线粒体内膜蛋白17(MPV17)通过阻断ERK通路抑制铁过载小鼠脾脏CD3^(+)T细胞铁死亡

目的探索铁过载对小鼠脾脏损伤的影响及线粒体内膜蛋白17(MPV17)在铁过载小鼠脾脏CD3^(+)T细胞铁死亡中的作用。方法将小鼠随机分为正常饮食组、高铁饮食组、高铁饮食联合铁死亡抑制剂ferrostatin-1(Fer-1)处理组、高铁饮食联合MPV17腺病毒注射组,每组5只。喂食8周后,取脾脏组织并固定,通过组织切片和HE染色法观察脾脏结构,碘化丙啶(PI)染色检测脾脏CD3^(+)T细胞死亡,脂质过氧化荧光探针C11 BODIPY 581/591检测脂质氧化,实时定量PCR检测溶质载体家族7成员11(SLC7A11)及前列腺素内过氧化物合成酶2(PTGS2)mRNA水平,流式细胞术检测M1、M2巨噬细胞比例,ELISA实验检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)及IL-6的含量。同时增加高铁饮食联合细胞外信号调节激酶(ERK)抑制剂处理组、ERK激活剂处理组、β半乳糖苷(β-gal)酶联合ERK激活剂处理组、MPV17联合ERK激活剂处理组,Western blot法检测MPV17、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、磷酸化的ERK(p-ERK)水平,JC-1结合流式细胞术检测线粒体膜电位。结果与正常饮食组相比,高铁饮食组小鼠脾脏红髓形状不规则,白髓结构消失,脾脏CD3^(+)T细胞死亡增多,脂质过氧化物增多,SLC7A11及PTGS2表达升高,血液中M1/M2巨噬细胞比例升高,炎症因子含量升高;经Fer-1处理或过表达MPV17,部分恢复脾脏结构,CD3^(+)T细胞数量及脂质过氧化物减少,SLC7A11及PTGS2表达被抑制,M1/M2巨噬细胞比例及炎症因子的含量降低。高铁饮食导致GPX4表达降低,p-ERK表达升高,抑制ERK部分恢复GPX4表达,激活ERK降低GPX4表达;MPV17抑制ERK部分恢复GPX4表达,MPV17部分恢复因ERK激活导致的线粒体膜电势降低。结论铁过载可诱导小鼠脾脏CD3^(+)T细胞发生铁死亡,MPV17通过阻断ERK信号抑制高铁饮食诱导的脾脏CD3^(+)T细胞铁死亡。

miRNA-17~92基因簇、线粒体融合蛋白2在子宫内膜癌组织中的表达及其临床意义

目的探讨miRNA-17~92(miR-17~92)基因簇及线粒体融合蛋白2(MFN2)蛋白在子宫内膜癌(EC)中的表达及其临床意义。方法收集2008年1月至2014年12月山东第一医科大学第二附属医院72例EC、36例子宫内膜非典型增生患者子宫内膜病变组织及22例因子宫颈上皮内瘤变Ⅲ级行全子宫切除术的正常子宫内膜组织;同时收集所有患者蜡块组织。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测各组织中miR-17~92表达水平,免疫组织化学SP法检测各蜡块组织中MFN2蛋白定位及表达水平。分析miR-17~92、MFN2蛋白与EC患者临床病理特征的关系;采用Kaplan-Meier法绘制miR-17~92、MFN2不同水平患者生存曲线,并行log-rank检验;应用Cox比例风险回归模型进行多因素生存分析。结果miR-17~92在EC、非典型增生及正常子宫内膜组织中相对表达量分别为1.49±0.46、1.01±0.30、0.69±0.20;EC组织中miR-17~92的表达水平高于其他子宫内膜组织,差异均有统计学意义(均P<0.01)。MFN2蛋白在EC、非典型增生、正常子宫内膜组织中的高表达率分别为20.8%(15/72)、39.4%(13/33)、85.0%(17/20);EC组织中MFN2蛋白高表达率低于其他子宫内膜组织,差异均有统计学意义(均P<0.0125)。EC患者中,组织学类型Ⅱ型患者miR-17~92相对表达量高于Ⅰ型患者(P<0.05),肌层浸润深度≥1/2患者miR-17~92相对表达量高于浸润深度<1/2患者(P<0.05);组织学类型Ⅰ型患者MFN2蛋白高表达率高于Ⅱ型患者(P<0.05),国际妇产科联盟(FIGO)分级Ⅰ级患者MFN2蛋白高表达率高于Ⅱ、Ⅲ级患者(P<0.05)。Kaplan-Meier生存分析显示,按EC患者miR-17~92中位相对表达量(1.421)分组时,低表达组(36例)中位总生存(OS)时间未达到,高表达组(36例)为36个月(95%CI 32~42个月),两组间OS差异有统计学意义(P=0.049);MFN2蛋白高表达组(15例)中位OS时间未达到,低表达组(57例)为38个月(95%CI 33~41个月),两组间OS差异有统计学意义(P=0.046)。多因素Cox回归分析显示,miR-17~92、MFN2表达水平为EC患者生存的独立影响因素(HR=3.10,95%CI 1.36~7.07,P=0.007;HR=0.30,95%CI 0.09~0.99,P=0.048)。结论EC组织中miR-17~92高表达、MFN2蛋白低表达,二者可能参与了EC的发生、发展,可作为判断EC患者预后的指标。