线粒体分裂抑制剂1对多发性硬化小鼠神经营养因子、再生抑制信号通路分子的影响

背景:神经营养因子表达减少和再生抑制因子表达增多是神经损伤的主要机制,前期研究显示线粒体分裂抑制剂1(Mdivi-1)能明显降低多发性硬化模型小鼠的临床症状评分和病理学损伤,然而其对神经保护的作用仍需进一步研究。目的:观察实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠模型神经元和轴突的状态,评估线粒体分裂抑制剂1的神经保护作用。方法:C57BL/6小鼠经髓鞘少突胶质细胞糖蛋白第35-55位肽片段(MOG35-55)免疫制备实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠模型,随机分为模型对照组和线粒体分裂抑制剂1干预组。于免疫后第28天麻醉后处死小鼠,免疫荧光染色分析脊髓组织中神经元胞体和突触的状态、动力相关蛋白1磷酸化水平以及神经营养因子、再生抑制因子及其信号通路分子的表达。结果与结论:①与模型对照组相比,线粒体分裂抑制剂1干预组小鼠脊髓组织神经元特异性核蛋白标记的神经元数量较多、胞体形态完整,突触素标记的突触明显更长,中分子质量神经丝蛋白缺失率明显较低,动力相关蛋白1磷酸化水平较低;②线粒体分裂抑制剂1干预可明显促进胶质细胞源性神经营养因子、睫状神经营养因子和脑源性神经营养因子的表达;③线粒体分裂抑制剂1干预可明显降低小鼠髓鞘相关糖蛋白、轴突生长抑制因子A、轴突生长抑制因子蛋白受体、p75神经营养因子蛋白受体、Rho相关蛋白激酶Ⅱ的表达量;④提示线粒体分裂抑制剂1能抑制动力相关蛋白1磷酸化水平,提高神经营养因子蛋白的表达水平,降低再生抑制因子及相关信号通路分子蛋白的表达,进而降低脊髓神经元胞体、轴突和囊胞的损伤。

线粒体分裂抑制剂对大鼠急性脊髓损伤后线粒体形态与功能的影响

目的 旨在检测选择性线粒体分裂抑制剂-1（Mdivi-1）预处理对大鼠急性脊髓损伤（ASCI）后线粒体形态,线粒体膜电位（MMP）及线粒体ATP含量的影响。方法 成年雌性SD大鼠72只,体重250~300 g,采用随机数字表法,将大鼠随机分为3组（n=24）：假手术组（Sham组）、单纯脊髓损伤组（SCI组）和Mdivi-1预处理组（1.20 mg/kg,Mdivi-1组）,每组24只。SCI组和Mdivi-1组大鼠采用Allen’s方法制备ASCI模型,Mdi-vi-1组和SCI组大鼠在脊髓打击之前15 min经尾静脉分别给予Mdivi-1或等容量二甲基亚砜（DMSO）。每组大鼠再分为两个亚组,分别于脊髓暴露或者打击后的3和12 h处死,取出脊髓T9-11,采用透射电子显微镜检测线粒体形态,用荧光显微镜和荧光分光光度计检测MMP变化,用荧光分光度计检测线粒体ATP含量的变化。结果 与Sham组相比,SCI 3 h组时,线粒体数目明显减少（〈0.01）,截面积明显增大（〈0.01）,但MMP和线粒体ATP含量无明显变化;SCI 12 h组时,线粒体数目明显增多（〈0.01）,截面积明显减小（〈0.01）,但MMP和线粒体ATP含量明显减低（〈0.01）。与SCI组相比,Mdivi-1 3 h组时,线粒体数目、截面积及MMP和线粒体ATP含量无明显变化;而Mdivi-1 12 h组时,线粒体数目明显减少（〈0.01）,截面积明显增大（〈0.01）,MMP和线粒体ATP含量明显升高（〈0.01）。结论 选择性线粒体分裂抑制剂-Mdivi-1能有效抑制ASCI后线粒体分裂和MMP降低,增加线粒体中ATP的合成,从而保护了线粒体功能。

