线粒体直接PCR扩增法

为建立一种不需提取线粒体DNA而直接用线粒体进行聚合酶链反应 (PCR)的方法 ,将得到的线粒体用高温加热 ,使线粒体膜破裂 ,释放DNA后 ,直接用于PCR扩增。结果 :扩增产物与提纯的线粒体DNA扩增得到的产物一样丰富。提示

真菌菌体直接PCR扩增的方法研究

真菌属于真核微生物,它种类繁多,与人类的健康密切相关,同时某些真菌还能被安全地利用于食品生产和生物化工领域。真菌分子生物学研究是微生物研究的一个重要领域,但由于真菌的细胞壁结构特殊,抗逆性强,使得真菌的核酸提取尤其困难。为实现对真菌基因组的快速提取与扩增,本研究尝试利用市售常见的细胞裂解液对4种典型真菌的细胞进行破壁处理,然后直接使用PCR技术实现对真菌基因组的快速扩增。结果显示黑曲霉513.88(Aspergillus niger 513.88)和里氏木霉(Trichoderma reesei)这两种重要的真菌可以使用细胞裂解液处理后实现直接PCR扩增。

DNA数据库建设中批量样本直接扩增检验法的应用

目的研究批量样本直接扩增法在DNA数据库建设中的应用。方法打孔机打取血滤纸600份,剪取芝麻大小的口腔拭子300份,放入96孔扩增板,加入扩增试剂后直接扩增,并对其中200份血滤纸用磁珠法,100份口腔拭子用96孔板Chelex-100法,经DNA提取后扩增检验进行比较。结果血滤纸采用直接扩增法及磁珠法STR检测成功率均为100%;口腔拭子采用直接扩增法的成功率为95%,采用96孔板Chelex-100法的成功率为94%。结论血滤纸和口腔拭子通过直接扩增均能获得很好的DNA分型结果,该方法省时省力,可用于DNA数据库建设。

直接扩增法用于重大灾难事故中软骨的个体识别

目的探讨直接扩增法对软骨STR检验的有效性,以提高灾难受害者身源鉴定工作效率。方法采用Power Plex~21试剂盒对88份软骨进行直接扩增法检验,同步进行磁珠法比较分型结果。结果 88份软骨检材中,直接扩增法与磁珠法均成功检出84份检材的STR基因型,两者分型结果完全一致。结论Power Plex~21试剂盒直接扩增法可以应用于软骨STR分型检验,且操作简便、快速,在重大灾难事故身源鉴定中具有很好的应用前景。

山羊绒毛干中线粒体DNA和核DNA的提取与PCR扩增

本研究以PCR缓冲液、MgCl2溶液和蛋白酶K为裂解提取液,建立了一种从山羊绒毛干中快速提取DNA的方法。结果表明,该方法不仅能从山羊绒毛干中提取出线粒体DNA和核DNA,而且能够有效地进行线粒体基因和核基因组基因的PCR扩增,为拓展羊绒样品在个体识别、遗传资源评价、分子进化和分子标记辅助育种等研究领域中的应用奠定基础。

一种适于PCR扩增的快速提取猪基因组DNA的碱裂解法

以大白猪背最长肌、脾脏、耳组织为材料,用碱裂解法和酚-氯仿法分别提取猪基因组DNA,用紫外分光光度计、琼脂糖凝胶电泳、PCR扩增检测DNA的产量和质量,结果发现2种方法提取的DNA产量没有明显差异。通过猪MC4R、TEF-1基因特异引物进行PCR扩增均能得到目的条带。碱裂解法提取的DNA原液稀释5倍、10倍后作为模板均获得了较为稳定的扩增产物。该结果表明,简单、快速、无毒的碱裂解法适用于动物定性PCR检测时DNA的提取。

