Bta-miR-677靶向线粒体抗病毒信号蛋白影响Ⅰ型干扰素的生成

旨在探究bta-miR-677调控Ⅰ型干扰素(IFN)表达的分子机制。将bta-miR-677转染MDBK细胞,检测Ⅰ型IFN和干扰素刺激基因(ISGs)的转录水平;随后通过TargetScan预测bta-miR-677的靶基因,双荧光素酶报告基因系统、qRT-PCR和Western blot验证bta-miR-677的靶基因;利用siRNA敲减验证靶基因对Ⅰ型IFN转录的影响。结果显示,过表达bta-miR-677组IFN-α/β的转录水平高于对照组2~4倍(P<0.001),随后检测到6种ISGs(IFI6、OAS1Y、OAS1Z、RSAD2、MX1和MX2)转录量上调2~16倍(P<0.01或P<0.001);反之,抑制表达bta-miR-677组IFN-α/β转录量下调(P<0.01或P<0.05),同时IFI6、OAS1Y、OAS1Z、RSAD2、MX1和MX2转录量下调(P<0.05或P<0.01)。经TargetScan预测和双荧光素酶报告基因系统、qRT-PCR和Western blot检测显示,bta-miR-677可靶向结合线粒体抗病毒信号蛋白(MAVS)的3′-UTR,抑制MAVS蛋白的表达;MAVS基因敲减后发现,IFN-α、IFN-β和6种ISGs转录量上调。研究结果表明,bta-miR-677通过靶向MAVS上调IFN-α/β转录水平,进而提高ISGs的表达量,为基于bta-miR-677研制抗病毒药物提供了重要资料。

丙型肝炎病毒感染过程中其NS3/4A蛋白酶切割线粒体抗病毒信号蛋白的动态过程

已知丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)可通过其蛋白酶NS3/4A切割线粒体抗病毒信号蛋白(mitochondrial antiviral signaling protein,MAVS)来逃逸天然免疫识别,但尚不清楚其切割动力学及切割在抑制干扰素中的作用。本研究旨在细胞模型中探讨HCV感染过程中病毒复制建立及病毒NS3/4A切割MAVS的动态过程,探究NS3/4A切割MAVS对病毒逃逸宿主天然免疫建立感染的贡献。首先构建基于绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的MAVS切割报告系统(GFP-NLS-MAVS-TM462),用HCV Jc1-Gluc感染Huh7.5/GFP-NLS-MAVS-TM462细胞。结果显示,病毒复制早期MAVS切割效率较低;NS3/4A高效切割MAVS发生于HCV复制晚期,且其切割效率与NS3蛋白水平相关。利用带有GFP ypet的HCV报告病毒Jc1-378-1感染Huh7.5/RFP-NLS-MAVS-TM462细胞,在单细胞水平观察HCV感染阳性细胞中MAVS被切割情况,发现HCV复制细胞中仅部分细胞MAVS被切割。进一步研究发现,不同基因型NS3/4A切割MAVS的效率仅与NS3表达水平相关。以上结果提示,HCV蛋白酶NS3/4A切割MAVS依赖NS3/4A蛋白在病毒复制过程中的累积,对在病毒复制早期逃逸宿主天然免疫建立感染可能无显著贡献。

补肾冲剂调控MAVS介导的Ⅰ型干扰素信号通路抗病毒作用机制

目的研究补肾冲剂对MAVS介导的I型干扰素信号通路的影响,探讨补肾冲剂的抗病毒作用机制。方法采用补肾冲剂药物血清干预HepG2.2.15细胞,ELISA法检测细胞培养上清中HBsAg、HBeAg水平,RT-PCR法检测RIG-I、MDA-5、LPG2、IFN-β、TNF-α的mRNA表达水平,Western-blot检测MAVS、IRF-3和p IRF-3的蛋白表达水平。结果与生理盐水组相比,补肾冲剂能够显著抑制HepG2.2.15细胞HBsAg、HBeAg的分泌,上调RIG-I、MDA-5、IFN-β和TNF-αmRNA的表达,下调LPG2 mRNA的表达。RIG-I刺激剂(聚肌胞)预干预后,补肾冲剂能显著上调MAVS的表达,且能明显活化IRF-3。结论补肾冲剂能通过活化MAVS-IRF-3信号通路,诱导IFN-β和TNF-α的表达,从而发挥抗病毒作用。