线粒体分裂蛋白抑制剂对β淀粉样蛋白诱导小胶质细胞凋亡的作用及机制

目的:研究线粒体分裂蛋白抑制剂对β淀粉样蛋白(Aβ)诱导小胶质细胞凋亡的作用及其机制。方法:随机将BV-2小胶质细胞分为con组、Aβ组、mdi组和Aβ+mdi组,con组不做特殊处理,mdi组培养基中加入10μmol/L mdivi-1,Aβ组培养基中加入20μmol/L Aβ,Aβ+mdi组培养基分别加入2、5、10、20μmol/L mdivi-1和20μmol/L Aβ。采用MTT法检测细胞存活率,TUNEL染色检测细胞凋亡,Western blot法检测Drp1、CytC和Caspase-3蛋白水平变化,RT-PCR法检测CA11b mRNA表达变化。结果:与con组相比,Aβ组的细胞存活率明显下降,凋亡显著增加,CA11b mRNA上升,线粒体Drp1、细胞浆CytC和激活的Caspase-3增加,差异有统计学意义(P<0.05);与Aβ组相比,Aβ+mdi组的细胞存活率明显上升,凋亡显著减少,CA11b mRNA下降,线粒体Drp1、细胞浆CytC和激活的Caspase-3减少,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:线粒体分裂蛋白抑制剂对Aβ诱导小胶质细胞凋亡有保护作用,其机制可能为抑制线粒体/CytC/Caspase-3凋亡途径。

线粒体分裂蛋白抑制剂对癫痫大鼠海马神经元凋亡的影响

目的:研究线粒体分裂蛋白抑制剂(mitochondrial division inhibitor,Mdivi-1)对癫痫大鼠海马神经元凋亡的影响及机制。方法:121只雄性SD大鼠随机分成4组,分别为对照(CON)组、PILO组、PILO+DMSO组和PILO+Mdivi-1组。观察各组大鼠行为学改变,并分别采用尼氏染色法及TUNEL法检测神经元损伤及凋亡,Western blot法检测动力相关蛋白1(dynamin-releted protein 1,Drp1)和半胱天冬酶3(caspase-3)表达水平。结果:Mdivi-1组较PILO组致痫成功率降低(P>0.05),海马神经元损伤显著减轻(P<0.05)。Mdivi-1明显降低癫痫持续状态(status epilepticus,SE)引起的海马神经元凋亡和caspase-3激活(P<0.05)。结论:Mdivi-1对癫痫大鼠海马神经元凋亡有明显的抑制作用,其机制可能是抑制caspase-3激活。

线粒体分裂蛋白抑制剂对小胶质细胞氧化损伤的保护作用

目的:研究线粒体分裂蛋白抑制剂(mdivi-1)能否减轻β淀粉样蛋白(Aβ)诱导的体外原代培养小鼠小胶质细胞的氧化应激损伤。方法:随机将体外原代培养BALB/C小鼠小胶质细胞分为con组、Aβ组、mdi组和Aβ+mdi组,con组不予处理,Aβ组中加入Aβ,mdi组中加入mdivi-1,Aβ+mdi组分别加入2、5、10、20μmol/L mdivi-1后1 h加入Aβ。分别检测小胶质细胞存活率及凋亡、线粒体膜电位、丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性、8-羟基脱氧鸟苷(8-OHd G)含量。结果:与con组相比,Aβ组小胶质细胞存活率下降,凋亡增加,线粒体膜电位下降,MDA和8-OHd G含量升高,SOD活性下降,差异有统计学意义(P<0.05);与Aβ组相比,Aβ+mdi组小胶质细胞存活率上升,凋亡减少,线粒体膜电位增加,细胞内MDA和8-OHd G水平下降,SOD活性上升,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:mdivi-1对Aβ诱导的体外原代培养小胶质细胞氧化应激损伤具有保护作用。

