青藤碱通过调控SPHK2/MCL1通路诱导线粒体依赖性细胞凋亡改善急性淋巴细胞白血病

目的探讨青藤碱(SIN)通过调控鞘氨醇激酶2(SPHK2)/髓细胞白血病1(MCL1)通路调节线粒体依赖性细胞凋亡对急性淋巴细胞白血病(ALL)进展的影响。方法使用不同浓度SIN处理ALL细胞系(Jurkat)。CCK8检测细胞活力,流式细胞术检测凋亡,DCFH-DA探针检测细胞内活性氧(ROS)水平,JC-1试剂盒检测线粒体膜电位(MMP)。网络药理学分析SIN治疗ALL的靶点。构建SPHK2过表达模型,验证SIN在ALL中作用的机制。建立异种移植瘤模型,评估SIN对Jurkat细胞在体内生长的影响。结果与对照组相比,SIN显著抑制ALL细胞增殖,并诱导细胞凋亡(P<0.05)。不同浓度SIN处理Jurkat细胞后,细胞内ROS的水平上调且MMP下调(P<0.05)。网络药理学分析显示SPHK2是SIN治疗ALL的核心靶点,实验验证结果表明SIN处理抑制SPHK2和MCL1的表达(P<0.05)。过表达SPHK2减弱SIN在ALL中的抑癌作用(P<0.05)。体内研究显示,SIN治疗抑制肿瘤的生长,并上调cleaved Caspase-3的表达(P<0.05)。结论SIN通过抑制SPHK2/MCL1通路诱导线粒体依赖性细胞凋亡从而抑制ALL进展。

利拉鲁肽通过抑制线粒体依赖性凋亡及缺氧诱导因子1α表达对脊髓损伤的保护作用

探究利拉鲁对脊髓损伤的保护作用及其相关机制。方法 选取18只SD大鼠,分为三组,Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组,分别为对照组、应用等量生理盐水及利拉鲁肽组,每组6只,检测大鼠的肿瘤坏死因子α(TNF-α)、凋亡相关因子配体(FASL)、缺氧诱导因子1α(HIF-1α)、细胞色素c(Cyt-c)、Caspase3、Smac/Diablo,以及凋亡相关蛋白指标,对大鼠的下肢运动功能进行评估。结果 检测结果显示,利拉鲁肽对Caspase3、TNF-α、FASL、HIF-1α、P53、Cyt-c、Smac/Diablo有明显的抑制作用,并且能够逆转凋亡蛋白Bcl-2、Bax表达。利拉鲁肽应用14d后,大鼠的下肢运功功能出现明显改善。结论 利拉鲁肽对脊髓损伤有保护作用,可以抑制线粒体依赖性凋亡,以及缺氧诱导因子1α表达,从而发挥显著的效果。

槲皮素通过介导JNK信号通路抑制线粒体凋亡途径的神经保护作用

目的研究槲皮素(quercetin,Que)通过调节JNK信号通路抑制Aβ25-35引起PC12细胞线粒体损伤的作用机制。方法培养PC12细胞,使用Aβ25-35诱导其构建阿尔茨海默病(Alzheimer′s disease,AD)受损模型,Que、17β-雌二醇(17β-E2)和金雀异黄素(genistein,Gen)进行干预,并设定SP600125(JNK特异性抑制剂)预处理组。Fluo-4 AM染料荧光检测PC12细胞钙离子;Rhodamine123染色液检测PC12细胞线粒体膜电位;Caspase-3活性检测Caspase-3酶活性;免疫荧光检测p-JNK蛋白表达;Western blot法检测ERα、ERβ、p-JNK、JNK、Bcl-W、Bim和Cytochrome C蛋白表达。并使用雌激素受体α/β拮抗剂MPP/PHTPP和SP600125进行干预,探讨Que发挥神经保护介导的分子机制。结果与Aβ25-35组相比,Aβ25-35+Que组能提高线粒体膜电位(P<0.01);降低钙离子浓度(P<0.01)。免疫荧光、Caspase-3检测和Western blot结果显示,与Aβ25-35组相比,Que可以逆转Aβ25-35诱导的ERα表达降低(P<0.01),当加入MPP抑制Que与雌激素受体α结合后,Caspase-3表达增加(P<0.05);Que抑制p-JNK表达(P<0.01);降低促凋亡蛋白Bim的表达(P<0.01),减少Cyt C的释放(P<0.01),促进抗凋亡蛋白Bcl-W的表达(P<0.01),当加入SP600125后,Que对Bcl-W、Bim和Cyt C的作用和SP600125对Aβ25-35诱导PC12细胞线粒体凋亡途径的保护作用机制相同(P<0.01)。结论Que可通过介导JNK信号通路抑制线粒体凋亡,进而发挥神经保护作用。