MAVS介导的抗病毒天然免疫信号通路的调控

先天性免疫通路作为抵御入侵的病原微生物第一道屏障,在宿主抗病毒反应中发挥重要的作用。细胞质中最重要的识别病毒RNA的模式识别受体是维甲酸诱导基因蛋白I和黑色素瘤分化相关基因5,它们有着相同的下游信号接头分子线粒体抗病毒信号蛋白(mitochondrial antiviral-signaling protein,MAVS),MAVS在介导的先天性免疫中起中枢作用。MAVS介导的信号通路的激活是重要的抗病毒反应,但在长期的共存过程中,病毒进化出一系列拮抗MAVS的机制。同时,在静息状态下,为了防止过度免疫反应,细胞还具备一系列调控MAVS的机制。MAVS的精细调控对于行使细胞功能和发挥抗病毒反应至关重要。本文简单介绍了MAVS的结构和功能,总结了细胞对MAVS的转录和翻译后调控,最后阐述了病毒如何通过调控MAVS拮抗宿主先天性免疫,为细胞的免疫调节和控制病毒感染提供新的思路。

线粒体调控先天性免疫机制研究进展

线粒体是真核细胞中参与细胞代谢和细胞程序性死亡的重要的细胞器。除此之外,线粒体还与宿主细胞抗病毒先天性免疫有密切的关系。线粒体首次被证实参与先天性免疫调控是基于线粒体抗病毒信号蛋白(mitochondrial antiviral-signaling protein,MAVS)的发现,MAVS锚定于线粒体,是RIG-I样受体信号传导中的关键接头蛋白。最近,其他先天免疫分子,如NLRX1、TRAF6、NLRP3和IRGM等也被证实与线粒体相关,说明线粒体能够作为先天性免疫的平台发挥抗病毒作用。此外,损伤线粒体可释放一系列损伤相关分子模式,其中线粒体DNA(mt DNA)的释放能够激活TLR9、NLRP3和STING等一系列先天性免疫信号通路。本文简单介绍了线粒体的功能,总结了线粒体如何调控抗病毒先天性免疫,以期为细胞器水平进行病毒防控提供新策略。

RIG-Ⅰ样受体信号传导通路与调控机制研究进展

视黄酸诱导基因Ⅰ(RIG-Ⅰ)为RLRs受体家族的成员,是比较关键的细胞质内病原体识别受体,可识别细胞内的单链、双链等RNA病毒成分,被激活的RIG-Ⅰ受体及其CARD在TRIM25的作用下连接泛素链使其寡聚化,通过与线粒体抗病毒信号蛋白(MAVS)相互作用,激活MAVS及下游转录因子IRF3和NF-κB,从而诱导Ⅰ型干扰素和炎性因子的表达,最终介导宿主的抗病毒免疫应答。鉴于RIG-Ⅰ持续激活可导致炎性因子对自身细胞的损伤,因此RIG-Ⅰ样受体信号通路受到宿主严格的调控。而某些病毒为逃避宿主细胞的免疫应答,进化出多种机制靶向调节RIG-Ⅰ及MAVS,从而阻断信号通路。论文从RIG-Ⅰ识别病毒机制、激活下游信号传导、宿主细胞对信号传导途径的调控以及病毒逃避机制等方面重点阐述RIG-Ⅰ所介导的天然免疫反应。

运动应激介导线粒体DAMP对先天性免疫的调控作用研究进展

线粒体是先天性免疫的关键调控者,具体表现为:线粒体可以通过释放多种线粒体损伤相关分子模式(damageassociated molecular patterns,DAMPs)来诱发先天性免疫应答,如线粒体DNA(mitochondrial DNA,mtDNA)、线粒体转录因子A(mitochondrial transcription factor A,TFAM)、线粒体N-甲酰肽(mitochondrial N-formyl peptides,F-MITs)、ATP等.然而,病毒也利用相应的机制抑制线粒体DAMPs诱导的先天性免疫.众所周知,适度的运动对机体免疫系统有着积极健康的影响,而大强度运动反之.再者,运动又与线粒体的关系密切.因此,运动很可能通过线粒体DAMPs的释放来调控先天性免疫.本文综述了线粒体DAMPs与先天性免疫的联系,并探讨了运动在其中所扮演的角色,以期从线粒体的视角为运动对先天性免疫的调控机制提供新的研究思路.

