黄芩苷灌胃对病毒性心肌炎小鼠心肌细胞凋亡的影响及其机制

目的观察黄芩苷灌胃对病毒性心肌炎小鼠心肌细胞凋亡的影响,并探讨其机制。方法 60只Balb/c小鼠,随机分为对照组,病毒性心肌炎组,黄芩苷低、中、高剂量组及黄芪总黄酮组,各10只。后五组制备病毒性心肌炎模型,黄芩苷低、中、高剂量组在此基础上分别给予黄芩苷20、50、100 mg/(kg·d)灌胃,黄芪总黄酮组在此基础上给予黄芪总黄酮0.35 mg/(kg·d)腹腔注射,对照组仅给予等体积0.9%NaCl溶液腹腔注射,1次/d,连续10 d。采用超声心动图检测各组小鼠心功能指标;采用酶联免疫吸附法检测血清氨基末端脑钠肽前体(NT-proBNP)水平;采用流式细胞仪观察心室肌细胞凋亡以及细胞线粒体膜电位变化情况;采用Western blotting法检测心室肌细胞中Cyt C、Caspase-9、Caspase-3表达情况;采用Caspase-9、Caspase-3活性检测试剂盒观察心室肌细胞Caspase-9、Caspase-3活化情况。结果与对照组比较,病毒性心肌炎组小鼠心功能下降,血清NT-proBNP水平升高,心肌细胞凋亡率升高,心室肌细胞线粒体膜电位降低,心室肌细胞Cyt C、Caspase-9、Caspase-3表达升高,心室肌细胞Caspase-3、Caspase-9活性增强(P均<0.05)。与病毒性心肌炎组比较,黄芩苷低、中、高剂量组及黄芪总黄酮组小鼠心功能好转,血清NT-proBNP水平降低,心肌细胞凋亡率下降,心室肌细胞线粒体膜电位升高,心室肌细胞中Cyt C、Caspase-9、Caspase-3表达降低,心室肌细胞Caspase-3、Caspase-9活性减弱(P均<0.05)。结论黄芩苷灌胃可抑制病毒性心肌炎小鼠心肌细胞凋亡,其机制可能与升高病毒性心肌炎小鼠心肌细胞线粒体膜电位,缓解线粒体损伤,抑制Cyt C/Caspase-9/Caspase-3凋亡信号通路表达与活化有关。

姜黄素诱导视网膜母细胞瘤细胞株SO-Rb50凋亡的研究

目的探究姜黄素对视网膜母细胞瘤细胞株SO-Rb50凋亡的影响及其机制。方法 SO-Rb50细胞株经传代培养后随机分为4组:对照组(未经任何处理)、姜黄素低浓度组(10 mg/L)、中浓度组(20 mg/L)、高浓度组(40mg/L)。采用MTT法分析各组SO-Rb50细胞增殖抑制率;流式细胞术检测细胞凋亡率;实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)和蛋白免疫印迹法(Western Blotting)分析各组细胞中线粒体凋亡信号通路相关蛋白的表达。结果与对照组相比,姜黄素不同浓度组SO-Rb50细胞增殖抑制率、Caspase8 mRNA表达水平、Bax、cleaved caspase-9及cleaved caspase-3蛋白表达水平均显著升高(P <0. 05),中浓度组与高浓度组显著高于低浓度组(P <0. 05),而中浓度组与高浓度组比较差异无统计学意义(P> 0. 05);中浓度组SO-Rb50细胞凋亡率显著高于对照组(P <0. 05);与对照组相比,姜黄素不同浓度组SO-Rb50细胞中COX2 mRNA表达水平及Bcl-2蛋白表达水平均显著降低(P <0. 05),中浓度组与高浓度组显著低于低浓度组(P <0. 05),中浓度组与高浓度组比较差异无统计学意义(P> 0. 05); Hoechst染色显示姜黄素中浓度组SO-Rb50细胞核蓝色荧光明显增强并出现凋亡小体。结论不同剂量的姜黄素通过激活线粒体凋亡信号通路发挥促进SO-Rb50细胞凋亡的过程,但中浓度与高浓度姜黄素作用无显著差异。