采用基因释放剂对微量及陈旧标本进行直接PCR扩增

为简化ＰＣＲ方法和减少标本用量，利用基因释放剂不提取ＤＮＡ，比较了利用基因释放剂和不用基因 释放剂，对微量肝素抗凝血、微量结肠粘膜组织（置－２０℃６个月）和含有ＰＣＲ抑制剂的ＤＮＡ标本直接进 行ＰＣＲ扩增。结果，利用基因释放剂，可扩增出目的产物，不用基因释放剂，来扩增出目的产物。提示利用 基因释放剂直接进行ＰＣＲ，简单快速，不用提取ＤＮＡ，适于微量、含有ＰＣＲ抑制物的ＤＮＡ及陈旧组织标本 的检测。

四引物扩增受阻突变体系PCR在绵羊线粒体基因组SNP检测中的应用

为建立绵羊线粒体基因组SNP的四引物扩增受阻突变体系(tetra-primer amplification refractory mutation system,Tetra-primer ARMS)PCR检测方法,选择小尾寒羊线粒体T1112C和C11606T2个SNP,在等位基因特异PCR基础上,根据错配原理设计4条引物,优化PCR反应体系,采用琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物。结果表明:T1112C位点检测中,所有个体均能扩增出569 bp最长片段的外引物产物(阳性对照),扩增出349 bp片段的个体为野生型,扩增出263 bp片段的个体为突变型。C11606T位点检测中,所有个体均能扩增出572 bp最长片段的外引物产物(阳性对照),扩增出408 bp片段的个体为野生型,扩增出213 bp片段的个体为突变型。在每个线粒体多态位点均检测到野生型和突变型2种基因型,没有发现异质性。应用Tetra-primer ARMS PCR方法,经一次PCR即可判定线粒体SNP位点的基因型,该方法快速、简便,可应用于绵羊线粒体SNP分型。

用于PCR扩增的DNA简易制备法现状

介绍了 6种用于PCR扩增的DNA简易制备法。所得DNA质量符合PCR扩增之用 。

一步PCR法快速扩增辽宁碱蓬胆碱单加氧酶cDNA3′末端序列

根据已获得的辽宁碱蓬 (SuaedaliaotungensisKitag)胆碱单加氧酶cDNA的部分序列 ,设计一条基因特异性引物 ,与通用引物并用 ,一步PCR成功地克隆了辽宁碱蓬胆碱单加氧酶cDNA 3′末端。与常规的3′_RACE法相比 ,一步PCR法具有快速、简便、经济等优点 ,是一种非常快捷的扩增cDNA

用三引物法提高PCR的扩增效率及特异性

聚合酶链反应(PCR)现已广泛应用于分子生物学研究的各个领域。对于模板量较低的样品及单拷贝基因,通常通过增加扩增的次数或多次PCR提高扩增的效率,但这样往往出现非特异性反应。本文采用三引物双扩增法大大提高了PCR扩增的效率及特异性。 1 材料与方法 Melanoma细胞由本室保存,能分泌人组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)。RT

普通PCR试剂用于干血斑直接扩增的研究

目的探讨普通PCR试剂用于血斑直接扩增的可行性。方法采用自身配对设计研究,使用普通PCR试剂对88例法医血斑分别进行直接扩增(实验组)和提取DNA后扩增(对照组),扩增位点为Alu和CODIS,产物由琼脂糖凝胶电泳后经凝胶成像系统分析。比较两组Alu扩增产物灰度,分析不同载体血斑、不同保存时间和模板加入量对直接扩增的影响。另对15份HBV患者血斑直接扩增并与ELISA检测结果进行比较。结果对照组与实验组的Alu位点扩增产物位置相同,电泳条带灰度间无明显差异(P>0.05)。滤纸、纱布、FTA卡、棉拭子及DNA采血卡血斑的Alu位点直接扩增产物电泳条带灰度无明显差异(F=1.638,P=0.172)。10份保存不同时间(2010-2016年)的血斑CODIS位点均直接扩增出较清晰的条带。D21S11位点在血斑加入量(直径1 mm)超过5片时检测不到扩增产物。15份患者血斑共检测出7份,检出率为46.67%。结论普通PCR试剂直接扩增在血斑CODIS位点单独分析及临床致病微生物诊断方面有一定应用价值。

