镜观察线粒体结构损伤情况;Western-blot检测线粒体凋亡和磷酸肌醇-3激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)通路相关蛋白表达。结果与Sham组比较,MIRI组小鼠血清CK-MB、cTnT和左心室收缩末期内径(LVESD)水平及心肌梗死面积、细胞凋亡率升高,左心室射血分数(LVEF)和左心室短轴缩短率(LVFS)降低(P<0.001),心肌细胞线粒体大多肿胀,内外双层膜模糊,嵴畸形且减少或缺失,线粒体凋亡相关蛋白细胞色素(Cyto)-C、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和活化半胱氨酸蛋白酶(Cleaved Caspase-9)表达升高,B淋巴细胞瘤2基因(Bcl-2)、p-AKT/AKT和p-PI3K/PI3K表达降低(P<0.001);与MIRI组比较,MIRI+HK组小鼠血清CK-MB、cTnT和LVESD水平及心肌梗死面积、细胞凋亡率降低,LVEF和LVFS增加(P<0.001),心肌细胞线粒体超微结构有所好转,结构较为完整,Cyto-C、Bax和Cleaved Caspase-9蛋白表达降低,Bcl-2、p-AKT/AKT和p-PI3K/PI3K表达升高(P<0.001)。结论HK可通过激活PI3K/AKT信号通路抑制MIRI诱导的心肌细胞线粒体凋亡,从而发挥心肌保护作用。

miR-182调控线粒体凋亡通路对冠心病模型大鼠心肌组织细胞凋亡的影响

目的 探究微小RNA(miR)-182调控线粒体凋亡通路对冠心病模型大鼠心肌组织细胞凋亡的影响。方法 选取健康SD成年大鼠30只,8~10周龄,15只作为假手术组,15只建立冠心病模型,建模成功后获取建模大鼠心肌组织细胞,经培养、转染后分为上调miR-182a、下调miR-182组、对照组。采用RT-PCR技术检测miR-182、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)相关基因表达,观察3组细胞增殖、凋亡变化,免疫组化法检测心肌组织谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平,Western印迹检测Bcl-2、Bax表达水平。结果 在1、3、6 h与对照组比较,下调miR-182组GSH-PX、SOD、Bcl-2表达水平较高,足细胞凋亡率、细胞增殖密度值、miR-182、MDA、Bax表达水平较低,上调miR-182组GSH-PX、SOD、Bcl-2表达水平较低,足细胞凋亡率、细胞增殖密度值、miR-182、MDA、Bax表达水平较高,差异有统计学意义(P<0.05);与下调miR-182组相比,上调miR-182组GSH-PX、SOD、Bcl-2表达水平较低,足细胞凋亡率、细胞增殖密度值、miR-182、MDA、Bax表达水平较高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 miR-182通过下调表达水平调控线粒体凋亡通路Bcl-2、Bax水平低表达,从而抑制冠心病模型大鼠心肌组织细胞凋亡,对心肌细胞具有一定保护作用。

葫芦巴碱通过Pink1/Parkin信号通路介导线粒体自噬对OGD/R诱导的神经元凋亡的影响

目的:探究葫芦巴碱通过PTEN诱导性激酶蛋白1(Pink1)/E3泛素连接酶(Parkin)信号通路介导线粒体自噬对氧-糖剥夺/复氧(OGD/R)诱导的神经元凋亡的影响。方法:原代培养大鼠海马神经元,经下调Pink1或葫芦巴碱预处理后通过OGD/R诱导神经元损伤,实验分组包括对照组、OGD/R组、葫芦巴碱组、pLKO空载体组(转染pLKO空载体)、pLKO-Pink1组(转染连接Pink1 shRNA干扰质粒的pLKO载体)、葫芦巴碱+pLKO-Pink1组。Annexin V-FITC/PI双染法测定神经元凋亡率;JC-1法测定线粒体膜电位(MMP);Calcein-AM法测定线粒体膜通透性转换孔(MPTP)开放程度;透射电镜观察自噬小体数量;Western Blot检测线粒体自噬相关蛋白(微管相关蛋白1轻链3Ⅱ(LC3Ⅱ)、Pink1、Parkin)表达。结果:与对照组相比,OGD/R组神经元凋亡率、MPTP开放程度增加,MMP下降,自噬小体数量及LC3-Ⅱ、Pink1、Parkin蛋白表达增加(P<0.05);与OGD/R组相比,葫芦巴碱组神经元凋亡率、MPTP开放程度减少,MMP升高,自噬小体数量及LC3-Ⅱ、Pink1、Parkin蛋白表达增加(P<0.05),pLKO-Pink1组与葫芦巴碱组趋势相反;与葫芦巴碱组相比,葫芦巴碱+pLKO-Pink1组神经元凋亡率、MPTP开放程度增加,MMP下降,自噬小体数量及LC3-Ⅱ、Pink1、Parkin蛋白表达减少(P<0.05)。结论:葫芦巴碱可抑制OGD/R诱导的神经元凋亡,可能通过激活Pink1/Parkin信号通路上调线粒体自噬而实现。