浅低温联合线粒体分裂抑制剂减轻全脑缺血-再灌注后线粒体损伤

目的观察浅低温联合线粒体分裂抑制剂(mitochondrial division inhibitor 1,Mdivi-1)对大鼠海马缺血-再灌注(ischemia-reperfusion,IR)损伤后线粒体的影响。方法健康清洁级雄性SD大鼠40只,体重280~320g,采用随机数字表法分为五组:假手术组(Sham组)、全脑IR组(IR组)、浅低温组(H组)、线粒体分裂抑制剂组(M组)和浅低温联合线粒体分裂抑制剂组(HM组),每组8只。采用经食管心脏起搏诱发心跳骤停+心肺复苏方法制备大鼠全脑IR损伤模型,即缺血4min,再灌注6h。Sham组不经历心跳骤停和心肺复苏,其余操作与IR组一致;H组和HM组于再灌注即刻体表降温,15min之内将直肠温度降至32~34℃,自制变温箱维持6h,其余组维持正常体温;M组和HM组于再灌注即刻静脉注射Mdivi-1(1.2 mg/kg),其余组注射等容积二甲基亚砜(DMSO)。于再灌注6h处死大鼠取双侧海马,采用Western blot法检测线粒体发动相关蛋白-1(dynamin-related protein 1,Drp1)和细胞色素C(cytochrome Cyt-C)蛋白含量,电镜下观察海马区椎体细胞中线粒体结构形态。结果 IR组、H组、M组和HM组Drp1和Cyt-C蛋白含量明显高于Sham组(P<0.05);H组、M组和HM组Drp1和Cyt-C蛋白含量明显低于IR组(P<0.05);HM组Drp1和Cyt-C蛋白含量明显低于H组和M组(P<0.05),H组和M组Cyt-C蛋白含量差异无统计学意义。Sham组线粒体呈短棒状,结构清晰完整,其他各组中可见不同程度的线粒体分裂,膜间隙肿胀,基质包含物沉积,空泡形成,嵴模糊或消失,HM组病变较轻。结论浅低温联合线粒体分裂抑制剂可以减轻大鼠全脑缺血-再灌注后线粒体损伤,联合效果优于单独应用。

线粒体复合体Ⅰ呼吸抑制剂的研究

线粒体复合体Ⅰ呼吸抑制剂不仅在医药上有着重要的研究价值,在农药方面也有着特殊的意义。这类药剂的作用机制比较特殊,害虫不易产生抗性,是一类非常有前途的杀虫药剂。从植物,微生物等生物体中发现了许多线粒体复合体Ⅰ呼吸抑制剂,如鱼藤酮、粉蝶霉素A、辣椒碱,番荔枝内酯、myxalamid等,它们可以作为农药的先导化合物进行药物合成。根据不同的作用方式,线粒体复合体Ⅰ呼吸抑制剂可分3种类型,分别以粉蝶霉素A、鱼藤酮、辣椒碱为代表。

Mdivi-1通过抑制少突胶质细胞凋亡信号通路发挥髓鞘保护作用

目的:研究线粒体分裂抑制剂1(Mdivi-1)在实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠髓鞘保护中的作用,探讨Mdivi-1抑制髓鞘变性的机制。方法:小鼠经髓磷脂少突胶质细胞糖蛋白第35~55位肽段(MOG35-55)免疫后,随机分为DMSO模型组和Mdivi-1干预组。于免疫后第28天处死小鼠,行Luxol fast blue染色分析髓鞘丢失情况,免疫荧光染色和TUNEL染色小鼠脊髓组织和体外细胞实验分析Mdivi-1髓鞘保护机制。结果:与DMSO模型组比较,Mdivi-1处理明显减少EAE小鼠脊髓组织白质区髓鞘丢失,减少少突胶质细胞凋亡及线粒体凋亡相关蛋白cleaved caspase-3、caspase-9、cytochrome C和Bax的表达;体外MO3.13少突胶质细胞培养实验发现,Mdivi-1可以明显阻止星形孢菌素(staurosporine)处理诱导的线粒体膜电位去极化,减轻细胞损伤,增强细胞活力。结论:Mdivi-1可能通过抑制少突胶质细胞线粒体相关凋亡信号通路发挥髓鞘保护作用。