和厚朴酚通过PI3K/AKT信号通路调节线粒体凋亡对小鼠心肌缺血/再灌注损伤的影响及机制研究

目的探讨和厚朴酚(HK)对心肌缺血/再灌注损伤(MIRI)小鼠心脏的保护作用及其机制。方法2022年6月—2023年7月于陕西中医药大学基础医学院中医诊断实验中心进行实验。78只雄性C57BL/6J小鼠随机分为假手术(Sham)组、MIRI组和MIRI+HK组,每组26只。术前对MIRI+HK组小鼠给予HK(0.2 mg·kg-1·d-1)腹腔注射,Sham组和MIRI组给予等量溶剂,连续14 d。造模术中Sham组仅穿线不结扎,其余2组均结扎左前降支30 min后,解开缝线再灌注2 h,构建MIRI模型,再灌注结束后立即取血,剥离心脏。比较各组血清中肌酸激酶同工酶(CK-MB)和心肌肌钙蛋白T(cTnT)水平;超声心动图检测心功能;2,3,5-三苯基氯化四氮唑染色法计算心肌梗死面积;原位末端标记技术检测细胞凋亡水平;电镜观察线粒体结构损伤情况;Western-blot检测线粒体凋亡和磷酸肌醇-3激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)通路相关蛋白表达。结果与Sham组比较,MIRI组小鼠血清CK-MB、cTnT和左心室收缩末期内径(LVESD)水平及心肌梗死面积、细胞凋亡率升高,左心室射血分数(LVEF)和左心室短轴缩短率(LVFS)降低(P<0.001),心肌细胞线粒体大多肿胀,内外双层膜模糊,嵴畸形且减少或缺失,线粒体凋亡相关蛋白细胞色素(Cyto)-C、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和活化半胱氨酸蛋白酶(Cleaved Caspase-9)表达升高,B淋巴细胞瘤2基因(Bcl-2)、p-AKT/AKT和p-PI3K/PI3K表达降低(P<0.001);与MIRI组比较,MIRI+HK组小鼠血清CK-MB、cTnT和LVESD水平及心肌梗死面积、细胞凋亡率降低,LVEF和LVFS增加(P<0.001),心肌细胞线粒体超微结构有所好转,结构较为完整,Cyto-C、Bax和Cleaved Caspase-9蛋白表达降低,Bcl-2、p-AKT/AKT和p-PI3K/PI3K表达升高(P<0.001)。结论HK可通过激活PI3K/AKT信号通路抑制MIRI诱导的心肌细胞线粒体凋亡,从而发挥心肌保护作用。

miR-182调控线粒体凋亡通路对冠心病模型大鼠心肌组织细胞凋亡的影响

目的 探究微小RNA(miR)-182调控线粒体凋亡通路对冠心病模型大鼠心肌组织细胞凋亡的影响。方法 选取健康SD成年大鼠30只,8~10周龄,15只作为假手术组,15只建立冠心病模型,建模成功后获取建模大鼠心肌组织细胞,经培养、转染后分为上调miR-182a、下调miR-182组、对照组。采用RT-PCR技术检测miR-182、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)相关基因表达,观察3组细胞增殖、凋亡变化,免疫组化法检测心肌组织谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平,Western印迹检测Bcl-2、Bax表达水平。结果 在1、3、6 h与对照组比较,下调miR-182组GSH-PX、SOD、Bcl-2表达水平较高,足细胞凋亡率、细胞增殖密度值、miR-182、MDA、Bax表达水平较低,上调miR-182组GSH-PX、SOD、Bcl-2表达水平较低,足细胞凋亡率、细胞增殖密度值、miR-182、MDA、Bax表达水平较高,差异有统计学意义(P<0.05);与下调miR-182组相比,上调miR-182组GSH-PX、SOD、Bcl-2表达水平较低,足细胞凋亡率、细胞增殖密度值、miR-182、MDA、Bax表达水平较高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 miR-182通过下调表达水平调控线粒体凋亡通路Bcl-2、Bax水平低表达,从而抑制冠心病模型大鼠心肌组织细胞凋亡,对心肌细胞具有一定保护作用。

