喹乙醇致鸡中毒后线粒体膜的ATPase活性变化研究

将1日龄的艾维茵肉鸡随机分为空白对照组(Ⅰ组)和喹乙醇处理组(Ⅱ组)。2组动物以相同条件进行饲养,Ⅱ组按15mg/kg体重的剂量,将喹乙醇进行一次性口服,实验期42 d,每周进行一次采样,共采样6次。所采集的血液制备鸡肝线粒体膜(MiM),本实验以MiM上的Na+-K+-ATPase、Mg2+-ATPase和Ca2+-ATPase活性变化为检测指标。结果表明:Ⅱ组MiM的ATPase活性在整个实验过程中一直呈下降趋势。实验结果提示喹乙醇可以诱导生物膜ATPase活性的改变,导致线粒体膜功能障碍,使机体的解毒和排泄功能受损。

银质针导热治疗肌筋膜疼痛综合征大鼠骨骼肌线粒体和SIRT3表达的变化

背景:临床研究发现银质针导热治疗对肌筋膜疼痛综合征患者具有良好镇痛作用,但其具体机制仍不清楚。目的:观察银质针导热治疗对肌筋膜疼痛综合征大鼠线粒体超微结构和沉默信息调节因子同源蛋白3变化的影响。方法:26只大鼠随机取20只予以打击结合运动疲劳的方法复制肌筋膜疼痛综合征大鼠模型,造模成功的16只大鼠随机分为模型组和银质针导热组,每组各8只;银质针导热组给予银质针导热处理;剩余6只为正常对照。分别于造模前1 d、造模完成后第1天、银质针导热处理后第14天检测大鼠机械刺激缩足阈值、热缩足潜伏期;银质针导热处理后第14天检测大鼠股内侧肌肌电图电活动,取大鼠右侧股内侧肌分别进行苏木精-伊红染色观察局部形态、透射电镜观察线粒体超微结构、Western blot检测沉默信息调节因子同源蛋白3表达。结果与结论:①痛阈值:与正常组和造模前相比,模型组、银质针导热组造模后机械刺激缩足阈值和热缩足潜伏期显著缩短(P<0.01);经银质针导热处理后,与模型组相比,银质针导热组机械刺激缩足阈值和热缩足潜伏期显著延长(P<0.01);②肌电图:模型组大鼠右侧股内侧出现自发电活动,银质针导热组自发电活动较模型组减少,时限较模型组延长(P<0.01),波幅较模型组降低(P<0.05);③苏木精-伊红染色:正常组大鼠肌纤维排列紧密规则,模型组大鼠肌纤维萎缩、变性,排列紊乱,银质针导热组大鼠肌肉结构紊乱改善;④骨骼肌线粒体微观结构:透射电镜显示正常组肌组织线粒体结构正常;模型组肌组织线粒体肿胀,嵴断裂或消失;银质针导热组肌组织线粒体肿胀明显缓解或趋于正常;⑤沉默信息调节因子同源蛋白3表达:模型组较正常组明显下调,银质针导热组较模型组明显上调(P<0.05);⑥结果表明:肌筋膜疼痛综合征大鼠局部肌肉线粒体出现异常,沉默信息调节因子同源蛋白3的表达下调,提示存在能量代谢障碍;银质针导热处理后线粒体变化恢复,接近正常,且沉默信息调节因子同源蛋白3的表达上调接近正常组,推测银质针导热疗法可能通过促进线粒体修复而改善能量代谢障碍发挥治疗作用。