线粒体分裂抑制剂1对NK细胞活化的影响

目的:观察线粒体分裂抑制剂1(Mdivi-1)对自然杀伤(NK)细胞活化的影响。方法:以人NK细胞系NK-92MI为研究对象,采用CCK-8法筛选Mdivi-1适宜的干预浓度。据此结果,分为对照组、重组人胸腺基质淋细胞生成素(TSLP)组和Mdivi-1低、中、高剂量组。其中,TSLP组以20μg/L TSLP刺激24 h,Mdivi-1组于20μg/L TSLP刺激下以相应浓度Mdivi-1干预24 h。采用RT-qPCR检测Mdivi-1干预后细胞中白细胞介素4(IL-4)、IL-5和干扰素γ(IFN-γ)的mRNA表达;以Western blot分析测定各组细胞IL-4、IL-5和IFN-γ的蛋白表达及JAK2和STAT6的磷酸化水平;以MitoSOX Red染色探查各组细胞的活性氧(ROS)水平。结果:CCK-8结果显示,1、5和10μmol/L为Mdivi-1干预NK-92MI细胞的适宜浓度。RT-qPCR结果显示,与对照组比较,TSLP组细胞IL-4和IL-5的mRNA表达显著升高,IFN-γ的mRNA水平下调(P<0.05);而5和10μmol/L Mdivi-1干预则有效逆转了上述异常变化。Western blot结果显示,与TSLP组比较,5和10μmol/L Mdivi-1组的IL-4表达下调,IFN-γ水平则有所回升,10μmol/L Mdivi-1组的IL-5表达降低(P<0.05)。与TSLP组对比,5和10μmol/L Mdivi-1组的JAK2磷酸化水平降低,10μmol/L Mdivi-1组STAT6的磷酸化水平降低(P<0.05)。同时,5和10μmol/L Mdivi-1干预有效抑制了TSLP刺激下NK-92MI细胞ROS水平的升高。结论:Mdivi-1能有效抑制TSLP刺激所诱导的NK细胞NK2型分化,该效应可能与其对ROS及JAK2/STAT6信号通路的调节作用相关。

线粒体分裂抑制剂在海马神经元缺氧复氧损伤中的保护作用及机制

目的探讨线粒体分裂抑制剂(Mdivi-1)在海马神经元缺氧复氧损伤中的保护作用及机制。方法将体外培养的大鼠海马神经元采用随机数字表法分为正常细胞组(N组)、赋形剂组(V组)、缺血/再灌注组(I/R组)、Mdivi-1组(M组),利用氧糖剥夺法建立海马神经元缺氧复氧模型,缺氧6 h后复氧20 h,测定海马神经元线粒体内钙离子浓度、线粒体分裂相关蛋白(Drp1、Bcl-2、Bax、Cyt C)的表达含量及细胞凋亡率。结果 4组海马神经元线粒体内钙离子浓度比较,差异有统计学意义(P<0.05)。N组、V组海马神经元线粒体内钙离子浓度比较,差异无统计学意义(P>0.05);I/R组海马神经元线粒体内钙离子浓度高于N组、V组(P<0.05)。M组海马神经元线粒体内钙离子浓度低于I/R组(P<0.05)。4组Drp1、Bcl-2、Bax、Cyt C表达量比较,差异有统计学意义(P<0.05)。N组、V组Drp1、Bcl-2、Bax、Cyt C表达量比较,差异无统计学意义(P>0.05)。I/R组Drp1、Bax、Cyt C表达量高于N组、V组,Bcl-2表达量低于N组、V组(P<0.05)。M组Drp1、Bax、Cyt C表达量低于I/R组,Bcl-2表达量高于I/R组(P<0.05)。4组细胞凋亡率比较,差异有统计学意义(P<0.05)。N组、V组细胞凋亡率比较,差异无统计学意义(P>0.05);I/R组细胞凋亡率高于N组、V组(P<0.05)。M组细胞凋亡率低于I/R组(P<0.05)。结论Mdivi-1可降低海马神经元线粒体内钙离子浓度,调控Drp1、Bax、Cyt C、Bcl-2表达,抑制线粒体分裂,降低细胞凋亡,从而起到脑保护作用。