基于线粒体凋亡通路探究右美托咪定对心肌缺血再灌注模型大鼠的干预效果

目的 探究右美托咪定对心肌缺血再灌注模型大鼠线粒体凋亡通路的影响。方法 选取40只SPF级雄性大鼠,随机选取10只大鼠作为正常组,剩余30只大鼠采用结扎左冠状动脉前降支法建立心肌缺血再灌注模型,使大鼠心肌缺血30 min,再灌注60 min,最终28只大鼠建模成功,随机分为再灌注组、右美托咪定组各14只。建模后右美托咪定组大鼠尾部注射右美托咪定注射液,正常组、再灌注组大鼠不做任何处理,24 h后观察大鼠变化。多道生理记录仪检测左室收缩压(LVSP)、左室舒张末压(LVEDP)、左室内压下降最大速率(-dp/dt)、左室内压上升最大速率(+dp/dt),酶标分析仪检测白介素-6(IL-6)、C反应蛋白(CRP)、肿瘤坏死因子(TNF)-α,流式细胞仪检测丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD),Western印迹法检测细胞色素(Cyto)C、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(Caspase)-3通路蛋白相对表达量。结果 与正常组相比,再灌注组、右美托咪定组LVSP、-dp/dt、+dp/dt、GSH-Px、SOD水平较低,LVEDP、IL-6、CRP、TNF-α、MDA水平较高,差异有统计学意义(P<0.05);与再灌注组相比,右美托咪定组LVSP、-dp/dt、+dp/dt、GSH-Px、SOD水平较高,LVEDP、IL-6、CRP、TNF-α、MDA水平较低,差异有统计学意义(P<0.05)。与正常组相比,再灌注组、右美托咪定组CytoC、Caspase-3蛋白表达量显著较高(P<0.05);与再灌注组相比,右美托咪定组Cyto C、Caspase-3蛋白表达量显著较低(P<0.05)。结论 使用右美托咪定干预的心肌缺血再灌注大鼠,心脏血流动力学水平提升,炎症因子水平得到调节,抗氧化能力提高,CytoC、Caspase-3蛋白得到调控,从而起到保护心脏的作用。

宰后成熟过程中脂多糖诱导剂对滩羊肌细胞线粒体凋亡信号通路的影响

为探究脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导剂对滩羊肌细胞线粒体信号通路的影响,以6月龄滩羊背最长肌(M longissimus dorsi)为研究对象,分析其4℃成熟0、6、12、24、72 h时pH值、ATP含量、细胞凋亡率、细胞凋亡酶活力、琥珀酸脱氢酶(succinatedehydrogenase,SDH)和柠檬酸合酶(citrate synthase,CS)活力、Bcl-2家族蛋白含量、细胞凋亡因子细胞色素c(cytochrome c,Cyt-c)和半胱氨酸蛋白酶3(cysteinyl aspartate specific proteinase 3,Caspase-3)表达量的变化情况。结果表明,宰后成熟过程中,对照组和LPS诱导处理组滩羊肌肉中细胞凋亡率、Bax/Bcl-2的比值呈显著上升趋势(P<0.05);Caspase-3和Caspase-9活力均呈现先上升后下降趋势,经LPS处理后,滩羊肉骨骼肌中Caspase-3和Caspase-9活力均在任一时间点均高于对照组;pH值、Cyt-c还原水平和线粒体ATP含量整体呈现显著下降趋势(P<0.05);对照组和处理组胞浆Cyt-c相对表达量在宰后12 h较初始水平显著升高,24~72 h内LPS处理组胞浆Cyt-c相对表达量呈现下降趋势;同一时间LPS处理组的Caspase-3活化片段蛋白相对含量均高于对照组。结论:滩羊宰后成熟过程中LPS诱导剂对线粒体信号通路的影响是通过激活Caspase-9和Caspase-3的活性、降低线粒体ATP含量从而导致能量代谢水平降低,进而影响SDH和CS的活性,促使Cyt-c的释放,提高Bax/Bcl-2的比值,最终诱导细胞通过线粒体信号通路发生凋亡。