叶酸修饰脂质体槲皮素经JAK2/STAT3信号通路介导的线粒体凋亡途径诱导三阴性乳腺癌细胞凋亡

目的探讨叶酸修饰脂质体槲皮素对三阴性乳腺癌细胞增殖、凋亡的影响及潜在的调控机制。方法叶酸修饰脂质体槲皮素处理三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231后,CCK-8法检测细胞活力;平板克隆实验检测细胞增殖克隆能力;流式细胞术检测细胞凋亡、细胞活性氧(ROS)水平及线粒体膜电位的变化;Western blot检测酪氨酸蛋白激酶2(JAK2)-信号转导与转录激活因子3(STAT3)信号通路相关蛋白及凋亡相关蛋白的表达水平。结果叶酸修饰脂质体槲皮素抑制MDA-MB-231细胞增殖(P=0.023)、促进其凋亡(P<0.001),促进MDA-MB-231细胞线粒体膜电位坍塌(P=0.003),提升MDA-MB-231细胞内ROS水平(P=0.034),抑制JAK2和STAT3磷酸化水平(P<0.001),下调抗凋亡蛋白Bcl2、Bcl-xL表达(P=0.037,0.028),上调促凋亡蛋白Bax、Bak、Cyt C、Cleaved-Caspase-3表达(P<0.001)。结论叶酸修饰脂质体槲皮素抑制三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖并诱导其凋亡,其作用机制可能与抑制JAK2/STAT3信号通路活化并激活线粒体凋亡途径有关。

基于线粒体凋亡通路探究右美托咪定对心肌缺血再灌注模型大鼠的干预效果

目的 探究右美托咪定对心肌缺血再灌注模型大鼠线粒体凋亡通路的影响。方法 选取40只SPF级雄性大鼠,随机选取10只大鼠作为正常组,剩余30只大鼠采用结扎左冠状动脉前降支法建立心肌缺血再灌注模型,使大鼠心肌缺血30 min,再灌注60 min,最终28只大鼠建模成功,随机分为再灌注组、右美托咪定组各14只。建模后右美托咪定组大鼠尾部注射右美托咪定注射液,正常组、再灌注组大鼠不做任何处理,24 h后观察大鼠变化。多道生理记录仪检测左室收缩压(LVSP)、左室舒张末压(LVEDP)、左室内压下降最大速率(-dp/dt)、左室内压上升最大速率(+dp/dt),酶标分析仪检测白介素-6(IL-6)、C反应蛋白(CRP)、肿瘤坏死因子(TNF)-α,流式细胞仪检测丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD),Western印迹法检测细胞色素(Cyto)C、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(Caspase)-3通路蛋白相对表达量。结果 与正常组相比,再灌注组、右美托咪定组LVSP、-dp/dt、+dp/dt、GSH-Px、SOD水平较低,LVEDP、IL-6、CRP、TNF-α、MDA水平较高,差异有统计学意义(P<0.05);与再灌注组相比,右美托咪定组LVSP、-dp/dt、+dp/dt、GSH-Px、SOD水平较高,LVEDP、IL-6、CRP、TNF-α、MDA水平较低,差异有统计学意义(P<0.05)。与正常组相比,再灌注组、右美托咪定组CytoC、Caspase-3蛋白表达量显著较高(P<0.05);与再灌注组相比,右美托咪定组Cyto C、Caspase-3蛋白表达量显著较低(P<0.05)。结论 使用右美托咪定干预的心肌缺血再灌注大鼠,心脏血流动力学水平提升,炎症因子水平得到调节,抗氧化能力提高,CytoC、Caspase-3蛋白得到调控,从而起到保护心脏的作用。

