肝星状细胞核糖体蛋白S5(RPS5)特异性敲减对肝纤维化的影响

目的 观察特异性敲减肝星状细胞(HSC)内核糖体蛋白S5(RPS5)对大鼠肝纤维化的影响。方法 构建胶质纤维酸性蛋白(GFAP)启动子驱动的RPS5 shRNA腺病毒,分别用AdGFa2-shRPS5及其对照AdGFa2 shNC转染大鼠原代HSC和肝细胞,通过蛋白印迹法和实时PCR测定RPS5、α-SMA和Ⅰ型胶原表达情况;采用二甲基亚硝胺(DMN)和胆管结扎术(BDL)的方法建立大鼠肝纤维化模型,尾静脉注射腺病毒特异性敲减肝内HSC的RPS5水平。肝组织切片HE染色分析病理改变情况;羟脯氨酸含量测定、切片天狼星红和Masson染色评价胶原沉积情况;免疫组织化学染色检测α-SMA和RPS5的表达情况。结果 AdGFa2-shRPS5能够特异性敲减HSC中的RPS5表达水平,增加α-SMA和Ⅰ型胶原在体外表达。体内研究结果表明,在两种慢性肝损伤动物模型中,特异性敲减HSC中RPS5表达水平能够促进HSC活化,增加细胞外基质的沉积,促进肝纤维化。结论 RPS5对HSC激活和肝纤维化发生至关重要,可能是治疗肝纤维化的潜在靶点。

巴西橡胶树线粒体50S核糖体蛋白L21 cDNA的克隆与分析

在橡胶生产中,"死皮"生理综合症严重制约了橡胶树(Hevea brasiliensis)单产的提高。在早期构建的差减文库中,筛选到一条在死皮植株中下调表达的基因片段,该片段编码的蛋白与线粒体50S核糖体蛋白L21(mRPL21)同源。通过ESTs序列拼接和RT-PCR,获得一条853 bp的cDNA序列(命名为HbmRPL21,GenBank登录号为HM800425),该序列包含一个完整的开放读码框,编码271个氨基酸,理论分子量为30.52 kD,等电点为8.40。同源比对表明,植物和动物界间mRPL21序列差异很大,而植物界内则相对比较保守。生物信息学分析表明,HbmRPL21是一个包含Ribosomal_L21p保守结构域的线粒体定位蛋白。

