沉默信息调节因子1在脂多糖诱导胰岛素瘤细胞-1线粒体损伤中的作用

目的 探讨沉默信息调节因子（silent mating type information regulation 2 homolog1，SIRT1）在脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）诱导胰岛素瘤细胞-1（insulinoma cell lines-1, INS-1）细胞线粒体损伤中的作用。方法 将对数生长期的INS-1 细胞分为5 组：正常对照组、1 mg/L LPS组（LPS 干预细胞24 h）、白藜芦醇（resveratrol，RSV）＋LPS 组（10 μmol/L RSV 预处理1 h 后，加入1 mg/L LPS 干预24 h）、EX527＋LPS 组（20 μmol/L EX527 预处理1 h 后，加入1 mg/L LPS干预24 h）、EX527＋RSV＋LPS 组（20 μmol/L EX527 预处理1 h 后，加入10 μmol/L 的RSV 和1mg/L LPS 干预24 h）。检测细胞活力和ATP 生成；提取INS-1 细胞总蛋白、胞质蛋白和线粒体蛋白，Western-blot 法检测SIRT1、TLR4、乙酰化FoxO1、细胞色素C（cytochrome C，CytC）、线粒体融合蛋白1（mitofusion1，Mfn1）、线粒体融合蛋白2（mitofusion2，Mfn2）、线粒体分离蛋白1（fission1，Fis1）蛋白的表达； Real-time PCR 方法检测SIRT1、FoxO1、Mfn1、Mfn2、Fis1 基因水平的变化。多组间比较采用单因素方差分析，用LSD-t 法进行组间两两比较。结果 1 mg/L LPS 作用于INS-1 细胞24 h 后，细胞活力降低（n=4，F=13.98，P〈0.01），ATP 生成减少（n=4，F=27.92，P〈0.05），RSV 预处理后促进ATP 生成（P〈0.01），但不能逆转EX527 预处理后ATP 生成的降低（P〉0.05）。RSV 可以促进SIRT1、Mfn1、Mfn2 蛋白表达和基因上调，降低TLR4 和Fis1 蛋白表达，下调其基因水平，减少CytC 在细胞质中的释放（P〈0.01），而各组间FoxO1 蛋白表达差异无统计学意义（P〉0.05）。结论 白藜芦醇可能通过改变SIRT1 的活性，调控FoxO1 的乙酰化，部分参与调节LPS 诱导的INS-1 细胞线粒体的损伤。