X连锁凋亡抑制蛋白和线粒体第二激活因子在锰诱导大鼠生精细胞凋亡蛋白酶表达中的调节作用

目的:研究氯化锰导致的大鼠生精细胞半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9(caspase-9)及凋亡蛋白酶活化因子-1(Apaf-1)表达中X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)和线粒体第二激活因子(Smac)的调节机制,探讨锰导致的雄性不育机制。方法:雄性SD大鼠随机分为对照组、低剂量(15 mg/kg MnCl_2)和高剂量(30 mg/kg MnCl_2)组,腹腔注射MnCl_2 4周和6周,免疫组织化学检测生精细胞caspase-9、Apaf-1、XIAP和Smac表达。结果:与对照组相比较,各组生精细胞caspase-9、Apaf-1和Smac表达均显著升高,XIAP表达降低。同时间的高剂量组与低剂量组比较,同剂量的6周组与4周组比较,生精细胞caspase-9、Apaf-1和Smac表达均显著升高,XIAP表达降低。各组caspase-9与Apaf-1表达呈正相关,XIAP与Smac表达呈负相关。结论:锰可促进生精细胞caspase-9、Apaf-1和Smac表达,抑制XIAP表达,导致细胞凋亡,产生雄性生殖毒性效应。

第二个源于线粒体的胱天蛋白酶激活因子在胃癌组织中的表达情况及与患者临床特征和预后的关系

目的探讨第二个源于线粒体的胱天蛋白酶激活因子(Smac)在胃癌组织中的表达情况及与患者临床特征和预后的关系。方法选择胃癌组织标本72例及正常胃组织标本30例,采用免疫组织化学染色链霉菌抗生物素蛋白-过氧化酶连结(SP)法检测两种组织标本中Smac的表达情况,比较胃癌组织和正常胃组织中Smac的表达情况,分析Smac表达情况与患者临床特征及预后的关系。结果胃癌组织中Smac的阳性表达率低于正常胃组织,差异有统计学意义(P﹤0.05)。高/中分化、无淋巴结转移、TNM分期为Ⅰ~Ⅱ期胃癌患者胃癌组织中Smac的阳性表达率分别高于低/未分化、有淋巴结转移、TNM分期为Ⅲ~Ⅳ期的患者,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。72例胃癌患者的3年生存率为48.61%,胃癌组织中Smac阳性表达患者的生存率高于Smac阴性表达患者,生存组患者胃癌组织中Smac的阳性表达率高于死亡组,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。相关性分析结果显示,胃癌组织中Smac阳性表达与肿瘤分化程度及患者预后均呈正相关(r=0.41、0.36,P﹤0.05),与淋巴结转移及TNM分期均呈负相关(r=-0.44、-0.46,P﹤0.05)。结论胃癌组织中Smac的阳性表达率低于正常胃组织,且TNM分期晚、肿瘤分化程度低、有淋巴结转移的胃癌患者胃癌组织中Smac的阳性表达率较低。

第二线粒体源性Caspases激活因子与非小细胞肺癌术后辅助化疗患者预后转归和生存期限的相关性

目的评价第二线粒体源性Caspases激活因子(Smac、Survivin、Bax和Bcl-2蛋白)与非小细胞肺癌术后辅助化疗患者预后转归和生存期限的相关性。方法选取2015年6月至2017年10月我院治疗的70例非小细胞肺癌患者作为研究对象,正常肺部组织为由疑似肺癌患者经皮穿刺肺活检法取得并经病理分析无异常的组织。术后辅助化疗采用DP方案。Western Blot法检测Smac、Survivin、Bax和Bcl-2蛋白表达量;采用Kaplan-Meier法计算患者3年生存率。结果不同TNM分期患者的Smac蛋白表达情况比较,差异具有统计学意义(P<0.01)。Cox多因素回归模型分析结果显示,Smac蛋白表达情况为影响非小细胞肺癌患者预后的独立指标(P<0.05)。Western Blot结果显示,与正常肺部组织相比,非小细胞肺癌组织中的Smac、Bax蛋白表达量降低,Caspase 9、Bcl-2蛋白表达量升高(P<0.01)。结论第二线粒体源性Caspases激活因子(Smac、Survivin、Bax和Bcl-2蛋白)可作为非小细胞肺癌术后辅助化疗患者预后转归和生存期限的评估标志。

抗炎症因子与类风湿性关节炎关系的研究进展

类风湿性关节炎(RA)是一种慢性炎症性疾病,疾病晚期可出现关节畸形和功能障碍,严重危害人类健康。抗炎症因子(AIC)作为一种保护性因子,和促炎症因子(PIC)共同在RA的发病和进展中发挥重要作用。RA中AIC水平降低,PIC水平升高,全身和局部炎症反应加重,关节软骨和软骨下骨破坏加速,促进RA进一步进展的理念已经被广大学者接受,以AIC为靶点的新一代RA生物学治疗方兴未艾。因此深入了解各种AIC在RA发病中的作用具有重要意义。本文从AIC与RA的关系和作用机制入手,对该领域的研究进展进行综述,为RA的临床诊治提供新的思路。