线粒体分裂抑制剂-1在香烟诱导小鼠气道炎症与氧化应激中的作用机制

目的 探索线粒体分裂抑制剂-1(Mdivi-1)在香烟诱导小鼠气道炎症与氧化应激中的作用及相关的作用机制。方法 香烟暴露构建小鼠气道炎症与氧化应激动物模型,腹腔注射Mdivi-1进行干预,收集肺泡灌洗液进行细胞分类计数,ELISA检测肺泡灌洗液炎症因子TNF-α、IL-6及MMP-9水平,生化试剂盒测定肺组织匀浆氧化应激指标MDA含量及SOD的活性,HE染色评估肺组织病理改变。在PubChem数据库中检索Mdivi-1作用靶点基因,对基因进行GO和KEGG分析,Western blot检测小鼠肺组织Drp1和Mfn2的表达变化及相关富集的通路。结果 熏烟诱导小鼠气道中的炎症细胞浸润增加、气道上皮细胞过度增生、气道上皮增厚,增加肺泡灌洗液中总细胞、中性粒细胞、巨噬细胞数量及炎症因子TNF-α、IL-6及MMP-9水平,增强氧化应激反应,而Mdivi-1预处理可以减轻上述改变。生物信息分析显示Mdivi-1潜在作用基因100个,GO分析显示富集到线粒体结构调节、凋亡过程、线粒体自噬等生物过程,KEGG分析显示富集到的主要通路为Tnf、Mtor、Ampk、Adipocytokine及Nod-Like受体信号通路。Western blot显示Mdivi-1干预抑制香烟诱导小鼠肺组织NF-κB信号通路激活,下调香烟诱导的Drp1表达并上调Mfn2表达。结论 Mdivi-1缓解香烟诱导的小鼠气道炎症和氧化应激,其机制可能通过改善线粒体功能和抑制NF-κB信号通路活化实现,Mdivi-1有可能是治疗香烟诱导的气道炎症性疾病的新药物。

线粒体细胞色素c释放抑制剂对大鼠全脑缺血再灌注损伤炎症反应的作用

目的:探讨线粒体细胞色素c抑制剂对大鼠全脑缺血再灌注后脑损伤的作用,分析线粒体乙醛脱氢酶2(ALDH2)和炎症反应在其中的机制。方法:通过四血管阻断法模拟大鼠全脑缺血再灌注损伤(I/R)模型,雄性SD大鼠随机分为假手术组(Sham组)、I/R组、ALDH2激动剂Alda-1+I/R组、Bax介导的线粒体细胞色素c释放抑制剂(Bcb)+I/R组。HE染色观察海马CA1区细胞形态学的变化;免疫组织化学观察海马CA1区ALDH2及炎症小体关键蛋白NLRP3表达水平,Western blotting检测海马CA1区4-HNE、NLRP3、IL-1β、IL-18及ALDH2的蛋白水平变化。结果:与Sham组比较,I/R组再灌注7 d后,I/R组海马CA1区细胞存活率明显下降;与I/R组比较,Alda-1+I/R组、Bcb+I/R组的海马CA1区神经元存活率增高(P<0.01)。与I/R组相比,Bcb+I/R组、Alda-1+I/R组海马CA1区ALDH2蛋白表达增加,海马CA1区NLRP3、IL-1β、IL-18、4-HNE蛋白表达下降(P<0.01)。结论:大鼠全脑缺血再灌注损伤模型中,海马CA1区NLRP3表达增高;Bcb可以通过促进线粒体ALDH2的表达、降低炎症反应发挥保护作用。

线粒体分裂抑制剂Mdivi-1对高原战创伤休克大鼠的保护作用

目的观察线粒体分裂抑制剂(mitochondrial division inhibitor-1,Mdivi-1)对高原战创伤休克的早期救治作用。方法SD大鼠从平原(重庆)急进(空运)至高原(拉萨,海拔3600 m)72 h后,通过脾动脉离断自由出血至平均动脉血压(mean arterial pressure,MAP)降至40 mmHg,建立高原战创伤休克模型。实验分为假手术组、休克组、乳酸林格氏液(Lactate Ringer’s,LR)对照组、0.1和0.5 mg/kg Mdivi-1组。实验分两部分,第一部分大鼠不接受止血处理,仅采用LR或联合0.1、0.5 mg/kg Mdivi-1进行复苏,将MAP维持在50~60 mmHg,观察大鼠血压、失血量、输液量以及存活的变化;第二部分低压复苏1 h后,经彻底止血后进行确定性复苏,观察大鼠失血量、输液量、器官功能、组织氧分压、肺脑含水量以及动物存活情况的变化。结果在不进行止血处理时,采用LR进行低压复苏,大鼠MAP可维持在50~60 mmHg约1 h。而后增加液体输入量,MAP不升高反而进行性降低,且失血量明显增加。Mdivi-1联合低压复苏能将MAP较好地维持在50~60 mmHg约3 h;与LR对照组相比,大鼠失血量、输液量显著减少。低压复苏1 h、行止血及确定性治疗后,单纯LR复苏大鼠的组织氧分压仍在较低水平,同时肺脑含水量增加,重要器官如心、肝和肾脏功能受损严重;而给予0.1或0.5 mg/kg Mdivi-1后大鼠的组织氧分压明显提高,肺脑含水量降低,心、肝和肾脏功能受损明显减轻,与LR对照组相比,大鼠存活明显延长。结论Mdivi-1适用于高原战创伤休克的早期救治,可改善器官功能,延长黄金救治时间窗。