解毒凉血方对急性肝衰竭小鼠的治疗作用及机制

目的探讨解毒凉血方对D氨基半乳糖(D-GalN)联合脂多糖(LPS)致急性肝衰竭小鼠的保护作用及机制。方法将30只小鼠随机分为正常组、模型组、解毒凉血方组,每组10只。模型组、解毒凉血方组腹腔注射D-GalN(400 mg/kg)和LPS(0.25 mg/kg)诱导急性肝衰竭模型。解毒凉血方组于造模剂注射后立即给予解毒凉血方500μL灌胃,模型组、正常组给予同体积双蒸水灌胃,造模5 h后心脏取血并留取肝组织样本。采用全自动生化分析仪检测肝功能[包括血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、总胆红素(TBIL)、直接胆红素(DBIL)、白蛋白(ALB)、胆碱酯酶(CHE)],苏木素-伊红(HE)染色观察肝组织病理学变化,原位末端转移酶标记法(TUNEL)检测肝细胞的凋亡率,蛋白免疫印迹法检测肝脏细胞线粒体凋亡通路中Cleaved Caspase-9和Caspase-3、硫酸糖蛋白2(SGP-2)、Bcl-2、Bax蛋白表达,反转录聚合酶链反应检测SGP-2、Bcl-2、Bax mRNA表达。结果与正常组比较,模型组血清ALT、AST、TBIL及DBIL水平高,CHE水平低(P<0.05);肝组织病理损伤明显,凋亡率高(P<0.05);SGP-2、Bax、Cleaved Caspase-9和Caspase-3高表达,Bcl-2低表达(P<0.05)。与模型组比较,解毒凉血方组血清ALT、AST、TBIL及DBIL水平低(P<0.05),肝组织病理损伤轻,肝细胞凋亡率低(P<0.05);SGP-2、Bax、Cleaved Caspase-9、Cleaved Caspase-3呈低表达,Bcl-2高表达(P<0.05)。结论解毒凉血方对D-GalN/LPS诱导的急性肝衰竭小鼠有显著的治疗作用,其作用机制可能与抑制线粒体凋亡信号通路介导的肝细胞凋亡有关。

LIGHT/TNFSF14减轻顺铂诱导的小鼠急性肾损伤及机制

目的研究与单纯疱疹病毒糖蛋白D竞争结合疱疹病毒侵入介体的淋巴毒素类似物(LIGHT)即肿瘤坏死因子超家族蛋白14(TNFSF14)在顺铂诱导的急性肾损伤(Cis-AKI)中的作用并初步探讨其机制.方法选取雄性野生型(WT)和LIGHT敲除(LIGHT^-/-)C57BL/6小鼠,分为WT小鼠生理盐水组、WT小鼠顺铂组、UGHT^-1-小鼠生理盐水组和LIGHT^-1-小鼠顺铂组.其中顺铂组予以单次腹腔注射顺铂(20 mg/kg,200μL),生理盐水组以等体积生理盐水替代.72h后,处死小鼠,眼球取血,同时收集肾脏组织.全自动生化分析仪检测血尿素氮(BUN)及血清肌肝(Scr)水平;HE染色检测肾组织病理学改变,实时定量PCR检测小鼠肾组织中UGHT、肾损伤分子1(阻M-I)、白细胞介素6(IL-6)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-l)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的mRNA水平;免疫组织化学染色法检测肾组织中LIGHT的表达;Western blot法检测肾组织LIGHT、Bc12、BAX、细胞色素C的蛋白水平.结果与生理盐水处理的WT小鼠相比,顺铂处理WT小鼠肾组织LIGHT表达明显升高.与顺铂处理的WT小鼠相比,LIGHT^-/-小鼠顺铀诱导的肾损伤更为严重BUN、Scr升高和肾脏组织损伤更严重;且肾组织IL-6、MCP-1和TNF-α的mRNA以及BAX、细胞色素C的蛋白水平增加,Bc12蛋白水平降低.结论LIGHT在Cis-AKI中具有保护作用,可能与降低炎症因子分泌及减少细胞凋亡有关.