解脲支原体感染对大鼠生精细胞线粒体核糖体蛋白S22的影响及知柏地黄汤的干预作用

目的:观察解脲支原体(UU)感染对大鼠睾丸生精细胞线粒体核糖体蛋白S22(MRPS22)表达的影响及知柏地黄汤的干预作用。方法:UU感染SD雄性大鼠模型45只,随机分成模型组、知柏地黄汤组、西药组,并以健康大鼠为对照组,每组15只。造模成功后第10天起知柏地黄汤组予以知柏地黄汤灌胃[1 g/(k·d)],西药组予以阿奇霉素灌胃[0.105 g/(k·d)],对照组、模型组予以同体积生理盐水灌胃,连续灌胃21 d。采用TUNEL法检测生精细胞凋亡,电镜观察生精细胞线粒体结构,流式细胞仪检测线粒体膜电位(MMP),RT-PCR检测大鼠睾丸生精细胞MRPS22 m RNA表达,Western印迹检测大鼠睾丸生精细胞MRPS22蛋白表达。观察各组大鼠睾丸生精细胞凋亡指数(AI)、生精细胞线粒体结构、MMP、生精细胞MRPS22 m RNA和蛋白表达情况。结果:模型组大鼠睾丸生精细胞AI[(11.23±1.65)%]显著高于知柏地黄汤组[(6.62±0.49)%]和西药组[(7.82±0.81)%](P <0. 01),知柏地黄汤组显著低于西药组(P <0.05)。知柏地黄汤组及西药组大鼠睾丸线粒体结构较模型组显著改善。模型组大鼠睾丸生精细胞MMP水平[(8. 77±1. 73)%]显著低于对照组[(22. 33±1. 66)%](P <0. 01),知柏地黄汤组[(18. 26±1. 32)%]显著高于模型组(P <0.01)和西药组[(15.91±1.69)%],西药组MMP水平显著高于模型组(P <0. 01)。模型组MRPS22 m RNA表达(8.02±3.21)与对照组(15.43±2.54)、知柏地黄汤组(11. 26±3. 82)相比均具有显著性差异(P <0. 01),知柏地黄汤组MRPS22 m RNA表达显著高于西药组(8. 79±2. 03)(P <0. 01)。模型组(22. 65±5. 31) MRPS22蛋白表达与对照组(33.31±7.09)、知柏地黄汤组(33.35±3.96)和西药组(28.11±4.13)相比均具有显著性差异(P <0. 01),知柏地黄汤组显著高于西药组(P <0.01)。大鼠睾丸生精细胞MRPS22蛋白表达量与MMP呈显著正相关(r=0.639,P <0.01)。结论:UU感染可能通过抑制大鼠睾丸生精细胞MRPS 22 m RNA及蛋白表达,降低MMP,引起生精细胞的凋亡。知柏地黄汤通过改善UU感染大鼠睾丸生精细胞MRPS22 m RNA及蛋白表达,提高MMP,减轻大鼠睾丸生精细胞凋亡。

巴西橡胶树核糖体蛋白S5基因的克隆及生物信息学分析

核糖体蛋白S5是核糖体蛋白家族的重要成员,在核糖体中发挥重要作用。利用本实验室获得的部分序列设计引物,采用3'-RACE技术从巴西橡胶树胶乳中获得一个核糖体蛋白S5基因的完整阅读框,该基因编码209个氨基酸的多肽,含有一个典型的真核生物核糖体蛋白S5结构域。在HbRPS5氨基酸序列中没有预测到跨膜区和信号肽,二级结构分析表明HbRPS5属于混合型蛋白。对14个RPS5系统进化分析表明,巴西橡胶树的RPS5基因在进化上具有保守性,与植物类拟南芥的RPS5基因亲缘关系最近,而与人和酵母等亲缘关系相对较远。该基因的克隆和生物信息学分析为深入研究其功能奠定了基础。

核糖体蛋白S29与人肝癌细胞Bel-7402耐5-氟尿嘧啶的关系

目的探讨核糖体蛋白S29(RPS29)与人肝癌细胞Bel-7402耐5-氟尿嘧啶(5-FU)的关系。方法采用大剂量冲击法和逐渐增加剂量法构建人肝癌Bel-7402/5-FU耐药细胞系;用荧光定量PCR和Western blot检测RPS29基因和蛋白在敏感和耐药细胞中的表达;用siRNA干涉耐药细胞的RPS29,CCK-8法检测细胞存活率变化。用肝癌Hep G2/5-FU耐药细胞株验证阻断RPS29表达与5-FU耐药的关系。结果 Bel-7402/5-FU耐药细胞对5-FU的IC50为62μmol/L,耐药指数为22.7。RPS29基因和蛋白在耐药细胞中高表达,分别为敏感细胞的(2.21±0.19)倍和(1.79±0.28)倍(P<0.01)。干涉RPS29后,耐药细胞在一系列浓度梯度的5-FU作用下存活率分别比对照组下降(15.1±6.5)%、(24.3±4.2)%、(19.2±5.1)%、(16.3±6.8)%(P<0.05)。干涉RPS29表达后,肝癌Hep G2/5-FU耐药细胞株在一系列浓度梯度的5-FU作用下存活率分别比对照组下降(8.4±1.2)%、(13.0±2.3)%、(17.1±3.1)%和(12.2±1.5)%(P<0.05)。结论 RPS29基因和蛋白均在Bel-7402/5-FU耐药细胞高表达;低表达RPS29可提高Bel-7402/5-FU耐药细胞对5-FU的敏感性。低表达RPS29可提高Hep G2/5-FU耐药细胞对5-FU的敏感性。RPS29与肝癌细胞对5-FU的耐药性有关。