线粒体分裂抑制剂1对胶原诱导性关节炎小鼠疾病进展的抑制作用和机制

目的探讨线粒体分裂抑制剂1(Mdivi-1)对胶原诱导性关节炎(CIA)小鼠疾病进展的抑制作用和机制。方法应用DBA/1小鼠构建CIA小鼠模型,采用随机数字表法分为二甲基亚砜(DMSO)组和Mdivi-1组。DMSO组小鼠给予1%DMSO(DMSO∶0.9%氯化钠注射液=1∶100稀释)腹腔注射,0.5 ml/只;Mdivi-1组小鼠给予Mdivi-1(0.2 mg Mdivi-1溶于5μl DMSO中,然后用0.9%氯化钠注射液稀释100倍)腹腔注射,0.5 ml/只;持续10 d。第28~37天对两组小鼠进行关节炎评分,第38天采用HE染色观察小鼠膝、踝关节滑膜组织炎症细胞浸润程度,免疫组化染色评估两组小鼠关节滑膜组织叉头状转录因子3(Foxp3)、IL-17、IL-10的阳性细胞数目百分比。结果Mdivi-1组小鼠第31、33、34、35、36、37天关节炎评分均低于DMSO组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。Mdivi-1组小鼠膝、踝关节局部滑膜组织炎症程度较DMSO组明显减轻,Foxp3、IL-10的阳性细胞数目百分比均高于DMSO组,IL-17的阳性细胞数目百分比低于DMSO组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论Mdivi-1通过抑制关节滑膜局部Th17的表达,促进调节性T细胞的表达,抑制CIA病变的进展。

Drp1介导线粒体能量代谢拮抗大鼠缺血再灌注肾损伤

目的探讨线粒体动力相关蛋白1(Drp1)介导线粒体能量代谢参与缺血再灌注肾损伤的分子机制。方法实验时间2020年10月14日。8~10周龄雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组、假手术组、模型组和Drp1抑制剂组,每组5只,每只体质量为0.25~0.30 kg。通过手术建立大鼠肾脏缺血再灌注急性肾损伤模型,Drp1抑制剂组大鼠腹腔注射线粒体分裂抑制剂(mitochondrial division inhibitor 1,Mdivi-1)20 mg/kg体质量,其余各组大鼠注射等体积生理盐水,造模24 h留取血清及肾脏组织。比较组间大鼠血肌酐水平、肾组织病理学改变、肾组织细胞凋亡情况、线粒体超微结构、线粒体ATP酶活力,并建立体外HK-2细胞缺氧复氧模型,经处理后JC-1染色法检测细胞线粒体膜电位变化。采用方差分析。结果与假手术组比较,模型组大鼠血肌酐明显升高[(41.12±1.895)μmol/L比(48.68±2.065)μmol/L],肾小管损伤评分升高[(1.29±0.426)分比(6.50±0.577)分],每高倍镜视野下大鼠肾组织细胞凋亡数量增加[(2.40±0.547)个比(10.20±1.095)个],电镜下线粒体损伤更明显,线粒体ATP酶活力降低[(6.38±0.321)U/mg prot比(4.18±0.198)U/mg prot],HK-2细胞缺氧复氧模型中,模型组较假手术组线粒体膜电位降低的细胞比例增多[(9.81±0.251)%比(4.24±0.598)%],差异均有统计学意义(均P<0.05)。与模型组相比,Drp1抑制剂组大鼠血肌酐下降[(48.68±2.065)μmol/L比(43.28±0.895)μmol/L],肾小管损伤评分降低[(6.50±0.577)分比(4.50±0.578)分],每高倍镜视野下大鼠肾组织细胞凋亡数量减少[(10.20±1.095)个比(6.60±1.140)个],线粒体结构损伤减轻,细胞线粒体ATP酶活力增加[(4.18±0.198)U/mg prot比(5.16±0.628)U/mg prot],HK-2细胞缺氧复氧模型中,Drp1抑制剂组较模型组线粒体膜电位降低的细胞比例减少[(5.90±0.360)%比(9.81±0.251)%],差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论选择性抑制Drp1可通过抑制线粒体分裂,有效改善能量代谢障碍,减少细胞凋亡,减轻肾缺血再灌注损伤。