木瓜总三萜对幽门螺杆菌诱导小鼠胃炎的保护作用研究

观察木瓜总三萜对幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)诱导小鼠胃炎保护作用,探寻其可能作用机制。将慢性萎缩性胃炎(chronic atrophic gastritis,CAG)模型制作成功小鼠随机分为模型组、木瓜总三萜不同剂量(50、100 mg·kg^(-1))组和三联疗法组,另取未感染Hp C57BL/6J小鼠作为正常组;治疗组小鼠分别给予相应的药物,每日1次,连续4周。然后取血和胃组织进行血液中活性氧自由基(reactive oxygen species,ROS)、单核细胞趋化蛋白1(monocyte chemotactic protein 1,MCP-1)、角质细胞趋化因子(keratinocyte chemokines,KC)、TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-18、IL-4、IL-10含量,胃组织中LDH、MPO、SOD、GSH-Px、CAT和MDA活性和含量及血液、胃组织和溶酶体中β-葡萄糖醛酸酶、β-半乳糖苷酶、组织蛋白酶B和D活性的检测,HE染色法观察胃组织形态学改变;实时定量PCR法测定胃组织中Toll样受体4(Toll like receptor 4,TLR4)、髓样分化因子(myeloid differentiation factor 88,MyD88)、Bcl-2、Bcl-xl、Bax、Bad mRNA表达,Western blot法测定胃组织中TLR4、MyD88、p-IKKβ、p-IκBα、NOD样受体家族3(NOD-like receptor family 3,NLRP3)、凋亡相关斑点样蛋白(apoptosis-associated speck-like protein,ASC)、pro-caspase-1、caspase-1、硫氧还蛋白互作蛋白(thioredoxin-interacting protein,TXNIP)、pro-IL-1β、pro-IL-18、Bcl-2、Bcl-xl、Bax、Bad、cytochrome C、凋亡酶激活因子(apoptotic protease activating factor-1,Apaf-1)、pro-caspase-9、pro-caspase-3、cleaved-caspase-9、cleaved-caspase-3、聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1[poly(ADP-ribose)polymerase 1,PARP-1]、cleaved-PARP-1及胞浆和胞核中NF-κB p65蛋白表达。结果显示,木瓜总三萜可显著抑制Hp增殖,减轻胃黏膜损伤,改善淋巴细胞浸润和腺体萎缩;降低血液、胃组织中β-葡萄糖醛酸酶、β-半乳糖苷酶、组织蛋白酶B和D活性及溶酶体细胞器胞质中β-葡萄糖醛酸酶、组织蛋白酶D的活性,升高溶酶体细胞器溶酶体中β-葡萄糖醛酸酶、组织蛋白酶D活性;降低血液中ROS、MCP-1、KC、TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-18和胃组织中MDA含量及MPO、LDH活性,升高血液中IL-4、IL-10含量和胃组织中SOD、CAT和GSH-Px活性;下调胃组织中TLR4、MyD88、Bax、Bad mRNA和蛋白表达,下调胃组织中p-IKKβ、p-IκBα、NLRP3、ASC、pro-caspase-1、caspase-1、TXNIP、pro-IL-1β、pro-IL-18、cytochrome C、Apaf-1、cleaved-caspase-9、cleaved-caspase-3、cleaved-PARP-1和胞核中NF-κB p65蛋白表达,降低p-IKKβ/IKKβ和p-IκBα/IκBα比值;上调胃组织中Bcl-2、Bcl-xl mRNA和蛋白表达,升高Bcl-2/Bax和Bcl-xl/Bad比值,上调胃组织中pro-caspase-9、pro-caspase-3和胞浆中NF-κB p65蛋白表达。以上研究表明木瓜总三萜对Hp诱导小鼠CAG有显著保护作用,其机制可能与增强内源性抗氧化系统功能、抑制Hp诱导CAG小鼠氧化应激、炎症反应、纠正溶酶体功能障碍及TLR4/NF-κB/NLRP3炎症小体信号通路炎性激活,进而抑制线粒体介导的细胞凋亡有关。