H5N1禽流感病毒感染豚鼠体内线粒体抗病毒信号蛋白SYBR GreenⅠ相对荧光定量PCR检测方法的建立及应用

目的建立H5N1禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)感染豚鼠体内线粒体抗病毒信号蛋白(mitochondrial antiviral signaling protein,MAVS)SYBR GreenⅠ相对荧光定量PCR检测方法,并检测H5N1 AIV感染前、后豚鼠肺脏组织中MAVS的表达水平。方法提取豚鼠肺脏组织RNA,反转录合成cDNA,将cDNA模板按10倍系列稀释为9个浓度(1.00 E+10~1.00 E+02 copies/μl),进行PCR扩增。以β-actin为内参,建立标准曲线,比较两基因的扩增效率,验证该方法的引物特异性、重复性及灵敏度。同时用该方法检测H5N1 AIV攻毒前、后豚鼠肺脏组织中MAVS的表达水平。结果 c DNA模板最佳稀释度范围为1.00 E+09~1.00 E+04。豚鼠MAVS和β-actin基因的标准曲线斜率差值<0.1,R^2=0.999,扩增效率分别为100.2%和100.3%;两基因扩增溶解曲线峰单一,可扩增出清晰的目的条带,且无非特异性扩增;两基因Ct值的变异系数(CV)均<10%;灵敏度为1.00 E+03 copies/μl。感染H5N1 AIV的豚鼠肺脏组织中MAVS的表达水平下调。结论成功建立了H5N1 AIV感染豚鼠体内MAVS的SYBR GreenⅠ相对荧光定量PCR检测方法,并发现H5N1 AIV感染可导致豚鼠体内MAVS表达水平下调。

MAVS ΔTM基因真核表达载体的构建及其在293T细胞中的表达定位

线粒体抗病毒信号蛋白(mitochondria antiviral signaling protein,MAVS)在脊椎动物的抗病毒免疫反应中起着非常重要的作用。为了后续研究MAVS跨膜区氨基酸在病毒侵染宿主细胞时所发挥的作用,通过基因工程方法,构建了MAVS基因C端跨膜结构域缺失突变体(MAVS ΔTM)。首先通过PCR技术扩增MAVS ΔTM基因片段,通过无缝克隆技术连接到pcDNA3.0-Flag载体上,后经酶切鉴定及测序结果表明MAVS ΔTM基因成功克隆到pcDNA3.0-Flag载体上,并将重组质粒定名pcDNA3.0-Flag-MAVS ΔTM。将重组质粒pcDNA3.0-Flag-MAVS ΔTM转染至人肾上皮细胞(HEK-293T)细胞中,利用蛋白免疫印迹实验和间接免疫荧光技术检测pcDNA3.0-Flag-MAVS ΔTM的表达以及定位情况。结果显示,pcDNA3.0-Flag-MAVS ΔTM在293T细胞中成功表达,并且均匀分布于细胞中。研究将为进一步研究MAVS蛋白跨膜区氨基酸的功能奠定基础。

乙型肝炎表面抗原阳性母亲乙型肝炎病毒DNA载量和婴儿出生时MAVS信号通路对婴儿接种乙型肝炎疫苗无/弱应答的影响

目的探讨乙型肝炎(乙肝)表面抗原(Hepatitis B surface antigen,HBsAg)阳性母亲乙肝病毒(Hepatitis B virus,HBV)DNA载量和婴儿出生时线粒体抗病毒信号蛋白(Mitochondrial antiviral signaling protein,MAVS)信号通路对婴儿接种乙肝疫苗(Hepatitis B vaccine,HepB)无/弱应答的影响。方法选择2019年11月至2022年6月太原市某医院分娩的HBsAg阳性母亲及其婴儿,检测母亲HBV DNA载量、婴儿出生时脐血免疫细胞比例和MAVS信号通路蛋白表达百分比、婴儿乙肝免疫球蛋白和HepB全程接种后1-2月血清乙肝表面抗体(Hepatitis B surface antibody,HBsAb)。采用多因素Logistic回归模型分析HBV DNA和MAVS信号通路对婴儿接种HepB无/弱应答的影响。结果婴儿HepB全程接种后无/弱应答率为14.38%(22/153)。多因素Logistic回归分析显示,母亲HBV DNA载量高、脐血MAVS、pIRF3和pNF-κB蛋白表达百分比低、脐血浆细胞比例低的婴儿HepB无/弱应答率高[OR(95%CI):3.94(1.11-14.00)、1.44(1.15-1.73)、4.17(1.16-14.96)、1.94(1.38-2.51)、3.97(1.14-13.79)]。结论HBsAg阳性母亲HBV DNA载量和婴儿出生时MAVS信号通路显著影响婴儿接种HepB的免疫应答;相关检测有助于识别HepB无/弱应答高危人群。