亚精胺浸种对玉米幼苗根尖线粒体ATPase活性与结合态亚精胺含量的影响

以抗旱性不同的玉米品种农大108(抗旱性较强)和掖单13(抗旱性较弱)为材料,经过亚精胺(Spd)浸种处理,研究在聚乙二醇(PEG)-6000渗透胁迫下,幼苗根尖线粒体ATPase水解活性与膜上非共价结合态多胺含量的关系。结果表明,渗透胁迫条件下,抗性强的农大108的ATPase活性下降的幅度明显小于抗性弱的品种掖单13,而农大108的线粒体膜上非共价结合态亚精胺的上升幅度明显大于掖单13。亚精胺浸种处理,明显增强了掖单13幼苗的抗性,促进了掖单13在胁迫条件下非共价结合态Spd含量的增加,同时抑制其在胁迫条件下ATPase活性的降低。这些结果表明,亚精胺浸种处理,通过提高玉米幼苗根尖线粒体膜上的非共价结合态Spd含量,维持ATPase活性的稳定,从而提高玉米幼苗的抗渗透胁迫能力。

渗透胁迫对玉米幼苗根尖线粒体ATPase活性与结合态多胺含量的影响

[目的]探讨线粒体膜上结合态多胺与渗透胁迫的关系。[方法]以抗旱性不同的玉米(Zea maysL.)品种农大108(抗旱性较强)和掖单13(抗旱性较弱)幼苗为材料,研究在聚乙二醇(PEG)-6000渗透胁迫下,幼苗根线粒体ATPase水解活性与膜上非共价结合态亚精胺(Spd)含量的关系。[结果]渗透胁迫条件下,抗性强的农大108的ATPase活性下降的幅度明显小于抗性弱的品种掖单13,而农大108的线粒体膜上非共价结合亚精胺的上升幅度明显大于掖单13。外源Spd处理,明显促进了掖单13在胁迫条件下非共价结合Spd含量的增加,同时抑制其在胁迫条件下ATPase活性的降低,从而提高了掖单13幼苗的抗性;Spd生物合成的专一性抑制剂——甲基乙二醛-双(鸟嘌呤腙)(MGBG)处理,显著抑制了农大108在胁迫条件下膜上非共价结合Spd的增加,同时促进其在胁迫条件下ATPase活性的降低,从而明显降低了农大108幼苗的抗性。[结论]线粒体膜上的非共价结合的Spd可能通过维持ATPase活性的稳定来提高玉米幼苗的抗渗透胁迫能力。

失血性休克肠上皮细胞线粒体DNA ATPase6,8亚基基因的改变

目的 观察失血性休克大鼠肠上皮细胞mtDNAATPase 6,8亚基基因的改变。方法 将 6只Wistar大鼠分成单纯手术组、休克组。分别提取mtDNA ,采用PCR技术扩增后测序 ,检测突变点。结果 Wistar大鼠mtDNAATPase 6,8亚基基因存在多态性 ,休克组存在A 7797缺失和一定数量点突变 :A7863G ,G795 0T ,C82 94G ,T85 0 5G。结论 失血性休克 5h ,肠上皮细胞mtDNAATPase 6,8亚基基因会发生突变 ,由此可导致所编码的氨基酸的改变 。

渗透胁迫下大豆幼苗根尖线粒体ATPase活性与结合态多胺含量的关系

以抗旱性不同的大豆(Glycine max L.)品种豫豆24(抗旱性较强)和豫豆6号(抗旱性较弱)幼苗为材料,研究在聚乙二醇(PEG)-6000渗透胁迫条件下,幼苗根线粒体ATPase水解活性与膜上非共价结合态多胺含量的关系。结果如下:渗透胁迫条件下,抗性强的豫豆24的ATPase活性下降的幅度明显小于抗性弱的品种豫豆6号,而豫豆24的线粒体膜上非共价结合亚精胺(Spd)的上升幅度明显大于豫豆6号。外源Spd处理,明显促进了豫豆6号在胁迫条件下非共价结合Spd含量的增加,同时抑制了胁迫条件下ATPase活性的降低,从而提高了豫豆6号幼苗的抗性;Spd生物合成的专一性抑制剂——甲基乙二醛-双(鸟嘌呤腙)(MGBG)处理,显著抑制了豫豆24在胁迫条件下膜上非共价结合Spd的增加,同时促进其在胁迫条件下ATPase活性的降低,从而明显降低了豫豆24幼苗的抗性。结果表明,线粒体膜上非共价结合的Spd可能通过维持ATPase活性的稳定来提高大豆幼苗的抗渗透胁迫能力。

