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慢病毒介导shRNA特异性干扰MRPL18基因对胰岛素瘤细胞线粒体能量代谢的影响
1
作者
施孟如
陈琳
+3 位作者
周林双
杨宇
吕建新
李伟
《中国细胞生物学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第10期1389-1396,共8页
为了观察线粒体核糖体蛋白大亚基18(mitochondrial ribosomal proteins L18,MRPL18)基因低表达对小鼠胰岛素瘤细胞(MIN6)线粒体能量代谢的影响,该研究利用慢病毒介导的MRPL18 shRNA特异性干扰MRPL18基因,构建MRPL18基因低表达的MIN6细...
为了观察线粒体核糖体蛋白大亚基18(mitochondrial ribosomal proteins L18,MRPL18)基因低表达对小鼠胰岛素瘤细胞(MIN6)线粒体能量代谢的影响,该研究利用慢病毒介导的MRPL18 shRNA特异性干扰MRPL18基因,构建MRPL18基因低表达的MIN6细胞模型。Real-time PCR和Western blot检测干扰前后MRPL18 mRNA和蛋白质的表达情况。流式细胞仪检测细胞活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平变化。海马生物能量代谢仪检测细胞线粒体功能。高效液相色谱检测细胞ATP、ADP和AMP含量。结果显示:转染MRPL18-shRNA后,MRPL18 mRNA和蛋白质表达均显著降低(P<0.05、P<0.01),细胞ROS明显升高(P<0.05);细胞氧耗率、基础呼吸、最大呼吸和储备呼吸能力显著降低,同时ATP产量和质子漏也减少(P<0.05、P<0.01)。细胞ATP含量和能荷较对照组减少,ADP和AMP含量显著增加(P<0.05、P<0.01)。证实了MRPL18基因表达下调后细胞内发生了代谢障碍。推测MRPL18是影响线粒体功能的关键蛋白质,该蛋白在细胞代谢过程中发挥着重要作用。MRPL18表达下降所建立的线粒体功能障碍的MIN6细胞模型,可用于线粒体糖尿病发病分子机制的研究。
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关键词
线粒体
核糖体
蛋白
大亚基
18
慢病毒
RNA干扰
线粒体
能量代谢
糖尿病
原文传递
mtLSU-巢式PCR检测实验大鼠卡氏肺孢子虫的实验研究
2
作者
张小娟
杨芳芳
+3 位作者
欧阳颐
王鸽
黎学铭
林睿
《热带医学杂志》
CAS
2011年第4期372-374,432,共4页
目的对mtLSU-巢式PCR方法检测大鼠卡氏肺孢子虫的应用价值以及基因序列进行评价。方法采用地塞米松免疫抑制法诱导大鼠感染肺孢子虫;实验组10只,对照组1只;诱导至第7周时收集实验组及对照组大鼠肺组织和支气管肺泡灌洗液(BALF)标本,采用...
目的对mtLSU-巢式PCR方法检测大鼠卡氏肺孢子虫的应用价值以及基因序列进行评价。方法采用地塞米松免疫抑制法诱导大鼠感染肺孢子虫;实验组10只,对照组1只;诱导至第7周时收集实验组及对照组大鼠肺组织和支气管肺泡灌洗液(BALF)标本,采用mtLSU-巢式PCR方法对人源与鼠源肺孢子虫共有的基因进行扩增和序列测定,同时采用镜检法对实验组大鼠肺组织和肺泡灌洗液标本进行检测,评估两种方法的敏感性。结果采用mtLSU-巢式PCR方法对实验感染大鼠肺组织和BAL进行检测,卡氏肺孢子虫DNA阳性率分别为100%(10/10)、90%(9/10)。而GMS染色镜检法检测的阳性率分别为80%(8/10)、60%(6/10)。所测Wistar大鼠卡氏肺孢子虫mtLSU基因序列长度为155bp,与GenBank的大鼠源肺孢子虫(U20170)及人源肺孢子虫(DQ473446)同源性均为100%(154/154、155/155)。结论 mtLSU-巢式PCR方法应用于大鼠卡氏肺孢子虫检测敏感性高,特异性强;获得与人源耶氏肺孢子虫相同的Wistar大鼠卡氏肺孢子虫mtLSU的基因序列。
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关键词
卡氏肺孢子虫
线粒体核糖体大亚基
RNA基因(mtLSU)
巢式PCR
基因序列
原文传递
免疫抑制沙鼠源肺孢子菌的分类地位
3
作者
冯宪敏
魏超君
+2 位作者
Rodney D.Adam
李自慧
卢思奇
《中国科学:生命科学》
CSCD
北大核心
2010年第11期1055-1062,共8页
肺孢子菌能够感染多种哺乳动物的肺脏,并在免疫受抑制的个体引起肺孢子菌肺炎.研究表明,肺孢子菌分离株在系统进化树上分为两大枝,二者所含菌株分别来源于灵长类和啮齿类.基于宿主特异性以及DNA序列和形态学差异,每一分枝内的菌株又可...
