金属硫蛋白间接调控线粒体解偶联蛋白3抵抗阿霉素心肌毒性的作用机制研究

目的探讨金属硫蛋白(metallothionein,MT)和线粒体解偶联蛋白3(uncoupling protein 3,UCP3)抗阿霉素(doxorubicin,Dox)心脏毒性的作用及具体分子机制。方法体内实验以MT敲除型(MT^(-/-))小鼠和MT野生型(MT^(+/+))小鼠为动物模型并通过腹腔注射给予Dox(15 mg/kg·bw);体外实验采用出生1~3 d的两种小鼠的心脏构建心肌细胞体外原代培养模型,并给于Dox(1μmol/L)和NAC(5 mmol/L)处理。通过苏木素-伊红(HE)染色法检测Dox对小鼠心脏组织的损伤作用;免疫组织化学染色法检测MT的表达水平;细胞色素C还原测定法检测O_(2)^(-)的含量;TBARS法测定MDA的含量;RT-qPCR试验方法检测UCP3基因表达水平;Western blot方法检测UCP3蛋白表达水平;免疫共沉淀方法检测MT与UCP3的相互作用方式。结果Dox可导致心脏组织病理学改变,氧化损伤,超氧阴离子产生增多,抑制UCP3基因和蛋白表达(P<0.05,P<0.01),但是MT并不能通过与UCP3直接结合而发挥作用。NAC可抑制Dox导致的两种心肌细胞中UCP3基因表达水平的下降(P<0.05),但是对UCP3蛋白表达水平的下降没有抑制作用。结论MT除了可通过清除氧自由基抵抗Dox对UCP3基因表达的抑制作用外还可通过其他途径调控UCP3的蛋白表达水平。