XIAP、Smac的研究进展

凋亡逃避在肿瘤的形成中起到重要作用,凋亡抑制蛋白X连锁凋亡抑制蛋白(X-linked inhibitor of apoptosis protein,XIAP)是凋亡抑制蛋白(inhibitor of apoptosis protein,IAP)家族中的一员。XIAP是惟一能够同时抑制起始阶段和效应阶段的凋亡抑制蛋白,能够阻止细胞凋亡;半胱氨酸蛋白酶的第二个线粒体激活因子(the second mitochodria-derived activator of caspase,Smac)是一种内源性线粒体促凋亡蛋白,通过特异性结合并抑制IAPs对下游效应Caspase的抑制,从而促进细胞凋亡。二者在肿瘤的发生、发展、耐药中起到重要作用,且相互制约、相互作用,共同维持细胞的凋亡水平。该文就XIAP和Smac的研究进展进行综述。

Caspase-9与Apaf-1在锰中毒大鼠生精细胞表达及XIAP与Smac的调控作用

目的研究氯化锰导致的大鼠生精细胞caspase-9及Apaf-1表达中XIAP和Smac的调节机制,探讨锰导致的雄性不育机制。方法雄性SD大鼠随机分为对照组,低剂量(15 mg/kg Mn Cl2)和高剂量(30 mg/kg Mn Cl2)组,腹腔注射MnCl24周和6周,免疫组织化学检测生精细胞caspase-9、Apaf-1、XIAP和Smac表达。结果各组生精细胞caspase-9、Apaf-1和Smac表达均显著升高,XIAP表达降低;同时间的高剂量组与低剂量组比较,同剂量的6周组与4周组比较,生精细胞caspase-9、Apaf-1和Smac表达均显著升高,XIAP表达降低;各组caspase-9与Apaf-1表达正相关,XIAP与Smac表达成负相关。结论锰可促进生精细胞caspase-9、Apaf-1和Smac表达,抑制XIAP表达,导致细胞凋亡,产生雄性生殖毒性效应。

急性胰腺炎大鼠腺泡细胞XIAP和Smac蛋白的表达

目的:探讨急性胰腺炎(AP)大鼠腺泡细胞中X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)及半胱天冬酶caspase的第二个线粒体激活因子/低等电点的IAP直接结合蛋白(Smac/DIABLO)的表达及其与AP严重程度的关系。方法:通过胆胰管逆行注射不同浓度的牛磺胆酸钠,制备大鼠急性水肿型胰腺炎(AEP)和急性坏死型胰腺炎(ANP)模型,同时制备假手术组为对照组。分别在模型制作3、6和12h取各组大鼠胰腺组织,对其进行病理学评分,并测定血清淀粉酶;应用免疫组织化学和蛋白免疫印迹法检测大鼠胰腺组织中XIAP和Smac蛋白的表达水平。结果:与对照组比较,AEP和ANP组大鼠胰腺组织在各个时间点均有不同程度的病理损害,且血清淀粉酶明显升高(P<0.01),其中ANP组升高程度尤为明显(P<0.01)。免疫组织化学染色显示,XIAP和Smac蛋白在大鼠正常胰腺组织腺泡细胞中均呈弱阳性表达,ANP组XIAP的表达随模型制作后时间的延长而增强,12h时比对照组和AEP组明显增强,AEP组Smac蛋白的表达随时间延长而增强,12h时比ANP组及对照组增强。Westernblot结果显示造模后各时间点对照组XIAP和Smac蛋白表达比较差异无统计学意义(P>0.05),3hAEP组XIAP表达较ANP组及对照组明显增强(P<0.01),6、12h时ANP组XIAP表达比AEP组和对照组明显增强(P<0.01)。3h时各组Smac表达差异无统计学意义(P>0.05),6、12hAEP组Smac蛋白表达比ANP组和对照组明显增加(P<0.01)。结论:AP病情轻重程度与XIAP及Smac蛋白表达有关。病情轻者XIAP表达无显著变化,Smac蛋白表达逐渐升高;病情重者XIAP表达逐渐升高,Smac蛋白表达则先升后降。XIAP和Smac蛋白的表达变化在AP的发病中具有一定作用。

上皮性卵巢癌患者血清FOLR1、Smac水平与患者临床病理特征及预后的关系

目的分析上皮性卵巢癌(EOC)患者血清叶酸受体1(FOLR1)、第2个线粒体衍生半胱氨酸蛋白酶激活因子(Smac)水平与病理参数及预后的关系。方法选择148例经病理确诊为EOC的患者作为EOC组,卵巢良性肿瘤50例及体检健康女性50例作为对照1组、对照2组,分析EOC患者血清FOLR1、Smac水平与病理特征及近期预后的关系。结果 EOC组血清FOLR1高于对照1组、对照2组,Smac低于对照1组、对照2组(P <0.05);术后、化疗1疗程、化疗4疗程EOC组患者血清FOLR1均较基线下降,Smac较基线上升(P <0.05);国际妇产科联盟(FIGO)分期、淋巴结转移、分化程度、组织学分级、病理类型与EOC血清基线FOLR1、Smac水平有关(P <0.05);血清FOLR1高水平及低水平Smac EOC患者患者累积生存率、中位生存时间生存预后差低于FOLR1低水平、Smac高水平EOC患者(P <0.05)。结论 EOC患者血清FOLR1、Smac水平均受FIGO分期、病理分化、组织学分级、病理类型及淋巴结转移的影响;高FOLR1、低Smac水平EOC患者通常有更差的近期预后。