补肾生精调和气血法调控Bcl-2相关线粒体凋亡信号通路改善大鼠卵巢储备功能的研究

【目的】探讨补肾生精调和气血法对卵巢储备功能减退(DOR)模型大鼠的干预机制。【方法】将60只性成熟雌性SD大鼠随机分为正常组,模型组,西药组,中药低、中、高剂量组,每组10只。除正常组,其余各组大鼠给予单次腹腔注射环磷酰胺构建DOR模型。于造模次日开始,西药组给予戊酸雌二醇0.105 mg·kg^(-1)·d^(-1)灌胃,中药低、中、高剂量组分别对应给予补肾生精调和气血法中药复方8.075、16.15、32.3 g·kg^(-1)·d^(-1)灌胃,正常组、模型组给予等体积去离子水灌胃,每日1次,连续21 d。给药结束后,采用酶联免疫吸附分析(ELISA)检测血清卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)水平,采用电化学发光法检测血清雌二醇(E2)、抗苗勒管激素(AMH)水平,采用Western Blot法检测卵巢组织血红素氧合酶1(HO-1)、醌氧化还原酶1(NQO-1)、B淋巴细胞瘤2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸蛋白酶3(Caspase-3)和半胱氨酸蛋白酶9(Caspase-9)的蛋白表达水平,采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)法检测卵巢组织HO-1、NQO-1、Bcl-2、Bax、Caspase-3、Caspase-9的mRNA表达水平。【结果】与正常组比较,模型组血清FSH、LH水平升高,E2、AMH水平降低,卵巢组织HO-1、NQO-1、Bcl-2蛋白表达水平下调,Bax、cleaved Caspase-3、Caspase-9、cleaved Caspase-9蛋白表达水平上调,Caspase-3、Caspase-9 mRNA表达水平下调(均P<0.05);与模型组比较,西药组和中药低、中、高剂量组上述各指标得到一定程度的改善,且中药各剂量组各指标的改善效果与西药组相当。【结论】补肾生精调和气血法通过调控Bcl-2相关线粒体凋亡信号通路,抑制卵巢颗粒细胞凋亡,改善大鼠卵巢储备功能。

山柰酚通过线粒体凋亡通路诱导三阴性乳腺癌细胞凋亡的机制研究

本文旨在探讨山柰酚对三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231的抑制作用及其可能的分子机制。用不同浓度的山柰酚处理细胞,CCK-8法检测山柰酚对MDA-MB-231和人正常乳腺上皮细胞MCF-10A活力的影响,倒置显微镜观察各组细胞形态变化,克隆形成法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,JC-1染色法检测细胞线粒体膜电位的改变,Western blot检测B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、细胞色素C(Cyt C)和细胞周期蛋白D1(CyclinD1)的蛋白表达,比色法检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3(Caspase-3)以及半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-9(Caspase-9)的活性。结果显示,山柰酚体外可显著抑制MDA-MB-231细胞的增殖,诱导细胞凋亡,且对正常乳腺上皮细胞活力无影响,降低细胞线粒体膜电位,上调Bax、Cyt C的表达,下降Bcl-2和Cyclin D1的表达,增强Caspase-3、Caspase-9活性。结果表明,线粒体凋亡信号通路的激活是山柰酚诱导MDA-MB-231细胞凋亡的途径之一。