MAVS^(-/-) HeLa细胞系构建及其在干扰素信号通路中应用

[目的]通过CRISPR/Cas9技术构建线粒体抗病毒信号(mitochondrial antiviral signaling, MAVS)基因敲除的HeLa细胞系,并对细胞系的生长特性、及其对干扰素信号通路的影响进行初步鉴定。[方法]针对MAVS外显子设计构建靶向MAVS基因的guide RNA,并克隆至LentiCRISPR v2载体后包装成慢病毒,感染HeLa细胞后经嘌呤霉素筛选获得MAVS基因敲除的HeLa细胞,Western Blotting验证敲除效果,MTT法检测细胞生长活力,应用聚肌胞苷酸(Poly(I:C))刺激并检测细胞内干扰素-β(IFN-β)mRNA水平的变化。[结果]测序结果表明成功构建CRISPR-MAVS-gR质粒,包装成慢病毒并感染HeLa细胞,经筛选获得的细胞内MAVS mRNA及蛋白均不表达,生长速度及活性与野生型HeLa相同,Poly(I:C)刺激后,细胞内IFN-β变化不明显。[结论]通过CRISPR/Cas9技术获得MAVS基因敲除的MAVS^(-/-)HeLa细胞系,Poly(I:C)诱导剂不能在该细胞内激活干扰素信号通路,为后续研究MAVS相关的抗病毒天然免疫信号通路奠定了基础。

线粒体抗病毒信号蛋白真核表达载体的构建及鉴定

目的构建线粒体抗病毒信号蛋白真核表达载体。方法通过聚合酶链反应（PCR）的方法扩增获得线粒体抗病毒信号蛋白基因的完整序列，进而纯化回收后连接到pMD^TM18-T载体上，将pcDNA6／myc．HisA载体和带有目的片段的pMD^TM18-T载体同时进行双酶切，酶切产物过夜连接转化至大肠杆菌JMl09，挑取阳性克隆pcDNA6／myc—HisA—MAVS扩增后，提取重组质粒；利用PCR和核酸测序验证线粒体抗病毒信号蛋白真核表达载体构建的正确性；应用Western blotting的方法检测融合蛋白的表达。结果线粒体抗病毒信号蛋白真核表达载体构建成功，并且该载体能够在OL细胞中表达融合蛋白。结论成功构建线粒体抗病毒信号蛋白真核表达载体，为进一步研究该蛋白的功能和作用机制奠定基础。

线粒体抗病毒信号蛋白与RNA病毒的相互作用

天然免疫是宿主细胞在生物进化过程中形成的抵御外来侵袭的第一道防线。病毒感染后通过信号转导机制引发机体免疫反应,线粒体抗病毒信号蛋白(MAVS)作为天然免疫信号通路的重要接头蛋白,可以接收上游Toll样受体(TLR)和维甲酸诱导基因I(RIG-I)受体(RLRs)等识别RNA病毒并传递信号,活化下游NF-κB和IRF3/7相关信号通路,从而激活干扰素表达,介导天然免疫相关信号通路。RNA病毒在长期进化过程中针对MAVS也形成了一系列免疫逃逸策略。本综述介绍了MAVS的发现及结构,并对MAVS抗RNA病毒的作用及病毒对MAVS的负调控进行综述,旨在为相关研究提供帮助。

慢性乙型肝炎孕妇胎盘组织视黄酸诱导基因-Ⅰ和线粒体抗病毒信号蛋白的表达及意义

目的探讨孕妇胎盘组织中视黄酸诱导基因-Ⅰ(RIG-Ⅰ)、线粒体抗病毒信号蛋白(MAVS)的表达与乙型肝炎病毒(HBV)持续感染的关系。方法选取2015年5-10月深圳市福田区妇幼保健院产科收治的20例乙型肝炎病毒e抗原(HBe Ag)阳性和22例HBe Ag阴性慢性乙型肝炎孕妇为研究对象,另选取同期在该院孕检的正常孕妇22例作为对照组。采用实时荧光定量(RT-PCR)检测胎盘组织中RIG-Ⅰ和MAVS mRNA水平,采用RT-PCR、微粒子酶免疫分析法(MEIA)和酶联免疫吸附法(ELISA)分别检测其血清HBV DNA、HBe Ag及IFN-β水平。结果 HBe Ag阳性组孕妇胎盘组织中RIG-Ⅰ和MAVS mRNA水平明显低于正常对照组和HBe Ag阴性组,血清HBe Ag和HBV DNA水平明显高于正常对照组和HBe Ag阴性组,血清IFN-β水平显著低于正常对照组和HBe Ag阴性组,差异均有统计学意义(均P<0.01)。胎盘组织中RIG-Ⅰ、MAVS mRNA表达及外周血IFN-β水平与HBe Ag均呈负相关关系(r=-0.628,-0.675,-0.583,均P<0.05)。结论慢性乙型肝炎孕妇胎盘组织中RIG-Ⅰ、MAVS mRNA可能与HBV持续感染相关。HBe Ag对RIG-Ⅰ、MAVS和IFN-β表达起负调控作用。