新型喹啉类杀虫杀螨剂Flometoquin及其开发

作为新型的喹啉类杀虫杀螨剂,flometoquin的化学结构新颖、作用机理和位点独特,对缨翅目、蜱螨目、半翅目和小型鳞翅目,以及抗性靶标害虫均有效,且速效性和持效性显著,对有益生物影响小,其产品和开发情况值得关注。

线粒体分裂抑制剂改善大鼠海马神经元缺血再灌注损伤时的能量代谢障碍

目的探讨线粒体分裂抑制剂（mdivi-1）在脑缺血再灌注损伤中对能量代谢的影响。方法将体外培养8d的Wistar大鼠海马神经元分为4组：正常对照组、赋形剂组、mdivi-1组、缺血再灌注损伤组，后两组利用海马神经元氧糖剥夺法建立缺血再灌注损伤模型，mdivi-1组建模前给予mdivi—1预处理40min。缺血6h再灌注20h后应用Western blotting检测各组海马神经元线粒体分裂蛋白1（Drp1）、B细胞淋巴癌／白血病-2（Bcl-2）和Bcl-2相关X蛋白（Bax）的表达水平，应用流式细胞术检测线粒体膜电位。应用酶标仪法检测三磷酸腺苷（ATP）含量及Na^＋．K^＋．ATP酶、Ca^2＋-Mg^2＋-ATP酶活性以及线粒体呼吸链酶复合体Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ活性。结果与正常对照组比较，mdivi-1组和缺血再灌注损伤组Drp1（1．001±0．276；1．985±0．301）、Bax（2．752±0．786；4．225±1．107）表达水平明显升高，Bcl-2（0．749±0．128；0．336±0．109）表达水平明显降低，线粒体膜电位降低的细胞数（72．5％；92．7％）均升高，ATP含量[（74．129±5．773）μmoL／g蛋白；（36．986±5．945）μmoL／g蛋白]及NnKiATP酶活性[（4．348±0．451）U／mg蛋白；（1．709±0．477）U／mg蛋白]、Ca^2＋-Mg^2＋-ATP酶活性[（1．955±0．287）U／mg蛋白；（1．123±0．181）U／mg蛋白]以及线粒体呼吸链酶复合体Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ活性[（15．445±1．699）nmol/（min·mg）、（17．065±1．070）nmol／（min·mg）、（32．123±1．652）nmol／（min·mg）、（2．814±0．180）nmol／（min·mg）；（6．810±1．725）nmol／（min·mg）、（9．473±0．751）nmol／（min·mg）、（23．010±1．716）nmol／（min·mg）、（1．598±0．181）nmol／（min·mg）]均明显降低，差异均有统计学意义（P〈0．05）。与缺血再灌注损伤组比较，mdivi-1组Drpl、Bax表达水平明显减少，Bcl-2表达水平明显升高，线粒体膜电位降低的细胞数减少，ATP含量及NnnATP酶、Ca^2＋-Mg^2＋-ATP酶活性以及线粒体呼吸链酶复合体Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ活性均明显升高，差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论mdivi-1可通过抑制线粒体分裂，有效地改善能量代谢障碍，从而减轻脑缺血再灌注损伤。