JTE-013介导RhoA/ROCK1/Drp1信号轴调控线粒体损伤和凋亡缓解过敏性鼻炎

目的探究JTE-013通过RhoA/ROCK1/Drp1通路调控线粒体损伤和凋亡对过敏性鼻炎(allergic rhinitis,AR)保护作用及机制。方法用卵清蛋白(OVA)建立小鼠AR模型。造模结束后,记录揉鼻、打喷嚏的次数。然后鼻组织切片进行HE、TUNEL和DHE染色。在体外,通过人重组白细胞介素-13(IL-13)刺激人鼻黏膜上皮细胞(HNEpCs),Western blot法检测JTE-013和Y27632对RhoA、ROCK1、Drp1及其相关磷酸化的蛋白和细胞凋亡相关蛋白表达影响。免疫荧光观察JTE-013和Y27632对细胞总ROS、线粒体膜电位和线粒体ROS生成,Drp1易位情况以及Cyt-c的表达情况。结果JTE-013减少了AR小鼠的揉鼻和打喷嚏频率,减轻鼻黏膜增厚并降低嗜酸细胞浸润。TUNEL和DHE染色结果提示,JTE-013可以抑制小鼠鼻上皮细胞凋亡并减少ROS表达。Western blot结果表明,JTE-013和Y27632都能明显降低RhoA、ROCK1、Drp1及p-Drp1(616),抑制凋亡蛋白Bax、cleaved-caspase-3、Cyt-c、cleaved-caspase-9表达并上调了p-Drp1(637)、Bcl-2表达。免疫荧光显示JTE-013或ROCK1的抑制剂几乎阻断了IL-13介导鼻黏膜上皮细胞ROS和mtROS生成增加、抑制了线粒体膜电位降低,阻滞了Cyt-c表达和Drp1易位。结论JTE-013能够通过抑制RhoA/ROCK1/Drp1信号轴调节线粒体的形态和功能,从而缓解AR小鼠鼻黏膜上皮细胞炎症。

基于X连锁凋亡抑制蛋白/第二种线粒体衍生半胱天冬酶激活剂通路探讨尼莫地平对脑梗死大鼠神经功能的影响

目的基于X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)/第二种线粒体衍生半胱天冬酶激活剂(Smac)通路探讨尼莫地平对脑梗死大鼠神经功能的影响。方法以线栓法闭塞大鼠大脑中动脉诱导建立大鼠脑梗死模型,随机分为模型组、尼莫地平组(10 mg/kg)、AT-406组(XIAP抑制剂,7 mg/kg)、联合组(尼莫地平联合AT-406),每组12只,另取12只大鼠设定为假手术组,分别给药干预后,以Zea Longa分级法对各组大鼠神经功能缺损进行评分;以Morris水迷宫实验评测各组大鼠学习记忆功能通过比较其跨越原平台次数;以TTC染色检测各组大鼠脑梗死状况;以TUNEL染色评测各组大鼠海马神经元凋亡状况;以试剂盒检测各组大鼠血清促炎因子环氧化酶-2(COX-2)与白细胞介素-18(IL-18)含量;以蛋白免疫印迹法检测各组大鼠脑组织凋亡相关蛋白[B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)]与XIAP/Smac通路相关蛋白(XIAP、Smac)表达状况。结果与假手术组相比,模型组大鼠跨越原平台次数、脑组织Bcl-2与XIAP表达水平显著降低(P<0.05),神经功能缺损评分、脑梗死面积、海马神经元凋亡比率、血清COX-2与IL-18含量、脑组织Bax与Smac表达水平显著升高(P<0.05)。与模型组、联合组分别相比,尼莫地平组大鼠跨越原平台次数、脑组织Bcl-2与XIAP表达水平均升高(P<0.05),神经功能缺损评分、脑梗死面积、海马神经元凋亡比率、血清COX-2与IL-18含量、脑组织Bax与Smac表达水平均降低(P<0.05)。与模型组、联合组分别相比,AT-406组大鼠脑组织跨越原平台次数、脑组织Bcl-2与XIAP表达水平均降低(P<0.05),神经功能缺损评分、脑梗死面积、海马神经元凋亡比率、血清COX-2与IL-18含量、脑组织Bax与Smac表达水平均升高(P<0.05)。结论尼莫地平可通过上调XIAP表达,下调Smac表达,进而抑制炎症,减轻脑梗死大鼠海马神经元凋亡,提升大鼠学习记忆能力,改善其神经功能。

p53/CytC/Apaf-1介导线粒体凋亡通路对缺血性脑卒中的作用

脑卒中的发病类型主要包括缺血性脑卒中和出血性脑卒中,其中缺血性脑卒中的发病率高于出血性脑卒中,占脑卒中总数的70%~80%[1]。缺血性脑卒中的发病机制较为复杂,主要与能量代谢障碍、活性氧增多、钙超载、炎性反应、细胞凋亡、自噬、高能磷酸化合物生成障碍、兴奋性氨基酸毒性作用等多种内外因素相关[2]。各因素之间互相作用,最终导致了神经功能破坏、脑梗死灶的形成。研究发现,线粒体功能异常是缺血性脑卒中病理进程中的关键一环。线粒体功能异常,可引起促凋亡相关因子表达增强,激活线粒体凋亡通路,引起缺血性脑卒中神经功能障碍[3]。本文就p53/细胞色素(Cyt)C/凋亡蛋白酶激活因子(Apaf)-1介导的线粒体凋亡通路对缺血性脑卒中的作用进行综述。

