基于TCGA数据分析线粒体溶质载体SLC25A39在肝癌中的表达及其临床意义

目的:利用癌症基因图谱(TCGA)数据探讨线粒体溶质载体SLC25A39在肝细胞癌(HCC)中的表达及其临床意义。方法:从TCGA数据库下载HCC样本和正常肝组织的RNA-seq数据及临床信息,利用相关R语言软件包分析SLC25A39在HCC中的表达情况及其与临床病理指标、预后及免疫细胞浸润的相关性,并评估其在HCC中的诊断价值。结果:与正常组织相比,SLC25A39在HCC组织中表达上调(P<0.001),其表达水平与肿瘤T分期、病理分期、肿瘤状态、肿瘤残留、组织学分级及AFP水平显著相关(P<0.05),Cox回归模型分析显示SLC25A39高表达,是影响HCC患者总生存期(OS)的独立危险因素(HR=1.752,P=0.017)。肿瘤免疫细胞浸润分析显示,SLC25A39与中性粒细胞、CD8+T细胞、中央记忆型T细胞(Tcm)、GammaDelta T细胞(Tgd)、Th2细胞和CD56bright NK细胞的浸润水平显著相关(|Spearman’s r|>0.2,P<0.05)。ROC曲线分析显示SLC25A39表达水平对HCC的早期诊断和预后均具有良好的评估价值(AUC均>0.50)。结论:SLC25A39高表达是HCC预后不良的独立危险因素且具有良好的诊断价值,具有成为HCC诊断和预后评估生物标志物以及免疫治疗靶点的潜在价值。

溶质载体家族成员SLC25A39基因促进乳腺癌细胞线粒体分裂

目的 构建带Flag标签的人溶质载体家族成员蛋白SLC25A39基因的真核表达载体,在获得FlagSLC25A39融合蛋白表达后,研究SLC25A39表达对人乳腺癌细胞线粒体稳态的影响。方法 以人乳腺文库为模板采用PCR技术扩增出人SLC25A39的编码区序列,双酶切后将其插入到带Flag标签的pcDNA3.0载体上,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,菌液PCR鉴定阳性的克隆再进行质粒提取,测序正确后将重组质粒与空载体分别转染人乳腺癌细胞ZR75-1。Western印迹鉴定SLC25A39目的基因的表达;Mitotracker对乳腺癌细胞的线粒体进行染色,共聚焦显微镜对线粒体进行观察;Western印迹检测线粒体融合蛋白1(Mfn1)、线粒体分裂蛋白1(Fis1)的表达变化。结果双酶切鉴定表明,Flag-SLC25A39真核表达载体构建成功;Western印迹验证SLC25A39基因表达成功;激光共聚焦显微镜下观察发现SLC25A39过表达的乳腺癌ZR75-1细胞分裂的线粒体较多;Western印迹证实SLC25A39基因过表达后线粒体分裂蛋白Fis1表达增高,线粒体融合蛋白Mfn1表达减弱。结论 成功构建带Flag标签的SLC25A39基因真核表达载体,该基因可促进人乳腺癌细胞的线粒体分裂,有望成为靶向线粒体治疗乳腺癌的潜在新靶点。

SLC25A21在肾透明细胞癌发病机制中的作用

目的探讨SLC25A21在肾透明细胞癌细胞(786-0)中的作用。方法利用实时荧光定量-聚合酶链反应(RT-qPCR)、免疫荧光及Western印迹分析786-0中SLC25A21表达差异。慢病毒感染786-0构建SLC25A21过表达人肾透明细胞癌细胞系SLC25A21-OE,通过Transwell实验和划痕实验确定SLC25A21对786-0细胞转移能力的影响,通过细胞克隆形成能力实验,如细胞集落形成实验等检测SLC25A21-OE对786-0克隆形成能力的影响。结果SLC25A21在肾透明细胞癌组织中的表达较正常组织明显上调,肾透明细胞癌患者SLC25A21表达明显上升,且与预后呈明显负相关(P<0.05)。结论SLC25A21上调在促进人肾透明细胞癌的发展中起关键作用。SLC25A21在786-0中表达上调,尤其与786-0的侵袭性和不良预后呈负相关。