宰后成熟过程中脂多糖诱导剂对滩羊肌细胞线粒体凋亡信号通路的影响

为探究脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导剂对滩羊肌细胞线粒体信号通路的影响,以6月龄滩羊背最长肌(M longissimus dorsi)为研究对象,分析其4℃成熟0、6、12、24、72 h时pH值、ATP含量、细胞凋亡率、细胞凋亡酶活力、琥珀酸脱氢酶(succinatedehydrogenase,SDH)和柠檬酸合酶(citrate synthase,CS)活力、Bcl-2家族蛋白含量、细胞凋亡因子细胞色素c(cytochrome c,Cyt-c)和半胱氨酸蛋白酶3(cysteinyl aspartate specific proteinase 3,Caspase-3)表达量的变化情况。结果表明,宰后成熟过程中,对照组和LPS诱导处理组滩羊肌肉中细胞凋亡率、Bax/Bcl-2的比值呈显著上升趋势(P<0.05);Caspase-3和Caspase-9活力均呈现先上升后下降趋势,经LPS处理后,滩羊肉骨骼肌中Caspase-3和Caspase-9活力均在任一时间点均高于对照组;pH值、Cyt-c还原水平和线粒体ATP含量整体呈现显著下降趋势(P<0.05);对照组和处理组胞浆Cyt-c相对表达量在宰后12 h较初始水平显著升高,24~72 h内LPS处理组胞浆Cyt-c相对表达量呈现下降趋势;同一时间LPS处理组的Caspase-3活化片段蛋白相对含量均高于对照组。结论:滩羊宰后成熟过程中LPS诱导剂对线粒体信号通路的影响是通过激活Caspase-9和Caspase-3的活性、降低线粒体ATP含量从而导致能量代谢水平降低,进而影响SDH和CS的活性,促使Cyt-c的释放,提高Bax/Bcl-2的比值,最终诱导细胞通过线粒体信号通路发生凋亡。

哈巴苷对急性脑缺血及线粒体介导的Caspase依赖性细胞凋亡信号通路的影响

目的探讨哈巴苷对急性脑缺血及线粒体介导的caspase依赖性细胞凋亡通路的影响。方法采用MCAO法建立小鼠急性脑缺血模型,造模后各组立即尾静脉注射(iv)哈巴苷(4、8、12 mg·kg^(-1))、依达拉奉(3.2 mg·kg^(-1)),模型组及假手术组同法给予等量生理盐水,0.1 mL·(10 g)^(-1)。造模6h后,观测小鼠神经功能评分、脑梗死体积及脑组织形态病理学变化;采用Western blot法测定各组脑组织线粒体中Cyt C及胞质中pro-caspase-3的含量。结果造模6 h后,哈巴苷各剂量组均能明显降低因缺血而增加的小鼠神经功能评分及脑梗死体积(P<0.01,P<0.05);均能不同程度减轻脑组织神经元核固缩、核溶解程度,改善脑组织因缺血造成的病理损伤;能明显上调脑组织线粒体中Cyt C及胞质中pro-caspase-3的表达。结论哈巴苷对急性脑缺血具有保护作用,其保护作用可能与抑制线粒体介导的caspase依赖性细胞凋亡信号通路相关。

葫芦巴碱通过Pink1/Parkin信号通路介导线粒体自噬对OGD/R诱导的神经元凋亡的影响

目的:探究葫芦巴碱通过PTEN诱导性激酶蛋白1(Pink1)/E3泛素连接酶(Parkin)信号通路介导线粒体自噬对氧-糖剥夺/复氧(OGD/R)诱导的神经元凋亡的影响。方法:原代培养大鼠海马神经元,经下调Pink1或葫芦巴碱预处理后通过OGD/R诱导神经元损伤,实验分组包括对照组、OGD/R组、葫芦巴碱组、pLKO空载体组(转染pLKO空载体)、pLKO-Pink1组(转染连接Pink1 shRNA干扰质粒的pLKO载体)、葫芦巴碱+pLKO-Pink1组。Annexin V-FITC/PI双染法测定神经元凋亡率;JC-1法测定线粒体膜电位(MMP);Calcein-AM法测定线粒体膜通透性转换孔(MPTP)开放程度;透射电镜观察自噬小体数量;Western Blot检测线粒体自噬相关蛋白(微管相关蛋白1轻链3Ⅱ(LC3Ⅱ)、Pink1、Parkin)表达。结果:与对照组相比,OGD/R组神经元凋亡率、MPTP开放程度增加,MMP下降,自噬小体数量及LC3-Ⅱ、Pink1、Parkin蛋白表达增加(P<0.05);与OGD/R组相比,葫芦巴碱组神经元凋亡率、MPTP开放程度减少,MMP升高,自噬小体数量及LC3-Ⅱ、Pink1、Parkin蛋白表达增加(P<0.05),pLKO-Pink1组与葫芦巴碱组趋势相反;与葫芦巴碱组相比,葫芦巴碱+pLKO-Pink1组神经元凋亡率、MPTP开放程度增加,MMP下降,自噬小体数量及LC3-Ⅱ、Pink1、Parkin蛋白表达减少(P<0.05)。结论:葫芦巴碱可抑制OGD/R诱导的神经元凋亡,可能通过激活Pink1/Parkin信号通路上调线粒体自噬而实现。