核糖体蛋白S5的医学研究进展

核糖体是细胞内一种核糖核蛋白颗粒,主要由rRNA和蛋白质构成,其基本功能是按照mRNA的指令将氨基酸合成蛋白质多肽链。目前在真核细胞中发现的核糖体蛋白（ribosomal protein,RP）有80多种,广泛分布于各种组织中。核糖体蛋白的命名与蛋白在核糖体的大小亚基有关。小亚基核糖体蛋白命名为S1-S31,大亚基核糖体蛋白命名为L1-L44。

基于mTOR/P70S6K通路研究上调miR-205-5p对肝癌细胞增殖、侵袭的影响

目的基于哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)/p70核糖体S6蛋白激酶(P70S6K)通路研究上调微小核糖核酸(miR)-205-5p对肝癌细胞增殖、侵袭的影响。方法肝癌HepG2细胞株经过细胞培养、转染后,分为上调miR-205-5p组、肝癌组和阴性对照组。实时荧光定量(RT)-聚合酶链反应(PCR)检测miR-205-5p表达,观察肝癌细胞增殖、凋亡、侵袭能力,Western印迹检测p-mTOR、p-P70S6K、mTOR、P70S6K蛋白表达。结果上调miR-205-5p组miR-205-5p表达显著高于肝癌组和阴性对照组,阴性对照组显著高于肝癌组(均P<0.05)。在24、48、72 h,上调miR-205-5p组细胞光密度值均显著低于阴性对照组和肝癌组,阴性对照组光密度值均显著低于肝癌组,在72 h差异表现最为明显(P<0.05),阴性对照组和肝癌组随着时间延长,光密度值逐渐显著升高,上调miR-205-5p组光密度值逐渐显著降低(均P<0.05)。上调miR-205-5p组72 h细胞增殖数、细胞侵袭数显著低于肝癌组和阴性对照组,细胞凋亡数显著高于肝癌组和阴性对照组(均P<0.05)。上调miR-205-5p组mTOR、P70S6K、p-mTOR、p-P70S6K蛋白表达显著低于肝癌组和阴性对照组(均P<0.05)。结论上调miR-205-5p可以影响mTOR/P70S6K信号通路的活性,参与肝癌细胞侵袭、增殖、凋亡的过程。

MRPS5对膀胱癌细胞增殖能力及干性特征的影响

目的探讨线粒体核糖体蛋白S5(mitochondrial ribosomal protein S5,MRPS5)对人膀胱癌细胞的增殖能力及其中干细胞干性特征的影响。方法 Western blot检测人膀胱癌及癌旁正常组织MRPS5的表达;构建靶向干扰MRPS5的慢病毒载体,感染膀胱癌细胞株T24,以干扰Scramble序列作为对照,Western blot检测MRPS5干扰效率;细胞活力实验检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞周期;细胞成球实验观察成球能力;Western blot检测肿瘤干性转录因子Nanog,Oct4,c-Myc和Sox2的表达;小鼠皮下移植瘤实验观察T24体内成瘤能力。结果 MRPS5在膀胱癌组织中的表达高于癌旁正常组织;慢病毒干扰载体PLKO.1-sh MRPS5有效,且干扰MRPS5表达后T24细胞增殖能力下降(P<0.05),周期阻滞于S期,干性因子表达均下调,成球率无变化(P>0.05)但成球直径明显减小;同时小鼠体内成瘤体积减小[(0.784±0.278)vs(0.500±0.245)cm3,P<0.05],瘤质量减轻[(0.862±0.372)vs(0.412±0.248)g,P<0.05]。结论 MRPS5在膀胱癌中较高表达,且干扰MRPS5表达能抑制T24增殖并抑制T24中的干细胞生物学特征。