间歇低氧对大鼠认知功能的影响及其分子机制的研究

目的探讨间歇低氧对大鼠认知功能的影响及其分子机制。方法选用雄性Wistar大鼠64只,体质量(180±10)g,按随机数字表法分为正常对照组(UC组)和5%间歇低氧组(5%IH组),每组32只;每组按取材时间不同随机分为7、14、21、28 d四个亚组,每个亚组8只。UC组大鼠置于实验箱内持续注入空气,氧浓度为21%;5%IH组大鼠置于实验箱内,循环注入氮气及空气,使氧浓度在5%~21%之间变化,每120 s为1个周期。2组大鼠每日实验8 h,其余16 h常规饲养,分别持续进行7、14、21、28 d。各亚组实验后应用Morris水迷宫检测两组大鼠学习记忆功能。完成Morris水迷宫实验后处死并取出大鼠海马组织,制备切片标本:采用透射电镜观察大鼠海马CA1区神经细胞超微结构的改变;采用免疫组织化学法检测海马CA1区神经细胞凋亡蛋白酶激活因子-1(Apaf-1)、第二个线粒体衍生的caspase激活因子(Smac)蛋白的表达情况;采用Tunel法检测海马CA1区神经细胞凋亡情况,并计算神经细胞凋亡指数。采用Pearson检验,分析UC组不同时间点Apaf-1及Smac蛋白的表达与神经细胞凋亡指数的相关性。结果(1)Morris水迷宫实验:UC组大鼠间歇性低氧7、14、21、28 d逃避潜伏期分别为(20.83±3.25)、(22.17±2.79)、(20.50±4.51)、(21.17±4.17)s,跨越目标象限时间分别为(52.17±4.17)、(52.50±2.74)、(51.50±2.43)、(52.00±4.78)s,各时间点差异均无统计学意义(P值均>0.05);5%IH组间歇性低氧7、14、21、28 d逃避潜伏期分别为(33.17±2.14)、(44.33±3.45)、(52.17±3.87)、(64.33±2.73)s,跨越目标象限时间分别为(44.00±3.03)、(34.50±3.94)、(27.83±3.01)、(20.83±1.94)s,随间歇低氧时间的增加,逃避潜伏期延长,跨越目标象限时间明显缩短,差异均有统计学意义(F=106.335、61.772,P值均<0.01)。两组间比较:5%IH组不同时间点逃避潜伏期时间均大于UC组,跨越目标象限时间均小于UC组,差异均有统计学意义(P值均<0.01)。(2)透射电镜观察神经细胞超微结构:UC组大鼠海马CA1区神经元核较大,核膜结构完整,呈椭圆形或圆形,染色质分布均匀呈细颗粒状,细胞器丰富,形态结构正常;5%IH组从7 d开始出现神经元水肿,细胞核变形,核膜模糊,核仁逐渐消失,细胞器肿胀溶解等,随着时间的延长,改变程度越重。(3)Apaf-1、Smac蛋白的相对表达量:UC组各个时间点海马CAl区神经细胞Apaf-1、Smac蛋白的相对表达量差异均无统计学意义(P值均>0.05);而5%IH组各个时间点Apaf-1、Smac蛋白的相对表达量均随间歇低氧时间的延长而升高,差异均有统计学意义(F=25.328、42.923,P值均<0.01)。两组间比较:5%IH组各个时间点Apaf-1、Smac蛋白的相对表达量均明显高于UC组,差异均有统计学意义(P值均<0.01)。(4)神经细胞凋亡情况:UC组各个时间点海马CAl区神经细胞神经细胞凋亡少,AI差异无统计学意义(P>0.05);5%IH组随间歇低氧时间的延长而升高,AI差异有统计学意义(F=25.799,P<0.01)。两组间比较:各个时间点海马CAl区神经细胞凋亡明显高于UC组,AI差异均有统计学意义(P值均<0.05)。(5)Pearson检验显示:5%IH组各个时间点大鼠海马CA1区Apaf-1、Smac蛋白的表达与凋亡指数均呈正相关(rApaf-1=0.735、0.736、0.685、0.747,rSmac=0.735、0.734、0.679、0.751,P值均<0.05)。结论间歇低氧可导致大鼠认知功能障碍,这可能与其引起大鼠海马CA1区神经细胞超微结构的改变,诱导凋亡相关蛋白Apaf-1、Smac的表达,进而造成神经元凋亡有关。