葛根素通过调节PINK1-parkin信号通路介导的线粒体自噬抑制慢性阻塞性肺疾病大鼠肺泡上皮细胞凋亡

目的:建立大鼠慢性阻塞性肺疾病(COPD)模型,探讨葛根素是否能够通过调控PTEN诱导假定激酶1(PINK1)-parkin信号通路介导的线粒体自噬,发挥肺保护作用。方法:气管滴注脂多糖+烟熏法建立COPD大鼠模型,建模成功后随机分为模型组、低剂量(50 mg/kg)葛根素组、中剂量(100 mg/kg)葛根素组、高剂量(200 mg/kg)葛根素组和3-甲基腺嘌呤(3-MA;10 mg/kg)组,每组15只;另取15只大鼠作为对照组。连续给药8周后进行大鼠肺功能检测;ELISA法检测大鼠肺泡灌洗液中TNF-α、IL-1β和IL-6水平;HE染色观察大鼠肺组织病理变化;TUNEL染色观察大鼠肺泡上皮细胞凋亡情况;免疫组化法检测肺组织中BECN1和LC3B蛋白表达;Western blot法检测肺组织中PINK1、parkin、Bax和Bcl-2蛋白表达。结果:与对照组比较,模型组大鼠肺组织病变明显,肺泡腔严重充血,炎症细胞大量浸润,肺泡间隔与肺泡壁增厚,病理评分显著升高(P<0.05),用力肺活量(FVC)、0.1 s用力呼气容积(FEV0.1)和呼气流量峰值(PEF)水平均显著下降(P<0.05),TNF-α、IL-1β和IL-6水平,肺泡上皮细胞凋亡率,肺组织中BECN1、LC3B、Bax、PINK1和parkin表达均显著升高(P<0.05),Bcl-2表达显著降低(P<0.05);与模型组比较,各剂量葛根素组和3-MA组大鼠肺组织病理评分均显著降低(P<0.05),FVC、FEV0.1和PEF水平均显著升高(P<0.05),TNF-α、IL-1β和IL-6水平,肺泡上皮细胞凋亡率,肺组织中BECN1、LC3B、Bax、PINK1和parkin表达均显著降低(P<0.05),Bcl-2表达显著升高(P<0.05),且具有剂量依赖性(P<0.05);与高剂量葛根素组比较,3-MA组大鼠上述指标无显著差异(P>0.05)。结论:葛根素可能通过调控PINK1-parkin信号通路介导的线粒体自噬,抑制肺泡上皮细胞凋亡和肺部炎症反应,从而减轻COPD大鼠肺损伤。

内质网应激介导的神经细胞凋亡通路

细胞凋亡是一种相对有序的能量依赖的程序化死亡过程,广泛存在于多细胞生物的各种器官和组织中。截止到目前,细胞凋亡通路主要有：死亡受体活化（外源性途径）途径、线粒体损伤途径（内源性途径）和内质网应激诱导的凋亡途径。前两者是经典凋亡途径,内质网应激途径是近年来才发现的一种新的凋亡途径。

线粒体通路和死亡受体通路在中华眼镜蛇毒组分诱导KG1a细胞凋亡中的作用

目的研究线粒体通路和死亡受体通路在中华眼镜蛇毒组分(naja naja actra venom component,NNAVC)诱导KG1a细胞凋亡过程中的作用。方法以人急性髓系白血病细胞株KG1a细胞为研究对象,采用Annexin V-FITC/PI荧光染色法进行凋亡细胞的形态学观察,流式细胞仪检测细胞凋亡率,分光光度法检测Caspase-9、Caspase-8和Caspase-3的活性,ELISA法检测胞质内细胞色素C的表达水平,流式细胞仪分析TRAIL死亡受体(DR4、DR5)和诱骗受体(DcR1、DcR2)的改变。结果 NNAVC作用后,荧光显微镜下可见明显的凋亡细胞,细胞凋亡率随药物作用浓度的增加而升高;Caspase-9、Caspase-8和Caspase-3蛋白被激活,胞质内细胞色素C的表达明显增加;流式细胞仪检测结果显示,NNAVC具有降低死亡受体DR4和诱骗受体DcR1的表达率,而提高DR5和DcR2的表达水平的作用。结论线粒体凋亡通路和死亡受体通路均参与NNAVC诱导KG1a细胞凋亡的过程,这可能是NNAVC发挥抗白血病作用的机制之一。