山柰酚通过线粒体凋亡通路诱导三阴性乳腺癌细胞凋亡的机制研究

本文旨在探讨山柰酚对三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231的抑制作用及其可能的分子机制。用不同浓度的山柰酚处理细胞,CCK-8法检测山柰酚对MDA-MB-231和人正常乳腺上皮细胞MCF-10A活力的影响,倒置显微镜观察各组细胞形态变化,克隆形成法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,JC-1染色法检测细胞线粒体膜电位的改变,Western blot检测B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、细胞色素C(Cyt C)和细胞周期蛋白D1(CyclinD1)的蛋白表达,比色法检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3(Caspase-3)以及半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-9(Caspase-9)的活性。结果显示,山柰酚体外可显著抑制MDA-MB-231细胞的增殖,诱导细胞凋亡,且对正常乳腺上皮细胞活力无影响,降低细胞线粒体膜电位,上调Bax、Cyt C的表达,下降Bcl-2和Cyclin D1的表达,增强Caspase-3、Caspase-9活性。结果表明,线粒体凋亡信号通路的激活是山柰酚诱导MDA-MB-231细胞凋亡的途径之一。

补肾生精调和气血法调控Bcl-2相关线粒体凋亡信号通路改善大鼠卵巢储备功能的研究

【目的】探讨补肾生精调和气血法对卵巢储备功能减退(DOR)模型大鼠的干预机制。【方法】将60只性成熟雌性SD大鼠随机分为正常组,模型组,西药组,中药低、中、高剂量组,每组10只。除正常组,其余各组大鼠给予单次腹腔注射环磷酰胺构建DOR模型。于造模次日开始,西药组给予戊酸雌二醇0.105 mg·kg^(-1)·d^(-1)灌胃,中药低、中、高剂量组分别对应给予补肾生精调和气血法中药复方8.075、16.15、32.3 g·kg^(-1)·d^(-1)灌胃,正常组、模型组给予等体积去离子水灌胃,每日1次,连续21 d。给药结束后,采用酶联免疫吸附分析(ELISA)检测血清卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)水平,采用电化学发光法检测血清雌二醇(E2)、抗苗勒管激素(AMH)水平,采用Western Blot法检测卵巢组织血红素氧合酶1(HO-1)、醌氧化还原酶1(NQO-1)、B淋巴细胞瘤2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸蛋白酶3(Caspase-3)和半胱氨酸蛋白酶9(Caspase-9)的蛋白表达水平,采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)法检测卵巢组织HO-1、NQO-1、Bcl-2、Bax、Caspase-3、Caspase-9的mRNA表达水平。【结果】与正常组比较,模型组血清FSH、LH水平升高,E2、AMH水平降低,卵巢组织HO-1、NQO-1、Bcl-2蛋白表达水平下调,Bax、cleaved Caspase-3、Caspase-9、cleaved Caspase-9蛋白表达水平上调,Caspase-3、Caspase-9 mRNA表达水平下调(均P<0.05);与模型组比较,西药组和中药低、中、高剂量组上述各指标得到一定程度的改善,且中药各剂量组各指标的改善效果与西药组相当。【结论】补肾生精调和气血法通过调控Bcl-2相关线粒体凋亡信号通路,抑制卵巢颗粒细胞凋亡,改善大鼠卵巢储备功能。