肺孢子菌能够感染多种哺乳动物的肺脏,并在免疫受抑制的个体引起肺孢子菌肺炎.研究表明,肺孢子菌分离株在系统进化树上分为两大枝,二者所含菌株分别来源于灵长类和啮齿类.基于宿主特异性以及DNA序列和形态学差异,每一分枝内的菌株又可分为不同的种.本研究采用地塞米松免疫抑制法,导致沙鼠(28/35)肺组织感染.对18S,5.8SrRNA和rRNA内转录间隔区基因序列,以及线粒体核糖体大亚基基因的部分序列分析表明,本实验沙鼠源肺孢子菌与啮齿类动物来源的同属一枝,但明显区别于其他啮齿类动物来源的菌株,应考虑是一个独立的菌种.
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关键词
肺孢子菌
长爪沙鼠
5.8S
核糖体
RNA基因
rRNA基因内转录间隔区
线粒体核糖体大亚基
18S
核糖体
RNA基因
原文传递
巢式PCR法检测大鼠卡氏肺孢子虫的敏感性
4
作者
张小娟
杨芳芳
+3 位作者
欧阳颐
王鸽
林睿
黎学铭
《中国热带医学》
CAS
2011年第4期408-410,共3页
目的探讨mtLSU-巢式PCR法检测大鼠卡氏肺孢子虫的敏感性以及应用于早期检测的可行性。方法大鼠随机分为7组(6组实验组,1组对照组),每组10只,采用地塞米松免疫抑制法诱导实验组大鼠感染肺孢子虫;自第三周开始每周剖杀一组实验鼠,收集第...
目的探讨mtLSU-巢式PCR法检测大鼠卡氏肺孢子虫的敏感性以及应用于早期检测的可行性。方法大鼠随机分为7组(6组实验组,1组对照组),每组10只,采用地塞米松免疫抑制法诱导实验组大鼠感染肺孢子虫;自第三周开始每周剖杀一组实验鼠,收集第三周至第八周实验组大鼠肺组织(LT)和支气管肺泡灌洗液(BAL)标本,同时采用镜检法和mtLSU-巢式PCR法对大鼠肺组织和肺泡灌洗液标本进行检测。结果采用GMS染色镜检法于第五周开始检出肺孢子虫包囊,第六、七周包囊数最多。而采用mtLSU-巢式PCR法对实验感染大鼠LT和BAL进行检测,卡氏肺孢子虫DNA阳性率分别为第三周100%(10/10)、100%(10/10);第四周100%(10/10)、80%(8/10);第五周100%(10/10)、50%(5/10);第六周90%(9/10)、100%(10/10);第七周100%(10/10)、80%(8/10);第八周100%(8/8)、87.5%(7/8)。结论 mtLSU-巢式PCR法可在无症状的实验大鼠中检出卡氏肺孢子虫并且比镜检法早两周,其敏感性明显高于镜检法。
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关键词
卡氏肺孢子虫
线粒体核糖体大亚基
RNA基因(mtLSU)
巢式PCR
敏感性
原文传递
题名
慢病毒介导shRNA特异性干扰MRPL18基因对胰岛素瘤细胞线粒体能量代谢的影响
1
作者
施孟如
陈琳
周林双
杨宇
吕建新
李伟
机构
温州医科大学检验医学院
出处
《中国细胞生物学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第10期1389-1396,共8页
基金
浙江省科技厅公益技术研究项目(批准号:2011C37090)
教育部科技重点项目(批准号:210084)
+1 种基金
浙江省医药卫生平台重点资助计划(批准号:2011ZDA016)
浙江中医药管理局(批准号:2010ZA084)资助的课题~~
文摘
为了观察线粒体核糖体蛋白大亚基18(mitochondrial ribosomal proteins L18,MRPL18)基因低表达对小鼠胰岛素瘤细胞(MIN6)线粒体能量代谢的影响,该研究利用慢病毒介导的MRPL18 shRNA特异性干扰MRPL18基因,构建MRPL18基因低表达的MIN6细胞模型。Real-time PCR和Western blot检测干扰前后MRPL18 mRNA和蛋白质的表达情况。流式细胞仪检测细胞活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平变化。海马生物能量代谢仪检测细胞线粒体功能。高效液相色谱检测细胞ATP、ADP和AMP含量。