RNA病毒逃避天然免疫机制的研究新进展

病毒感染后通过信号转导引发机体免疫反应。环鸟苷酸-腺苷酸合成酶(c GAS)识别病毒DNA,与干扰素基因刺激蛋白(STING)相互作用,介导产生1型干扰素(IFN1)。维甲酸诱导基因1(RIG-1)受体识别病毒RNA,通过线粒体抗病毒信号蛋白(MAVS)引发RIG-1信号通路,激活IFN1。STING不仅可以作为DNA病毒信号通路蛋白,还可与MAVS相互作用,参与RNA病毒信号通路。然而,登革病毒、丙型肝炎病毒等RNA病毒的蛋白酶通过与STING相互作用逃逸免疫系统监视,抑制IFN产生。本文对STING与MAVS的相互作用机制,以及RNA病毒通过STING逃逸免疫系统监视进行综述,以期为研究病毒逃逸天然免疫调节机制提供新思路。

视黄酸诱导基因1样受体(RLR)识别和调控的研究进展

天然免疫系统通过模式识别受体(PRR)识别病毒、细菌等病原体的病原体相关分子模式(PAMP),进而启动天然免疫反应、帮助机体清除入侵病原体。视黄酸诱导基因1(RIG-1)样受体(RLR)是PRR中具有DEx D/H-box RNA解螺旋酶结构域的一类受体,目前发现的RLR包括视黄酸诱导基因1(RIG-1/DDX58)、黑素瘤分化相关分子5(MDA5/IFIH1)和遗传学和生理学实验室蛋白2(LGP2/DHX58)。它们参与多种机体生理和病理过程,如抗病毒反应、自身免疫性疾病、肿瘤,其主要功能是识别病毒的寡聚核糖核苷酸,激活线粒体抗病毒信号蛋白[MAVS(IPS-1/VISA/cardif)]等关键接头分子,最终导致转录因子干扰素诱导因子3(IRF3)和核因子κB(NF-κB)活化,诱导1型干扰素和炎性细胞因子,从而介导宿主抗病毒免疫。本文重点阐述RLR在抗病毒免疫反应中识别RNA机制的研究进展。

ADAR2通过编辑MAVS基因的3'UTR降低其在细胞中的表达

目的探讨ADAR2在细胞中对线粒体抗病毒信号蛋白MAVS表达的影响及其机制。方法用RT-qRCR检测ADAR家族在细胞中的表达、ADAR2质粒过表达效果以及MAVS的表达;焦磷酸测序验证ADAR2对MAVS的3'UTR区域位点的编辑;双荧光素酶报告质粒检测荧光素酶的相对表达;Western blot检测ADAR2和MAVS蛋白的表达。结果 ADAR家族中ADAR1丰度最高,其次ADAR2也有表达,而ADAR3的表达量很低,几乎检测不到(P<0.05);ADAR2对MAVS的3'UTR区域上的chr20:3869744位点发挥RNA编辑作用(P<0.001);MAVS的3'UTR编辑位点上,编辑型G比正常型A的荧光素酶活性显著降低(P<0.01);在转录和翻译水平,ADAR2都显著降低了MAVS的表达(P<0.05)。结论 ADAR2通过编辑MAVS的3'UTR上的chr20:3869744位点,使其发生A→G的替换,进而抑制了MAVS基因的表达。