高血压患者及大鼠线粒体ATPase 6基因的克隆、表达与突变研究

目的：研究正常血压与高血压鼠以及正常血压与高血压患者的差异基因。方法：用差别杂交法（Differentialhybridization）筛选正常人心脏cDNA文库的部分克隆，得到多个在自发性高血压鼠（SHR）心肌和高血压患者外周白细胞中高表达的线粒体基因。重组质粒，PCR－SSCP和测序，进行基因突变分析。结果：SHR鼠心肌线粒体ATPase6基因构象改变,8701位碱基由G→A（G8701A），编码的第59位氨基酸密码子由丙氨酸变成苏氨酸；A8708G，编码的第61位氨基酸由组氨酸变成精氨酸。高血压病患者外周血白细胞线粒体ATPase6基因8584位碱基突变（G8584A），编码的第20位氨基酸由丙氨酸变成苏氨酸，这一变化与SHR线粒体ATPase6基因改变相一致。结论：高血压病患者外用血白细胞线粒体ATPase6基因G8584A突变很可能在高血压病心肌肥厚的发生、发展中具有意义，并可能是高血压病的特异性改变。

缺血再灌注大鼠肠上皮细胞线粒体DNA ATPase 6, 8亚基基因的改变(英文)

提要:目的观察缺血再灌注大鼠肠上皮细胞mtDNA ATPase 6,8亚基基因的改变情况。方法将6只Wistar大鼠分成对照组、缺血再灌注组。分别提取mtDNA,采用PCR技术扩增后测序,检测突变点。结果Wistar大鼠mtDNA ATPase 6,8亚基基因存在多态性,在缺血再灌注组存在a7 797缺失和一定数量点突变:A7 779T,T8 515G,T8 520G,C8 535G。结论缺血再灌注后,肠上皮细胞mtDNA ATPase 6,8亚基基因存在损伤,由此可能导致所编码的氨基酸改变。

盐胁迫对胡杨液泡膜H^+ATPase水解活性的影响

胡杨细胞经 50mmol·L- 1 NaCl处理 1 0d后 ,泡膜液H+ ATPase,PPiase水解活性都增加了 ,说明胡杨具有盐生植物的特性。盐胁迫对专一性抑制剂bafilomycinA1 ,DCCD更敏感 ,说明盐处理下胡杨液泡膜H+ ATPase与bafilomycinA1 ,DCCD结合位点上的构象可能发生了一定的变化。从Mg2 + ,ATP依赖性 ,NO3- 和bafilomycinA1 抑制特性、Cl- 激活特性证明胡杨液泡膜H+ ATPase是典型的V H+ ATPase。盐胁迫后 ,对底物ATP的亲和力增强。

洞庭青鲫等5个鲫品系线粒体ATPase基因序列的比较分析

运用PCR扩增、克隆、测序等技术对洞庭青鲫(Carassius auratus var.Dongtingking)、彭泽鲫(C.auratusvar.Pengze)、普通鲫(C.auratus)、红鲫(C.auratus var.red)、日本白鲫(C.auratus cuvieri)等5个鲫品系线粒体DNA ATPase8和ATPase6基因序列的碱基组成、变异情况和分子系统进化进行了比较分析。结果显示:5个鲫品系线粒体DNA ATPase8/6基因序列碱基的平均组成为A:32.6%,C:25.5%,G:12.6%,T:29.4%,序列分歧率为0.5%～4.0%,其中普通鲫和日本白鲫的分歧率最大(4.0%),洞庭青鲫与彭泽鲫的分歧率最小(0.5%)。在5个鲫品系中,红鲫和普通鲫的亲缘关系较近,洞庭青鲫与彭泽鲫亲缘关系较近,而它们与白鲫的亲缘关系则较远,推测红鲫、洞庭青鲫和彭泽鲫均起源于普通鲫。5个鲫品系在线粒体DNA ATPase8/6基因序列碱基位点上的差异可以作为区分不同鲫品系的分子遗传标记。