BARF1表达下调通过活化caspase依赖的线粒体通路诱导EBV阳性胃癌细胞凋亡

目的:研究BARF1表达下调对EBV阳性胃癌细胞凋亡的影响,以及BARF1基因沉默介导细胞凋亡的分子机制。方法:siRNA和NCsiRNA分别转染NUGC3和SNU719细胞,运用Western blot测定细胞中BARF1、Bcl-2、Bax、细胞色素C、caspase 3和caspase 9的蛋白表达;RT-PCR测定BARF1、Bcl-2和Bax mRNA的表达;台盼蓝染色法测定细胞存活率;Annexin V-FITC/PI染色法和流式细胞仪测定细胞凋亡;细胞凋亡因子抗体芯片分析细胞中凋亡相关蛋白的表达;线粒体膜电位检测试剂盒测定线粒体膜电位;免疫共沉淀检测细胞中Apaf-1和caspase 9的相互作用。结果:与空白对照组和阴性对照组相比,BARF1基因沉默显著诱导NUGC3和SNU719细胞凋亡,而线粒体膜电位显著降低。BARF1沉默基因能促进促凋亡蛋白的表达并抑制抗凋亡蛋白的表达,Bcl-2/Bax比例显著降低;而caspase抑制剂能抑制由BARF1基因沉默介导的细胞凋亡。在siRNA转染的细胞中,caspase 3和caspase 9蛋白发生裂解,细胞色素C的浓度显著高于阴性对照组,Apaf-1蛋白与caspase 9蛋白在细胞质中能够发生相互作用。结论:BARF1基因沉默通过线粒体途径调节Bcl-2和Bax蛋白的表达进而诱导NUGC3和SNU719细胞凋亡,并呈caspase通路依赖关系。

线粒体依赖性细胞凋亡通路在胎膜早破中的作用

细胞凋亡在胎膜早破病理过程中起着重要作用^（[1,2]）。线粒体介导的胱天蛋白酶（caspase）激活通路是主要的凋亡通路,由Bcl-2家族蛋白调节,以线粒体外膜通透为特征,随后释放细胞色素C到细胞质,从而激活caspase^（[3]）。有报道显示胎膜早破患者中caspase-3的活性增加,提示人类胎膜的细胞凋亡有可能通过caspase依赖的通路^（[1]）。

川芎嗪抑制mTOR信号通路介导的帽依赖性翻译而诱导HRPC细胞凋亡

目的明确川芎嗪(Ligustrazine,TMP)对激素抵抗性前列腺癌(hormone-refractory prostate cancer,HRPC)细胞PC-3的促凋亡效应并探讨其分子机制,评价TMP对正常前列腺上皮细胞RWPE-1的影响。方法分别用不同终浓度的TMP处理PC-3细胞和RWPE-1细胞48、72 h后,行MTT实验及Annexin V/PI染色法评价TMP对这两种细胞活性及凋亡的影响;Western blot检测TMP对PC-3细胞中mTOR信号通路活化情况及凋亡相关蛋白表达的影响;pull-down及荧光素酶报告基因实验研究TMP对PC-3细胞中翻译起始复合物形成及帽依赖性翻译的影响。结果 TMP对RWPE-1细胞的活性及存活无显著影响,但以剂量依赖及时间依赖的方式抑制PC-3细胞的活性,当TMP浓度≥25μmol/L时,差异具有统计学意义(P<0.05);与0μmol/L处理组相比,50、100μmol/L TMP处理24 h即可显著上调PC-3细胞中Bax/Bcl-2比值及Caspase-3的表达,处理后48 h检测发现PC-3细胞发生明显的凋亡(P<0.01);与0μmol/L处理组相比,50、100μmol/L TMP显著抑制PC-3细胞中哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)及mTOR下游关键蛋白4EBP1和p70S6K的磷酸化,影响翻译起始复合物eIF4F的形成,进而抑制相关蛋白质的帽依赖性翻译及合成。结论 TMP可通过抑制mTOR信号通路的活化来降低HRPC细胞中增殖及抗凋亡相关蛋白的帽依赖性翻译,进而促进其凋亡。

