目的观察G蛋白耦联受体激酶相关蛋白1(GIT1)在氯化锂-匹罗卡品致模型大鼠海马组织中的表达变化,以探讨GIT1在癫发生发展过程中的作用机制。方法共42只无特定病原体级成年雄性Wistar大鼠,制备氯化锂-匹罗卡品致模型,随机分为对照组和癫组...目的观察G蛋白耦联受体激酶相关蛋白1(GIT1)在氯化锂-匹罗卡品致模型大鼠海马组织中的表达变化,以探讨GIT1在癫发生发展过程中的作用机制。方法共42只无特定病原体级成年雄性Wistar大鼠,制备氯化锂-匹罗卡品致模型,随机分为对照组和癫组(癫发作后1、3、7、14、30、60 d),荧光定量聚合酶链反应、Western blotting法和免疫组织化学染色检测各观察时间点大鼠海马组织GIT1表达变化。结果癫组大鼠GIT1 m RNA自癫持续状态后急性期第1和3天即升高(P=0.012,0.002),至潜伏期第7和14天持续升高(P=0.003,0.001),至慢性期第30和60天达峰值水平(均P=0.000);GIT1蛋白自急性期即升高,慢性期持续升高,但与对照组相比,差异未达统计学意义(均P>0.05),至慢性期达峰值水平(均P=0.000)。至慢性期第30天时,癫组大鼠海马CA1区、齿状回和海马旁皮质GIT1蛋白表达水平均高于对照组(P=0.000)。结论癫大鼠海马组织GIT1表达上调,可能通过调节细胞骨架动态重组而影响兴奋性神经网络,从而参与癫的发生。展开更多
目的探讨金属硫蛋白(metallothionein,MT)和线粒体解偶联蛋白3(uncoupling protein 3,UCP3)抗阿霉素(doxorubicin,Dox)心脏毒性的作用及具体分子机制。方法体内实验以MT敲除型(MT^(-/-))小鼠和MT野生型(MT^(+/+))小鼠为动物模型并通过...目的探讨金属硫蛋白(metallothionein,MT)和线粒体解偶联蛋白3(uncoupling protein 3,UCP3)抗阿霉素(doxorubicin,Dox)心脏毒性的作用及具体分子机制。方法体内实验以MT敲除型(MT^(-/-))小鼠和MT野生型(MT^(+/+))小鼠为动物模型并通过腹腔注射给予Dox(15 mg/kg·bw);体外实验采用出生1~3 d的两种小鼠的心脏构建心肌细胞体外原代培养模型,并给于Dox(1μmol/L)和NAC(5 mmol/L)处理。通过苏木素-伊红(HE)染色法检测Dox对小鼠心脏组织的损伤作用;免疫组织化学染色法检测MT的表达水平;细胞色素C还原测定法检测O_(2)^(-)的含量;TBARS法测定MDA的含量;RT-qPCR试验方法检测UCP3基因表达水平;Western blot方法检测UCP3蛋白表达水平;免疫共沉淀方法检测MT与UCP3的相互作用方式。结果Dox可导致心脏组织病理学改变,氧化损伤,超氧阴离子产生增多,抑制UCP3基因和蛋白表达(P<0.05,P<0.01),但是MT并不能通过与UCP3直接结合而发挥作用。NAC可抑制Dox导致的两种心肌细胞中UCP3基因表达水平的下降(P<0.05),但是对UCP3蛋白表达水平的下降没有抑制作用。结论MT除了可通过清除氧自由基抵抗Dox对UCP3基因表达的抑制作用外还可通过其他途径调控UCP3的蛋白表达水平。展开更多
基金supported by grants from National Basic ResearchProgram of China (2006CB503910, 2006CB806506, 2006CB911001)The National Natural Science Foundation of China (30721003)~~
文摘目的观察G蛋白耦联受体激酶相关蛋白1(GIT1)在氯化锂-匹罗卡品致模型大鼠海马组织中的表达变化,以探讨GIT1在癫发生发展过程中的作用机制。方法共42只无特定病原体级成年雄性Wistar大鼠,制备氯化锂-匹罗卡品致模型,随机分为对照组和癫组(癫发作后1、3、7、14、30、60 d),荧光定量聚合酶链反应、Western blotting法和免疫组织化学染色检测各观察时间点大鼠海马组织GIT1表达变化。结果癫组大鼠GIT1 m RNA自癫持续状态后急性期第1和3天即升高(P=0.012,0.002),至潜伏期第7和14天持续升高(P=0.003,0.001),至慢性期第30和60天达峰值水平(均P=0.000);GIT1蛋白自急性期即升高,慢性期持续升高,但与对照组相比,差异未达统计学意义(均P>0.05),至慢性期达峰值水平(均P=0.000)。至慢性期第30天时,癫组大鼠海马CA1区、齿状回和海马旁皮质GIT1蛋白表达水平均高于对照组(P=0.000)。结论癫大鼠海马组织GIT1表达上调,可能通过调节细胞骨架动态重组而影响兴奋性神经网络,从而参与癫的发生。