非洲猪瘟病毒MGF360-14L靶向MAVS抑制Ⅰ型干扰素的产生

本研究旨在探究非洲猪瘟病毒(African swine fever virus, ASFV)多基因家族成员MGF360-14L对Ⅰ型干扰素(IFN)的抑制作用及其作用机制。通过双荧光素酶试验检测MGF360-14L对线粒体抗病毒信号蛋白(MAVS)诱导的干扰素β(IFN-β)启动子活性的影响,免疫共沉淀和激光共聚焦检测MGF360-14L与MAVS的互作关系,及Western blot分析MGF360-14L对MAVS和TRIM21诱导的TBK1和IRF3磷酸化的影响。结果表明,ASFV非结构蛋白MGF360-14L抑制MAVS诱导的IFN-β启动子活性。MGF360-14L能够与MAVS互作,并且对MAVS和TRIM21诱导的TBK1和IRF3磷酸化具有抑制作用。此外,当过表达MGF360-14L时,MGF360-14L蛋白与TRIM21竞争结合MAVS,抑制TRIM21对MAVS的泛素化作用,从而降低IFN-β的水平。综上所述,MGF360-14L可能通过竞争性结合MAVS,抑制TRIM21对MAVS的泛素化,从而下调Ⅰ型IFN的产生。研究结果为探究ASFV的免疫逃逸机制提供了新线索。

马MAVS MAb的制备及其应用于EIAV感染机制的初步研究

线粒体抗病毒信号蛋白(MAVS)是机体先天免疫系统中维甲酸诱导基因I(RIG-I)信号通路唯一的接头蛋白,该蛋白对I型干扰素(IFN-I)的激活以及促炎因子的表达至关重要。因人源MAVS抗体不能识别马MAVS(eqMAVS)蛋白,限制了对马属动物病原体调控RIG-I信号通路的研究。为了制备eqMAVS单克隆抗体(MAb),本研究利用PCR方法克隆缺失跨膜域的eqMAVS(eqMAVSΔTM)并构建重组蛋白表达质粒pET32a-eqMAVSΔTM-his、pGEX-6p-1-eqMAVSΔTM-GST,转化大肠杆菌Rosetta(DE3)并经IPTG诱导后,分别利用His和GST亲和层析柱纯化,结果获得eqMAVSΔTM-his蛋白和eqMAVSΔTM-GST蛋白。以eqMAVSΔTM-his蛋白为免疫原免疫6周龄BALB/c小鼠,经常规免疫程序后进行杂交瘤细胞融合,并以eqMAVSΔTM-GST为检测蛋白以筛选杂交瘤细胞。结果显示共获得两株阳性杂交瘤细胞(4E9、3C4)。选用4E9制备腹水并将MAb纯化后,利用SDS-PAGE鉴定纯化的MAb,结果显示,制备的MAb包含重链、轻链,表明MAb纯化成功。对MAb进行亚类鉴定,结果显示其重链均为IgM型,轻链均为kappa型。间接ELISA检测结果显示1 mg/mL MAb的效价可达2×105。将其应用于western blot检测马单核巨噬细胞eMDM和马胎皮肤细胞NBL-6内源性的MAVS和在HEK293T细胞中过表达的eqMAVS;另外,将MAb应用于western blot检测不同剂量EIAV感染NBL-6后内源性eqMAVS蛋白的表达变化。结果显示,该MAb能够特异性识别NBL-6细胞和eMDM细胞内源性表达的eq MAVS蛋白,以及能够特异性识别HEK293T细胞中过表达的eqMAVS蛋白。EIAV感染试验结果显示,随着EIAV感染剂量的增加,内源性eqMAVS蛋白的表达量递减。上述结果表明,本研究制备了eqMAVS的MAb,并利用该MAb首次证明EIAV对eqMAVS的表达具有负调控作用,该MAb为研究EIAV对抗马源RIG-I信号通路的作用机制提供了重要的研究工具。

猪血凝性脑脊髓炎病毒核衣壳蛋白可抑制Ⅰ型干扰素产生

为明确猪血凝性脑脊髓炎病毒(PHEV)合成的病毒蛋白抑制Ⅰ型干扰素(IFN)产生的分子机制,本研究将PHEV接种RAW264.7细胞后利用放线菌酮药物处理,结果显示,随着药物对病毒蛋白合成的抑制,β-干扰素(IFN-β)的生成增多;通过构建不同的病毒蛋白真核表达质粒,转染至HEK293T细胞,经双荧光素酶报告基因系统筛选,发现病毒核衣壳(N)蛋白能抑制IFN-β启动子活性,且证明N蛋白通过干扰素调节因子3(IRF3)或IRF3上游信号分子调控IFN通路;免疫共沉淀分析进一步验证,确定线粒体抗病毒信号蛋白(MAVS)与PHEV N蛋白存在互作,为抑制IFN-β产生的潜在靶标。结果表明,PHEV可通过其自身合成的N蛋白与宿主细胞MAVS相互作用,从而抑制IFN-β产生。本研究对于解析PHEV逃避宿主免疫应答机制具有重要参考意义。