电压依赖性阴离子通道在线粒体依赖性细胞凋亡中作用的研究进展

电压依赖性阴离子通道(VDAC)是线粒体外膜上含量极为丰富的孔状蛋白,是细胞内代谢物分子进出线粒体的必经通道,VDAC的功能状态与线粒体的代谢和功能关系十分密切。VDAC的异常通常会引发线粒体功能紊乱,导致ATP水平或转膜电位下降、细胞色素c释放等凋亡程序的启动。VDAC可与许多物质相互作用而发挥诱导细胞凋亡或抑制细胞凋亡的效应,从而在线粒体依赖性细胞凋亡途径中有着十分重要的作用。VDAC对细胞凋亡的影响机制可应用于药物治疗靶点、外源化学物毒性机制的研究,因此,VDAC的作用是近年来外源化学物所致细胞凋亡机制研究领域中的热点问题。

基于X连锁凋亡抑制蛋白/第二种线粒体衍生半胱天冬酶激活剂通路探讨尼莫地平对脑梗死大鼠神经功能的影响

目的基于X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)/第二种线粒体衍生半胱天冬酶激活剂(Smac)通路探讨尼莫地平对脑梗死大鼠神经功能的影响。方法以线栓法闭塞大鼠大脑中动脉诱导建立大鼠脑梗死模型,随机分为模型组、尼莫地平组(10 mg/kg)、AT-406组(XIAP抑制剂,7 mg/kg)、联合组(尼莫地平联合AT-406),每组12只,另取12只大鼠设定为假手术组,分别给药干预后,以Zea Longa分级法对各组大鼠神经功能缺损进行评分;以Morris水迷宫实验评测各组大鼠学习记忆功能通过比较其跨越原平台次数;以TTC染色检测各组大鼠脑梗死状况;以TUNEL染色评测各组大鼠海马神经元凋亡状况;以试剂盒检测各组大鼠血清促炎因子环氧化酶-2(COX-2)与白细胞介素-18(IL-18)含量;以蛋白免疫印迹法检测各组大鼠脑组织凋亡相关蛋白[B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)]与XIAP/Smac通路相关蛋白(XIAP、Smac)表达状况。结果与假手术组相比,模型组大鼠跨越原平台次数、脑组织Bcl-2与XIAP表达水平显著降低(P<0.05),神经功能缺损评分、脑梗死面积、海马神经元凋亡比率、血清COX-2与IL-18含量、脑组织Bax与Smac表达水平显著升高(P<0.05)。与模型组、联合组分别相比,尼莫地平组大鼠跨越原平台次数、脑组织Bcl-2与XIAP表达水平均升高(P<0.05),神经功能缺损评分、脑梗死面积、海马神经元凋亡比率、血清COX-2与IL-18含量、脑组织Bax与Smac表达水平均降低(P<0.05)。与模型组、联合组分别相比,AT-406组大鼠脑组织跨越原平台次数、脑组织Bcl-2与XIAP表达水平均降低(P<0.05),神经功能缺损评分、脑梗死面积、海马神经元凋亡比率、血清COX-2与IL-18含量、脑组织Bax与Smac表达水平均升高(P<0.05)。结论尼莫地平可通过上调XIAP表达,下调Smac表达,进而抑制炎症,减轻脑梗死大鼠海马神经元凋亡,提升大鼠学习记忆能力,改善其神经功能。