线粒体分裂抑制剂对心肺复苏后脑功能及神经元凋亡的影响

目的探讨线粒体分裂抑制剂1（mdivi-1）在复苏后大鼠脑损伤中的作用及其机制。方法将50只健康成年雄性SD大鼠按随机数字表法分为假手术组（Sham组，n=8）、心搏骤停模型组（CA组，n=14）、二甲基亚砜对照组（DMSO组，n=14）和mdivi-1组（n=14）。以窒息法诱导大鼠CA后进行心肺复苏（CPR）；自主循环恢复（ROSC）后，mdivi-1组静脉注射1．2mg／kgmdivi-1进行干预，DMSO组注射等体积0．1％DMSO。复苏后24、48和72h，对各组大鼠进行神经功能缺损评分（NDS）；复苏后72h留取各组大鼠脑组织，苏木素-伊红（HE）染色，观察海马组织病理学改变，并计数正常神经元；采用原位末端缺刻标记法（TUNEL）检测海马组织神经元凋亡；采用蛋白质免疫印迹试验（WesternBlot）检测线粒体和胞质中细胞色素c（Cyt—C）蛋白表达。结果各实验组复苏后NDS评分逐渐升高；CA组复苏24、48、72hNDS评分较Sham组明显降低（分：51．5±3．7比80．0±0．0，59.3±3．6比80．0±0．0，66．7±2．6比80．0±0．0，均P〈0．05）；海马CA1区正常椎体神经元明显减少（个／HP：4．4±1．1比23．1±4．0，P〈0．05），神经元凋亡指数明显增加[（86．9±6．9）％比（3．4±0．8）％，P〈0．05]，线粒体Cyt—C表达明显减少（A值：0．46±0．18比1．00±0．00，P〈0．05），胞质Cyt—C表达明显增加（A值：6．65±0．21比1．00±0．00，P〈0．05）。Mdivi-1组复苏后24h和48hNDS评分较CA组有所提高（分：55．2±3．3比51．5±3．7，64．7±2．4比59．3±3．6，但均P〉0．05），72h时NDS评分明显提高（分：74．5±2.3比66．7±2．6，P〈0．05）；海马CA1区正常椎体神经元明显增加（个／HP：16．2±2．4比4．4±1．1，P〈0．05），神经元凋亡指数明显降低[（42．3±3．9）％比（86．9±6．9）％，P〈0．05]，线粒体Cyt—C表达明显增加（A值：0．83±0．22比0．46±0．18，P〈0．05），胞质Cyt—C表达明显减少（4值：3．84±0．47比6．65±0．21，P〈0．05）。DMSO组与CA组各指标比较差异均无统计学意义。结论mdivi-1可能通过抑制CA—CPR大鼠线粒体途径的Cyt—C释放，以减少神经元凋亡，促进CPR后脑功能恢复。

线粒体分裂抑制剂对脓毒症大鼠器官功能的保护作用

目的观察线粒体分裂抑制剂(Mdivi-1)对脓毒症大鼠器官功能的保护作用。方法采用盲肠结扎穿孔术(CLP)复制大鼠脓毒症模型,将120只体重为200~220g的SD大鼠,随机分成假手术组、脓毒症组、常规治疗组、常规治疗+Mdivi-1(1mg/kg)治疗组(M1)、常规治疗+Mdivi-1(3mg/kg)治疗组(M3),其中常规治疗组在CLP12h后从股静脉给予乳酸林格液输注,同时给予抗生素头孢呋辛钠(100mg/kg)和血管活性药物多巴胺;M1组和M3组是在常规治疗液体中给予Mdivi-11mg/kg和3mg/kg从股静脉输注;脓毒症组在CLP12h后,股动静脉插管后放置;假手术组大鼠除不结扎盲肠和穿孔外,其余操作同模型组。观察各组对脓毒症大鼠肝脏、肾脏、肠道和心脏功能及动物存活时间、存活率的影响。结果与假手术组比较,脓毒症后大鼠的器官功能明显受损,表现为谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、尿素氮(BUN)和肌酐(Cr)、肌钙蛋白T以及D-乳酸在脓毒症后均升高,与假手术组比较,差异有统计学意义;采用输液、抗感染以及血管活性药物常规治疗并不能明显改善大鼠的器官功能;不同浓度(1、3mg/kg)的线粒体分裂抑制剂Mdivi-1联合常规治疗可明显改善肝脏、肾脏、肠道和心脏功能,其中3mg/kg效果更好,与常规治疗组比较,AST为(152.2±11.8比216.5±14.7,P=0.000),ALT为(49.0±3.8比66.3±2.3,P=0.000)、BUN分别为(11.2±1.6比16.1±2.8,P=0.001),Cr为(23.6±2.5比35.7±2.7,P=0.000)、D-乳酸(D-lac)为(1.3±0.1比2.8±0.3,P=0.000);同时可提高组织氧供和氧耗,延长动物存活时间[(60.30±30.82)h比(11.28±20.77)h,P=0.000],提高存活率(8/16比1/16)。结论线粒体分裂抑制剂Mdivi-1对脓毒症大鼠多器官功能有保护作用。