^(60)Coγ射线诱导人淋巴细胞线粒体Cytb、ATPase6和ATPase8基因表达改变的研究

用实时荧光定量PCR(Real-timePCR)探讨了60Coγ射线诱导人淋巴细胞线粒体Cytb、ATPase6和ATPase8基因表达的改变。以1、3、5、8和10Gy60Coγ射线分别照射指数增长期的人淋巴细胞永生化细胞株,8h后利用逆转录PCR(RT-PCR)摸索各基因的最佳实验条件,进而利用Real-timePCR的方法定量检测各基因表达变化,观察辐射对Cytb、ATPase6和ATPase8基因表达影响的量效关系;同时以5Gy60Coγ射线照射人淋巴细胞后,分别于不同时点(0.5、4、8、12、24、48和72h),通过RT-PCR和Real-timePCR方法检测各基因表达的变化,观察其时效关系。结果发现,在mRNA水平上,线粒体Cytb、ATPase6和ATPase8基因表达总体上调。Cytb和ATPase8基因在8Gy剂量范围内,呈现出随剂量增加基因表达增强的量效关系趋势;观察时效关系,发现5Gy剂量照射后4h左右,3种基因表达增强最显著,且Cytb和ATPase8基因分别持续高表达至48h和72h。因此,60Coγ射线可以诱导人淋巴细胞线粒体Cytb、ATPase6和ATPase8基因表达的改变,总体上呈现表达增强趋势。

低氧对喜马拉雅旱獭线粒体ATPase6基因表达的影响

目的探讨低氧下喜马拉雅旱獭与平原地区同种动物(松鼠)线粒体ATPase基因表达的差异,试图说明低氧下低氧适应性动物的有氧代谢能力增强,以适应低氧环境。方法酚氯仿法分别提取样品和对照动物全基因组,RT-PCR获得线粒体ATPase6基因片段,通过灰度比较探讨喜马拉雅旱獭线粒体ATPase6基因表达的差异。结果高原动物ATPase6基因的表达高于平原动物。结论低氧下高原动物为维持生理代谢,其基础代谢的水平要高于平原动物,而这种基础代谢水平的升高与ATPase6基因结构的改变及其表达的改变是呈相关性的。

小麦根液泡膜H^+-ATPase的解离和重组

ＫＩ诱导的小麦根液泡膜Ｈ＋－ＡＴＰａｓｅ解离对温度敏感，在４℃时比在２０℃时解离更迅速；该过程为Ｍｇ２＋和ＡＴＰ所加强。其它阴离子诱导酶活性丧失的有效性依次为：ＳＣＮ－＞Ｉ－＞ＮＯ３－＞Ｂｒ－＞Ａｃ－＞ＳＯ３２－＞ＳＯ４２－＞Ｃｌ－＞ＨＣＯ３－。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ的结果显示酶活性的丧失伴随着Ｖｏ与Ｖ１的解离。通过透析去除解离剂，可部分恢复泵质子活性和ＡＴＰ水解活性，这表明Ｖｏ与Ｖ１进行重新组装。这种解离和重组的能力在体内Ｖ型Ｈ＋－ＡＴＰａｓｅ的调控和装配上可能有重要意义。

从ATPase8-6基因研究杂交多倍体鱼线粒体母性遗传(英文)