木瓜总三萜对非甾体抗炎药诱导大鼠小肠损伤的保护作用及机制研究

目的:研究木瓜总三萜对非甾体抗炎药(NSAIDs)诱导小肠损伤模型大鼠内源性超氧化物歧化酶/谷胱甘肽过氧化物酶1/过氧化氢酶(SOD/GPX1/CAT)抗氧化系统、细胞外信号调节激酶/核因子2相关因子2/血红素氧合酶-1(ERK/Nrf2/HO-1)和线粒体凋亡信号通路的影响。方法:实验大鼠随机分为正常组、模型组、木瓜总三萜(25、50和100mg/kg)组和雷贝拉唑肠溶片100mg/kg组,各组大鼠灌胃给予相应的药物,每天1次,连续1周,末次给药后禁食,次日再次给药1次; 1小时后,除正常组外,其余各组灌胃给予吲哚美辛45mg/kg 1次。24小时后取血,进行血液中SOD、GSH-Px、CAT和MPO、MDA水平检测;取小肠组织进行溃疡指数和组织形态学分析;实时定量PCR检测小肠组织中SOD1、SOD2、SOD3、GPX1、CAT、Bcl-2、Bax、Caspase-3、Caspase-9基因表达; Western blot检测小肠组织中ERK1/2、p-ERK1/2、胞浆Nrf2、胞核Nrf2、Bcl-2和Bax蛋白表达。结果:木瓜总三萜(25、50和100mg/kg)可显著降低吲哚美辛诱导小肠黏膜损伤大鼠小肠溃疡指数、病理学评分,改善小肠黏膜溃疡、黏膜及黏膜下层肿胀和炎性浸润,显著升高血液中内源性抗氧化酶活性,显著上调受损小肠组织中SOD1、SOD2、SOD3、GPX1、CAT和p-ERK1/2、胞核Nrf2、HO-1、Bcl-2表达,显著下调Bax和Caspase-3、Caspase-9表达,且随着剂量的增加,其作用效果更明显。结论:木瓜总三萜对NSAIDs诱导大鼠小肠损伤具有较好的保护作用,调节内源性SOD/GPX1/CAT抗氧化系统功能及ERK/Nrf2/HO-1和线粒体凋亡信号通路可能是其作用机制之一。

缺血预适应在中低温低流量神经保护中的作用机制

目的探讨大鼠缺血预适应在中低温低流量(MHLF)神经保护中的作用机理。方法60只雄性SD大鼠随机均分为三组:手术组在中低温下夹闭颈总动脉2h后重新开放,模拟MHLF过程;假手术组不夹闭颈总动脉;缺血预适应组先夹闭双侧颈总动脉2min,然后开放5min,重复4次后再与手术组相同操作。采用免疫组化、RT-PCR和Western blot检测各组大鼠脑细胞在不同时间点的凋亡水平及线粒体凋亡信号通路各节点蛋白表达的变化。结果与手术组相比,缺血预适应组在不同时间点的细胞凋亡水平、细胞色素C和Caspase-3的活性下降,线粒体凋亡信号通路中Bcl-2蛋白表达增强,Bax蛋白表达减弱(P<0.05或P<0.01)。结论 MHLF过程中,缺血预适应通过抑制线粒体凋亡信号通路发挥了神经保护作用。