结果显示:转染MRPL18-shRNA后,MRPL18 mRNA和蛋白质表达均显著降低(P<0.05、P<0.01),细胞ROS明显升高(P<0.05);细胞氧耗率、基础呼吸、最大呼吸和储备呼吸能力显著降低,同时ATP产量和质子漏也减少(P<0.05、P<0.01)。细胞ATP含量和能荷较对照组减少,ADP和AMP含量显著增加(P<0.05、P<0.01)。证实了MRPL18基因表达下调后细胞内发生了代谢障碍。推测MRPL18是影响线粒体功能的关键蛋白质,该蛋白在细胞代谢过程中发挥着重要作用。MRPL18表达下降所建立的线粒体功能障碍的MIN6细胞模型,可用于线粒体糖尿病发病分子机制的研究。
关键词
线粒体
核糖体
蛋白
大亚基
18
慢病毒
RNA干扰
线粒体
能量代谢
糖尿病
Keywords
mitochondrial ribosomal protein L18
lentivirus
RNA interference
mitochondrial energy metabolism
diabetes mellitus
分类号
R587.1 [医药卫生—内分泌]
原文传递
题名
mtLSU-巢式PCR检测实验大鼠卡氏肺孢子虫的实验研究
2
作者
张小娟
杨芳芳
欧阳颐
王鸽
黎学铭
林睿
机构
广西医科大学寄生虫教研室
广西疾病预防控制中心
出处
《热带医学杂志》
CAS
2011年第4期372-374,432,共4页
基金
广西人事厅留学回国人员基金项目(桂人函2008第987号)
广西科技厅重点项目(重200951)
广西科技厅科技攻关项目(桂科攻0816004-39)
文摘
目的对mtLSU-巢式PCR方法检测大鼠卡氏肺孢子虫的应用价值以及基因序列进行评价。方法采用地塞米松免疫抑制法诱导大鼠感染肺孢子虫;实验组10只,对照组1只;诱导至第7周时收集实验组及对照组大鼠肺组织和支气管肺泡灌洗液(BALF)标本,采用mtLSU-巢式PCR方法对人源与鼠源肺孢子虫共有的基因进行扩增和序列测定,同时采用镜检法对实验组大鼠肺组织和肺泡灌洗液标本进行检测,评估两种方法的敏感性。结果采用mtLSU-巢式PCR方法对实验感染大鼠肺组织和BAL进行检测,卡氏肺孢子虫DNA阳性率分别为100%(10/10)、90%(9/10)。而GMS染色镜检法检测的阳性率分别为80%(8/10)、60%(6/10)。所测Wistar大鼠卡氏肺孢子虫mtLSU基因序列长度为155bp,与GenBank的大鼠源肺孢子虫(U20170)及人源肺孢子虫(DQ473446)同源性均为100%(154/154、155/155)。结论 mtLSU-巢式PCR方法应用于大鼠卡氏肺孢子虫检测敏感性高,特异性强;获得与人源耶氏肺孢子虫相同的Wistar大鼠卡氏肺孢子虫mtLSU的基因序列。
关键词
卡氏肺孢子虫
线粒体核糖体大亚基
RNA基因(mtLSU)
巢式PCR
基因序列
Keywords
Pheumocystis carinii
mt-LSU
nested PCR
gene sequence
分类号
R382.3 [医药卫生—医学寄生虫学]
原文传递
题名
免疫抑制沙鼠源肺孢子菌的分类地位
3
作者
冯宪敏
魏超君
Rodney D.Adam
李自慧
卢思奇
机构
吉林医药学院基础医学院病原教研室
首都医科大学寄生虫学教研室
Department of Medicine and Immunobiology
北京结核病胸部肿瘤研究所
出处
《中国科学:生命科学》
CSCD
北大核心
2010年第11期1055-1062,共8页
基金
北京市自然科学基金(批准号:7052009)资助项目
文摘
肺孢子菌能够感染多种哺乳动物的肺脏,并在免疫受抑制的个体引起肺孢子菌肺炎.研究表明,肺孢子菌分离株在系统进化树上分为两大枝,二者所含菌株分别来源于灵长类和啮齿类.基于宿主特异性以及DNA序列和形态学差异,每一分枝内的菌株又可分为不同的种.本研究采用地塞米松免疫抑制法,导致沙鼠(28/35)肺组织感染.对18S,5.8SrRNA和rRNA内转录间隔区基因序列,以及线粒体核糖体大亚基基因的部分序列分析表明,本实验沙鼠源肺孢子菌与啮齿类动物来源的同属一枝,但明显区别于其他啮齿类动物来源的菌株,应考虑是一个独立的菌种.