异源四倍体鲫鲤是世界上首例人工培育的两性可育并形成群体的且能自然繁殖的四倍体鱼。本文采用质粒克隆测序法测定了红鲫、异源四倍体鲫鲤、三倍体湘云鲫和三倍体湘云鲤的ATPase8和ATPase6基因全序列 ,结合鲤鱼、日本白鲫和斑马鱼的同源序列 ,对不同倍性水平鲤科鱼类的ATPase8和ATPase6基因进行了比较 ,分析了碱基组成、变异情况以及核苷酸和氨基酸序列差异。红鲫、鲤鱼、异源四倍体鲫鲤、日本白鲫、三倍体湘云鲫和三倍体湘云鲤之间的序列差异为 0 0 % - 1 3 4 % ,它们与外群斑马鱼之间的序列差异为 2 7 9% -31 0 %。用MEGA软件中的MP法、ME法、NJ法和UPGMA法构建分子系统树 ,得到了相似的拓扑结构。结果分析表明 ,人工杂交多倍体异源四倍体鲫鲤、三倍体湘云鲫和三倍体湘云鲤在线粒体ATPase8和ATPase6基因上具有严格的母性遗传特征。值得注意的是 ,异源四倍体鲫鲤经过 1 1代的繁育后 ,与其原始母本红鲫仍然保持了非常高的同源性 ,说明了新的异源四倍体基因库在线粒体ATPase8和ATPase6基因上拥有稳定的遗传特性。对不同倍性鲤科鱼类线粒体ATPase8和ATPase6基因的研究表明 。

蜜蜂线粒体ATPase6和ATPase8基因的克隆与序列分析

一、前言核酸序列分析是指通过测定核酸分子一级结构中核苷酸序列组成来比较同源分子之间的相互关系。从而阐明基因组ＤＮＡ一级结构上的遗传信息如何控制生物体三维形态发育和复杂性不断增加的动态发展过程，并从遗传角度对生物的分类体系、系统发育和进化作出解释。序列...

水稻液泡膜H^＋—ATPase的分离纯化及生化性质研究

用差速离心和密度梯度离心的方法，分离水稻液泡膜微囊，测定膜微囊ＡＴＰａｓｅ活性．用５％的ＴｒｉｔｏｎＸ－１００溶膜后的上清液，经ＳｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ－６Ｂ柱层析纯化，得到ＡＴＰａｓｅ复合物．生化性质研究结果表明，纯化前后基本相似．酶活性需要Ｍｇ２＋，受Ｃｌ－激活，对叠氮化钠、钒酸盐和寡霉素不敏感，受硝酸盐、ＤＣＣＤ（质子通道抑制剂）抑制，泵质子产生的膜电位△可被质子通道的离子载体ＣＣＣＰ破坏．

小麦液泡膜H^+-ATPase的Ca^(2+)激活特性

纯化小麦液泡膜H+ -ATPase,测定了纯化的小麦液泡膜H+ -ATPase 受Mg2+ 和Ca2+ 双重激活的特性及两种激活状态下酶的特性. Mg2+ 激活时酶水解活性受DCCD的抑制,受磷脂酰丝氨酸(PS)影响明显,ATP水解和泵质子活性相偶联.而在Ca2+ 激活时酶水解活性不受DCCD抑制,受PS影响微弱,Ca2+ 激活时ATP水解与泵质子活性解偶联. Mg2+ 和Ca2+ 对小麦液泡膜H+ -ATPase的激活作用不具有叠加效应.

^(60)Coγ射线对人线粒体COXI和ATPase6表达水平的影响

目的观察60Coγ射线对人外周血线粒体COXI和ATPase6基因和蛋白质水平表达的影响,探讨线粒体编码基因用于辐射生物剂量估算的可行性。方法采用60Coγ射线照射正常人离体外周血,照射剂量率为1.013 Gy/min,剂量分别为0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 Gy,。照后6小时,用RT-PCR技术检测基因的表达水平,用流式细胞仪检测蛋白质的表达水平,分别拟合最佳回归方程,建立剂量-效应曲线。结果(1)0~3.0 Gy,COXI基因表达水平的最佳回归方程为Y=0.629+0.256D(r2=0.920,p<0.01),ATPase6基因表达水平的最佳回归方程为Y=0.221+0.805D(r2=0.912,p<0.01)。(2)0~5.0 Gy,COXI蛋白质表达水平的最佳回归方程为Y=1.054+0.595D(r2=0.919,p<0.01);ATPase6蛋白质表达水平与照射剂量间的关系不明显,不能拟合出最佳回归方程。结论60Coγ射线照射人离体外周血,随着照射剂量的增加,线粒体COXI的基因与蛋白质表达水平一致,呈增加趋势,且有良好的线性关系,有望用于辐射生物剂量的估算。