PiC在阿霉素所致SD大鼠心肌损伤中的表达情况及姜黄素的保护作用

目的探讨线粒体磷酸载体(Pi C)在阿霉素所致SD大鼠心肌损伤中的表达情况,及姜黄素对阿霉素所致SD大鼠心肌损伤的保护作用。方法 60只成年SD大鼠随机分为3组:对照组、阿霉素组、姜黄素+阿霉素组。正常对照组:按2.5 m L/kg尾静脉注射0.9%氯化钠注射液,1周1次,连续注射6周;阿霉素组:按1.25 mg/kg鼠尾静注射0.5 mg/m L阿霉素(0.9%氯化钠注射液稀释,约0.5 m L),1周1次,共注射6周;阿霉素+姜黄素组:阿霉素使用同上,大鼠从每次注射完阿霉素,同时应用12 mg/m L姜黄素注射液,以30 mg/kg药液(约0.5 m L)经尾静脉缓慢注射,共注射6周。应用谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒(Gpx)、超氧化物歧化酶(SOD)检测试剂盒、丙二醛(MDA)检测试剂盒检测心肌细胞内氧化应激水平,应用流式细胞仪检测SD大鼠心肌细胞凋亡水平;应用Western blot技术和Real-time PCR技术检测Pi C的表达情况。结果阿霉素组大鼠心肌细胞凋亡显著增加(P<0.05),而阿霉素+姜黄素组较阿霉素组大鼠心肌细胞凋亡显著降低(P<0.05);阿霉素+姜黄素组大鼠心肌细胞内Gpx活性、SOD活力均明显高于阿霉素组(P<0.05),而低于对照组(P<0.05);阿霉素+姜黄素组大鼠Slc25a3基因表达量、MDA含量及Pi C蛋白表达量均明显高于对照组(P<0.05),而低于阿霉素组(P<0.05)。结论阿霉素可以使心肌线粒体中Pi C的表达及氧化应激水平显著升高,心肌细胞凋亡增加;而姜黄素可以有效拮抗阿霉素所引起的这种损伤作用。

联合氧化磷酸化缺乏症28型基因突变的识别及功能分析

目的明确1例联合氧化磷酸化缺乏症28型(COXPD28)患者的致病基因突变,初步探索其致病机制。方法回顾性分析2019年8月就诊于山东省立医院集团东营市人民医院1例COXPD28患者的临床特征。通过线粒体基因测序与全外显子组测序明确其致病基因突变,构建致病基因野生型及突变型质粒,通过实时荧光定量PCR与免疫印迹实验评估突变基因对蛋白表达的影响。统计学方法主要采用单因素方差分析及LSD检验。结果患者女性,21岁,因自幼反复胸闷、憋喘就诊,主要表现为乳酸酸中毒。全外显子组基因测序发现溶质载体家族25成员26(SLC25A26)基因存在复合杂合突变(c.34G>C,p.A12P;c.197C>A,p.A66E),查询HGMD数据库,为国内首次报道。体外功能试验证实:与转染野生型质粒相比,细胞转染SLC25A26基因突变质粒后SLC25A26 mRNA及S-腺苷甲硫氨酸载体(SAMC)蛋白表达水平均显著降低,其中p.A66E突变质粒可使SLC25A26 mRNA及SAMC蛋白表达水平分别降为野生型质粒的6%与26%(P值均<0.001),而p.A12P突变质粒则分别降为野生型质粒的62%与82%(P<0.001,P=0.044);双突变(p.A66E+p.A12P)质粒共转染时,SLC25A26 mRNA与SAMC蛋白表达水平分别降低为野生型质粒的47%与57%(P<0.001,P=0.001)。结论本例COXPD28患者的致病突变基因为SLC25A26基因突变(p.A66E、p.A12P),该突变导致SLC25A26表达水平降低,造成线粒体氧化磷酸化功能障碍,诱发COXPD28。