关键词
肺孢子菌
长爪沙鼠
5.8S
核糖体
RNA基因
rRNA基因内转录间隔区
线粒体核糖体大亚基
18S
核糖体
RNA基因
分类号
Q939 [生物学—微生物学]
原文传递
题名
巢式PCR法检测大鼠卡氏肺孢子虫的敏感性
4
作者
张小娟
杨芳芳
欧阳颐
王鸽
林睿
黎学铭
机构
广西医科大学病原生物学教研室
广西壮族自治区疾病预防控制中心
出处
《中国热带医学》
CAS
2011年第4期408-410,共3页
基金
广西人事厅留学回国人员基金项目(桂人函2008第987号)
广西科技厅重点项目(重200951)
广西科技厅科技攻关项目(桂科攻0816004-39)
文摘
目的探讨mtLSU-巢式PCR法检测大鼠卡氏肺孢子虫的敏感性以及应用于早期检测的可行性。方法大鼠随机分为7组(6组实验组,1组对照组),每组10只,采用地塞米松免疫抑制法诱导实验组大鼠感染肺孢子虫;自第三周开始每周剖杀一组实验鼠,收集第三周至第八周实验组大鼠肺组织(LT)和支气管肺泡灌洗液(BAL)标本,同时采用镜检法和mtLSU-巢式PCR法对大鼠肺组织和肺泡灌洗液标本进行检测。结果采用GMS染色镜检法于第五周开始检出肺孢子虫包囊,第六、七周包囊数最多。而采用mtLSU-巢式PCR法对实验感染大鼠LT和BAL进行检测,卡氏肺孢子虫DNA阳性率分别为第三周100%(10/10)、100%(10/10);第四周100%(10/10)、80%(8/10);第五周100%(10/10)、50%(5/10);第六周90%(9/10)、100%(10/10);第七周100%(10/10)、80%(8/10);第八周100%(8/8)、87.5%(7/8)。结论 mtLSU-巢式PCR法可在无症状的实验大鼠中检出卡氏肺孢子虫并且比镜检法早两周,其敏感性明显高于镜检法。
关键词
卡氏肺孢子虫
线粒体核糖体大亚基
RNA基因(mtLSU)
巢式PCR
敏感性
Keywords
Pheumocystis carinii
mt-LSU
Nested PCR
Sensitivity
分类号
R531.5 [医药卫生—内科学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
慢病毒介导shRNA特异性干扰MRPL18基因对胰岛素瘤细胞线粒体能量代谢的影响
施孟如
陈琳
周林双
杨宇
吕建新
李伟
《中国细胞生物学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2014
0
原文传递
2
mtLSU-巢式PCR检测实验大鼠卡氏肺孢子虫的实验研究
张小娟
杨芳芳
欧阳颐
王鸽
黎学铭
林睿
《热带医学杂志》
CAS
2011
0
原文传递
3
免疫抑制沙鼠源肺孢子菌的分类地位
冯宪敏
魏超君
Rodney D.Adam
李自慧
卢思奇
《中国科学:生命科学》
CSCD
北大核心
2010
0
原文传递
4
巢式PCR法检测大鼠卡氏肺孢子虫的敏感性
张小娟
杨芳芳
欧阳颐
王鸽
林睿
黎学铭
《中国热带医学》
CAS
2011
0
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