哈巴苷对急性脑缺血小鼠神经细胞及caspase非依赖性凋亡通路的影响

目的研究哈巴苷对急性脑缺血小鼠海马神经细胞、线粒体功能及caspase非依赖性细胞凋亡通路的影响。方法采用大脑中动脉阻塞法(middle cerebral artery occlusion,MCAO)复制小鼠急性脑缺血模型。造模后,各组分别立即尾静脉注射哈巴苷(4、8、12 mg·kg^(-1))、依达拉奉(3.2 mg·kg^(-1)),模型组及假手术组同法给予等量生理盐水(10 m L·kg^(-1))。造模6 h后,采用流式细胞术检测MCAO小鼠海马神经细胞凋亡率及线粒体膜电位;透射电镜观察MCAO小鼠海马神经细胞线粒体内外膜的清晰度、线粒体嵴的完整性、线粒体基质电子密度的高低变化及线粒体肿胀情况;采用Western blot法检测MCAO小鼠脑组织线粒体中AIF及Endo G的蛋白表达;采用q PCR法检测MCAO小鼠海马组织中AIF及Endo G mRNA的表达。结果造模6 h后,与假手术组相比,模型组小鼠脑组织海马神经细胞凋亡率明显增加(P<0.01);海马神经细胞线粒体膜电位明显降低(P<0.01);神经细胞线粒体超微结构受损严重,线粒体结构松散,可见明显肿胀;脑组织线粒体中AIF及Endo G蛋白表达明显降低,线粒体AIF及Endo G蛋白释放增加(P<0.01);海马组织AIF及Endo G mRNA表达明显增加(P<0.01);与模型组相比,哈巴苷各剂量组小鼠脑组织海马神经细胞凋亡率明显降低(P<0.05,P<0.01);海马神经细胞线粒体膜电位明显升高(P<0.01);神经细胞线粒体超微结构明显改善;哈巴苷8、12 mg·kg^(-1)组小鼠脑组织线粒体中AIF及Endo G蛋白表达明显增加,线粒体AIF及Endo G蛋白释放减少(P<0.05,P<0.01),哈巴苷4 mg·kg^(-1)组小鼠脑组织线粒体中Endo G蛋白表达明显增加,线粒体Endo G蛋白释放明显减少(P<0.05);哈巴苷8、12 mg·kg^(-1)组小鼠海马组织AIF及Endo G mRNA表达明显降低(P<0.05,P<0.01)。结论哈巴苷对急性脑缺血有保护作用,其机制可能与保护大脑神经细胞及线粒体生理活性,抑制caspase非依赖性细胞凋亡通路相关。

细胞凋亡及与线粒体电压依赖性阴离子通道1的联系在阿尔茨海默病中的研究进展

阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)是一种以进行性认知功能下降和行为能力受损为特征的中枢神经系统退行性疾病。病理特征主要表现为β-淀粉样蛋白(Aβ)聚集形成老年斑及微管相关蛋白tau蛋白异常高度磷酸化导致神经原纤维缠结(NFTs),也包括突触细胞丢失、异常神经元变性坏死等[1,2]。细胞凋亡主要是一种由基因调控的细胞发生程序化死亡现象,在生物体内细胞凋亡必不可少。胚胎正常发育过程中,生理性细胞凋亡负责清除局部细胞及受损的异常细胞来维持组织细胞稳态。

六价铬诱导的肝细胞线粒体依赖性凋亡中VDAC1的作用

铬(chromium)是一种在工业生产过程中广泛使用的重金属,进入人体后可导致急慢性中毒,具有神经毒性、基因毒性、致癌性和免疫毒性。了解六价铬(hexavalent chromium,Cr(Ⅵ))的细胞毒性,进一步探究Cr(Ⅵ)的毒作用机制,可为防治Cr(Ⅵ)对人群健康的损害提供实验依据。电压依赖性阴离子通道蛋白1(voltage-dependent anion channel-1,VDAC1)参与调控线粒体外膜通透性,影响细胞凋亡;同时VDAC1也是BCL-2家族的重要结合位点,它可与BAX/BAK相互作用形成孔道,使线粒体内的凋亡相关蛋白,如细胞色素C等,进入胞浆,引起细胞凋亡。但VDAC1影响细胞凋亡的确切路径与分子机制,目前尚未完全研究清楚。使用L02人正常肝细胞作为实验对象,通过慢病毒包装法建立VDAC1低表达细胞系,检测在相同浓度Cr(Ⅵ)处理的条件下,与非染毒组相比,不同受试细胞的生存率、凋亡情况、活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)生成量、线粒体功能和凋亡诱导因子(AIF)的变化情况是否存在差异。结果表明,与VDAC1正常表达的细胞相比,VDAC1低表达组在Cr(Ⅵ)染毒的情况下,细胞生存率升高,凋亡率下降,细胞内ROS生成量减少,MPTP活性增加不明显,胞浆内细胞色素C(Cytochrome C,Cyt C)和AIF含量降低。上述研究结果表明VDAC1参与了由六价铬诱导的线粒体依赖性肝细胞凋亡,并且抑制VDAC1的表达可减轻因Cr(Ⅵ)暴露而引起的L02肝细胞损伤。