纳秒级电场脉冲诱导肿瘤细胞凋亡的线粒体通路研究

将纳秒级电场脉冲作用于人卵巢癌(SKOV3)细胞,通过流式细胞仪检测细胞活性氧(ROS)、线粒体跨膜电位(MTMP)的变化情况,用免疫荧光法检测线粒体膜间隙凋亡相关蛋白释放情况;用Western blot法检测线粒体膜间隙凋亡相关蛋白表达及活化情况,以研究纳秒级电场脉冲诱导肿瘤细胞凋亡的线粒体通路。实验发现:经纳秒级电场脉冲处理后,细胞活性氧即刻升高,且线粒体跨膜电位在6 h时达到最低值;线粒体膜间隙蛋白释放入胞浆(P<0.05);线粒体凋亡通路相关蛋白表达量也明显升高(P<0.05)。结果表明,在纳秒级电场脉冲诱导的肿瘤细胞凋亡中,线粒体凋亡通路参与并发挥了重要作用。

过氧化氢通过线粒体通路和死亡受体通路诱导心肌细胞凋亡

为探讨氧化应激诱导心肌细胞凋亡的分子机制 ,采用 0 .5mmol L过氧化氢作用于原代培养的新生大鼠心肌细胞。末端标记发现过氧化氢明显诱导心肌细胞凋亡 ;Caspase活性定量检测及Western blot发现Caspase 3、Caspase 8和Caspase 9同时被激活 ;而Western blot及间接免疫荧光发现细胞色素C从线粒体释放入胞浆。以上结果提示 ,氧化应激通过同时激活线粒体通路与死亡受体通路导致心肌细胞凋亡 。

BARF1表达下调通过活化caspase依赖的线粒体通路诱导EBV阳性胃癌细胞凋亡

目的:研究BARF1表达下调对EBV阳性胃癌细胞凋亡的影响,以及BARF1基因沉默介导细胞凋亡的分子机制。方法:siRNA和NCsiRNA分别转染NUGC3和SNU719细胞,运用Western blot测定细胞中BARF1、Bcl-2、Bax、细胞色素C、caspase 3和caspase 9的蛋白表达;RT-PCR测定BARF1、Bcl-2和Bax mRNA的表达;台盼蓝染色法测定细胞存活率;Annexin V-FITC/PI染色法和流式细胞仪测定细胞凋亡;细胞凋亡因子抗体芯片分析细胞中凋亡相关蛋白的表达;线粒体膜电位检测试剂盒测定线粒体膜电位;免疫共沉淀检测细胞中Apaf-1和caspase 9的相互作用。结果:与空白对照组和阴性对照组相比,BARF1基因沉默显著诱导NUGC3和SNU719细胞凋亡,而线粒体膜电位显著降低。BARF1沉默基因能促进促凋亡蛋白的表达并抑制抗凋亡蛋白的表达,Bcl-2/Bax比例显著降低;而caspase抑制剂能抑制由BARF1基因沉默介导的细胞凋亡。在siRNA转染的细胞中,caspase 3和caspase 9蛋白发生裂解,细胞色素C的浓度显著高于阴性对照组,Apaf-1蛋白与caspase 9蛋白在细胞质中能够发生相互作用。结论:BARF1基因沉默通过线粒体途径调节Bcl-2和Bax蛋白的表达进而诱导NUGC3和SNU719细胞凋亡,并呈caspase通路依赖关系。

线粒体通路、氧化应激在肝脏缺血再灌注损伤细胞凋亡中作用机制的研究进展

在肝脏缺血再灌注损伤导致的细胞凋亡过程中,线粒体通路和氧化应激是两条非常重要的机制。当肝脏发生缺血再灌注时,线粒体通透性转换孔的开放、细胞凋亡相关蛋白的释放以及B淋巴细胞瘤-2基因家族蛋白的调控作用共同组成线粒体通路,导致细胞凋亡;氧化应激则通过脂质过氧化、内质网应激、氧化应激调节分子表达变化等途径在肝脏缺血再灌注损伤细胞凋亡中发挥作用。