粘取法、直接扩增法联合应用DNA分型3例

随着DNA分析技术在的法医领域的研究和广泛应用,DNA检验的对象已从常规检材拓展到不易被发现而常被忽略的微量检材,如作案工具把手上、衣帽鞋袜上粘附的上皮细胞等目前已成为重要的物证来源[1]。现场微量生物物证一旦获得有价值的DNA分型,在侦破、诉讼中就能发挥重大作用。如何提高微量生物物证的检出率、准确度、时效性,使得许多现场潜在的生物物证在侦查破案中能够发挥应有的价值,就显得愈来愈重要。

实时荧光PCR法与环介导等温扩增法检测食品中动物源性成分的比较

目的比较实时荧光PCR(real-time PCR)法及环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)检测食品中动物源性成分,为食品安全监管部门动物源性成分鉴定提供准确、高效的检测方法。方法采用实时荧光PCR法及LAMP法分别对市售肉及其制品进行牛、猪和鸡源性成分鉴定,并与标签明示的肉源成分比对,以准确性和时效性2个指标对上述2个方法进行评价。结果 Real-time PCR法检出4份样品与标签明示肉源不符,LAMP法检出5份样品与标签明示肉源不符,而16份样品中仅有1份样品2种方法检测结果不同。Real-time PCR法检测用时1.5 h,提取检测用DNA用时1.5 h,总用时3 h;而LAMP法检测用时45 min,提取检测用DNA用时20 min,总用时65 min。结论 LAMP法与Real-time PCR均具有较好的特异性、准确性,但LAMP法耗时短、成本低、操作简单,便于现场快速监督抽检。

均匀设计法优化人类SMN基因PCR扩增

采用均匀设计法,对影响PCR的主要因素,即退火温度、引物、Taq酶、二甲基亚砜(DMSO)、模板DNA进行了优化,得到人类SMN基因的最优PCR扩增体系。结果表明,PCR扩增条件和反应体系的最优组合为:退火温度61.6℃、Taq酶0.26μL、引物(10μmol/L)3.6μL、DMSO(100%)2μL、DNA 3.8μL。

和田青驴线粒体DNA中CO1基因的PCR扩增与序列分析

为了获得和田青驴线粒体DNA中细胞色素氧化酶(CO1)基因序列,试验采用PCR技术及BLAST在线平台方法对和田青驴血液线粒体DNA中CO1基因进行扩增与序列同源性分析。结果表明:DNA核苷酸序列与AJ009780.1的同源性为99.0%,与KC763190.1、CR388000.2、AB033487.1同源性为98.0%,确认是试验所需要的目的基因。

应用DNA PCR法扩增检测苯丙酮尿症基因突变

DNA体外扩增是近年来分子遗传学与分子生物学发展起来的高效DNA分析技术．多聚酶链反应(Polymerase Chain Reaction，PCR)是在一个简单的试管体系中，利用人工合成的与特异突变点两侧DNA序列互补的两寡核苷酸引物，通过DNA变性、退火、引物延冲反应这样数十个循环后，目的区域的DNA可扩增百万倍，从而提高了DNA分析的灵敏度，

改良直接扩增法应用于生物检材DNA检验

Identifiler（R） Plus试剂盒性能卓越,PCR反应液经过优化,抗抑制剂能力强,适用于案件生物检材DNA检验[1].本文利用纳米银溶液和生物物证提取棉签、植绒拭子对案件常见的血痕类、唾液斑和肋软骨等进行检材转移,采用Identifiler（R）Plus扩增系统配以Prep-n-Go Buffer进行直接扩增检验,以探讨直接扩增技术对此类检材的有效性和可靠性.