基于mTOR/p70S6K信号通路探究紫丁香苷对高糖诱导的小鼠足细胞MPC5损伤的影响

目的:探究紫丁香苷对高糖诱导的小鼠足细胞MPC5损伤及哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)/p70核糖体蛋白S6激酶(p70S6K)信号通路的影响。方法:将小鼠足细胞MPC5分为:对照组(5.5mmoL/L葡萄糖)、高糖诱导组(30mmoL/L葡萄糖)、紫丁香苷低浓度组(2.5μmoL/L紫丁香苷+30mmoL/L葡萄糖)、紫丁香苷中浓度组(5μmoL/L紫丁香苷+30mmoL/L葡萄糖)、紫丁香苷高浓度组(10μmoL/L紫丁香苷+30mmoL/L葡萄糖)。各组向RPMI 1640培养基中加入上述浓度的相应试剂或药物,培养72h。酶标仪测定各组MPC5细胞吸光度值,计算细胞活力;流式细胞仪测定各组MPC5细胞凋亡情况;鬼笔环肽染色观察各组MPC5细胞骨架形态;荧光定量PCR和蛋白印迹法分别测定各组MPC5细胞mTOR、p70S6K信使核糖核酸(mRNA)和蛋白表达。结果:对照组MPC5细胞骨架形态正常,细胞长轴呈线性分布,荧光染色明显;与对照组比较,高糖诱导组MPC5细胞骨架断裂,细胞萎缩,荧光染色黯淡,吸光度值、细胞活力显著降低,凋亡率、mTOR、p70S6K mRNA和蛋白表达水平显著升高(P<0.05);与高糖诱导组比较,紫丁香苷低、中、高浓度组MPC5细胞骨架结构恢复清晰,荧光强度逐渐变亮,足突趋于明显,吸光度值、细胞活力依次升高,凋亡率、mTOR、p70S6K mRNA和蛋白表达水平依次降低(P<0.05)。结论:紫丁香苷对高糖诱导的MPC5细胞损伤具有保护作用,能明显促进MPC5细胞增殖,抑制其凋亡;其机制可能与紫丁香苷抑制高糖状态下MPC5细胞中mTOR/p70S6K通路的激活有关。

肾透明细胞癌中MRPS5的表达与患者预后的关系

目的探讨线粒体核糖体蛋白S5(MRPS5)在肾透明细胞癌(ccRCC)组织中的表达及其与患者预后的关系。方法采用免疫组织化学和免疫印迹技术检测ccRCC患者新鲜癌组织和癌旁组织中MRPS5的相对表达;采用免疫组织化学技术检测ccRCC患者石蜡包埋癌组织标本中MRPS5的表达;χ2检验分析MRPS5表达水平与患者临床病理参数的关系;Kaplan-Meier法描绘生存曲线,Log-rank检验分析MRPS5表达水平与患者生存状况的关系;采用Cox比例风险回归模型分析影响患者预后的临床因素。结果与癌旁组织相比,癌组织中MRPS5的表达水平均明显较低;在104例ccRCC患者癌组织中,64例(61.5%)高表达MRPS5,40例(38.5%)低表达MRPS5;MRPS5表达水平与肿瘤T分期(P=0.024)及肿瘤坏死(P=0.044)显著相关;MRPS5低表达组的患者总生存期(OS)和无病生存期(DFS)均显著短于高表达组(P<0.05);单因素Cox回归分析发现,ccRCC患者OS和DFS均与肿瘤大小、T分期、N分期、TNM临床分期、Fuhrman分级、肿瘤坏死及MRPS5表达水平等多种因素相关(P<0.05);多因素Cox回归分析发现,ccRCC患者OS与DFS均和N分期、Fuhrman分级及MRPS5表达水平相关(P<0.05)。结论MRPS5在ccRCC患者的癌组织中的表达低于癌旁组织,MRPS5低表达是影响患者预后的独立危险因素,有望成为判断患者预后的一种重要生物标志物及新的治疗靶点。

白纹伊蚊感染登革2型病毒后基因表达变化的研究

白纹伊蚊感染登革 2型病毒 2 4h后 ,和对照蚊虫一起提取RNA ,用差异显示PCR (DDRT PCR)技术对蚊虫感染病毒后基因表达的变化进行研究。白纹伊蚊感染登革 2型病毒后 ,经过 8条随机引物和 3条 3′端锚定引物配对扩增 ,发现了 6条表达有差异的片段 ,其中 5条为感染后表达量增加的片段 ,1条为感染后表达量减少的片段 ,并对这些片段进行了克隆和测序 ,通过GenBank查询 ,其中 5条为未知序列 ,1条表达量增高的片段和果蝇核糖体蛋白S5基因有较高的同源性。

大步甲的分子系统与进化模式

大步甲主要分布于北半球,全世界大约有1000余种。因大步甲后翅退化,不能飞行,其移动能力和扩散范围都受到很大程度的限制,因此,容易产生地理隔离和遗传分化,从而成为研究物种分化和生物多样化的好材料。近年来,通过对大步甲分子系统的详细研究,不仅很大程度上解明了大步甲各分类群间的系统发育关系,而且对大步甲的系统演化过程和形态进化模式也有了较深的理解,获得了很多重要的见解。在此做一个简单的综述。

微小RNA-4699-3p靶向调控MRPS23表达对卵巢癌细胞增殖和迁移的影响

目的探讨微小RNA(miRNA,miR)-4699-3p在卵巢癌细胞株中的表达,观察其靶向调控线粒体核糖体蛋白S23(MIRPS23)表达的能力及对卵巢癌细胞迁移和增殖的影响。方法实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-4699-3p在卵巢癌细胞株(OVCAR-3、SKOV-3、H0-8910、OC3、A2780)和正常卵巢上皮细胞(I0SE80)中的表达。采用脂质体转染法分别将miR-4699-3p模拟物或阴性对照miR-NC转染至miR-4699-3p表达最低的细胞株.定义为实验组和对照组。qRT-PCR验证转染效率。生物信息学技术预测miR-4699-3p的候选靶基因,双荧光素酶报告基因实验鉴定其对靶基因的调控能力。qRT-PCR和Westerm blot检测MRPS23在mRNA和蛋白水平的表达变化。细胞计数法(CCK-8)和Transwell迁移实验分别检测miR4699-3p对卵巢癌细胞增殖和迁移能力的影响。结果miR-4699-3p在卵巢癌细胞株中的表达明显低于正常卵巢上皮细胞(P<0.05),在OVCAR-3细胞中的表达最低(P<0.01)。转染miR 4699-3p后,实验组OVCAR-3细胞中miR 4699-3p表达量显著升高(P<0.01),证明转染成功。生物信息学软件预测,miR4699-3p的候选靶基因可能是线粒体核糖体蛋白S23(MRPS23),双荧光素酶报告基因实验证实miR-4699-3p可直接靶定MRPS23基因mRNA的3'-非翻译区(UTR)(P<0.01)。与对照组OVCAR-3细胞相比,实验组过表达miR-46993p后,MRPS23基因在mRNA和蛋白表达水平均明显降低(P<0.01),细胞转移和细胞周期调控蛋白Twist、Slug、CDK6、Cyclin D3表达均降低(P<0.05),OVCAR-3细胞的增殖能力降低(P<0.05),0VCAR-3细胞迁移能力降低(P<0.01)。结论miR-4699-3p在卵巢癌细胞株中低表达,上调OVCAR-3细胞中的miR4699-3p表达可通过F扰MRPS23基因表达,抑制卵巢癌细胞增殖和迁移能力。