敲低线粒体转录因子A(TFAM)抑制人宫颈癌细胞及骨肉瘤细胞自噬及增殖、侵袭和迁移

目的研究线粒体转录因子A(TFAM)对宫颈癌HeLa细胞及骨肉瘤U2OS细胞的线粒体功能、自噬、增殖、侵袭、迁移的影响。方法HeLa、U2OS细胞转染TFAM小干扰片段(si-TFAM)下调TFAM表达,Mito-Tracker Red CMXRos染色结合激光共聚焦显微镜检测线粒体膜电位(MMP)、MitoSOX^(TM)Red标记法检测线粒体活性氧(mtROS)水平、实时定量PCR检测线粒体DNA(mtDNA)的表达,免疫荧光细胞化学染色检测自噬体数量的变化。Western blot法检测TFAM、微管相关蛋白1轻链3A/B(LC3A/B)、自噬相关基因2A(ATG2A)、ATG2B、ATG9A、锌指转录因子Snail、基质金属蛋白酶2(MMP2)和MMP9的表达。CCK-8法、平板集落形成实验检测细胞增殖,Transwell^(TM)实验、划痕愈合实验检测细胞侵袭、迁移的变化。结果下调TFAM表达导致HeLa及U2OS细胞MMP减少,mtDNA拷贝数减少,mtROS产生量增加。LC3A/B蛋白含量较对照组明显下降,胞质内自噬体数量明显减少,自噬早期阶段蛋白ATG2B、ATG9A表达量明显减少。HeLa及U2OS细胞Snail、MMP2和MMP9蛋白表达均减少。干扰TFAM表达,抑制HeLa及U2OS细胞的增殖、侵袭、迁移能力。结论下调TFAM表达抑制线粒体功能,延缓自噬进程,降低宫颈癌细胞及骨肉瘤细胞的增殖、侵袭、迁移能力。

lncRNA EBLN3P调节miR-340-5p/线粒体转录因子A轴对非小细胞肺癌细胞恶性生物学行为的影响

目的:探讨长链非编码RNA EBLN3P调节微小RNA-340-5p(miR-340-5p)/线粒体转录因子A(TFAM)轴对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞恶性生物学行为的影响及其机制。方法:使用NSCLC细胞系为研究对象。将A549细胞分为Ctrl组、si-NC组、si-EBLN3P组、si-EBLN3P+NC inhibitor组、si-EBLN3P+miR-340-5p inhibitor组,应用MTT、EdU、Transwell检测细胞增殖、迁移、侵袭;双荧光素酶报告基因实验验证EBLN3P、miR-340-5p、TFAM 3者间的靶向关系;分别检测TFAM、miR-340-5p、E-cadherin、N-cadherin蛋白表达。结果:EBLN3P在肺癌组织和细胞中表达上调;在NSCLC细胞中,TFAM表达上调,miR-340-5p表达降低。抑制EBLN3P表达可显著抑制NSCLC细胞增殖、迁移与侵袭,且E-cadherin蛋白表达上升,N-cadherin蛋白表达下降。EBLN3P、TFAM与miR-340-5p存在靶向关系。结论:EBLN3P在NSCLC组织与细胞中呈高表达,抑制EBLN3P表达可通过调节miR-340-5p/TFAM信号轴,抑制NSCLC细胞增殖、迁移与侵袭。

慢性心力衰竭患者可溶性微纤维相关蛋白4和线粒体转录因子A水平与病情程度及预后的关系探究

目的分析慢性心力衰竭患者血清可溶性微纤维相关蛋白4(sMFAP4)、线粒体转录因子A(TFAM)表达及与病情程度、预后的相关性。方法选择2020年2月至2022年4月就诊于本院的90例慢性心力衰竭患者作为心衰组,另选同期于本院体检的90例健康者作为对照组。对比两组血清sMFAP4、TFAM水平,比较心衰组不同心功能分级患者血清sMFAP4、TFAM水平。随访6个月,根据患者是否发生不良事件分为预后良好组、预后不良组,经单因素、多因素logistic分析影响慢性心力衰竭患者不良预后的因素,并绘制ROC曲线,分析血清sMFAP4、TFAM水平及二者联合预测慢性心力衰竭发生及患者不良预后的价值。结果心衰组血清sMFAP4比对照组高,TFAM mRNA比对照组低(P<0.05);Ⅳ级组血清sMFAP4>Ⅲ级组>Ⅱ级组,TFAM mRNA<Ⅲ级组<Ⅲ级组(P<0.05);Spearman等级相关性显示,血清sMFAP4与TFAM mRNA呈负相关(r=-0.646,P<0.001);Kendall的tau_b检验发现,血清sMFAP4与慢性心力衰竭患者的心功能分级呈正相关(r=0.757,P<0.001),TFAM mRNA与心功能分级呈负相关(r=-0.579,P<0.001);预后不良组NYHA心功能分级、sMFAP4比预后良好高,TFAM mRNA比预后良好组低(P<0.05);经logistic回归分析显示,NYHA心功能分级(Ⅳ级)、sMFAP4高表达是影响慢性心力衰竭患者不良预后的危险因素(OR>1,P<0.05),TFAM mRNA高表达是保护因素(OR<1,P<0.05);绘制ROC曲线发现,血清sMFAP4、TFAM mRNA及联合预测慢性心力衰竭发生的AUC为0.729(95%CI 0.650~0.808)、0.687(95%CI 0.610~0.765)、0.744(95%CI 0.610~0.765),血清sMFAP4、TFAM mRNA及联合预测慢性心力衰竭患者预后不良的AUC为0.831(95%CI 0.697~0.964)、0.826(95%CI 0.726~0.926)、0.840(95%CI 0.708~0.972)。结论慢性心力衰竭患者血清sMFAP4高表达、TFAM mRNA低表达,二者水平与患者心功能分级、预后有关,且可有效预测患者不良预后。

线粒体转录因子A介导的线粒体功能障碍在糖尿病心肌病中的作用

目前糖尿病心血管并发症的发病率和病死率不断提高,其中糖尿病心肌病这一独立于冠状动脉疾病、高血压心脏病和心脏瓣膜病以外的以代谢障碍和心功能障碍为特征的心血管并发症的发生与线粒体功能障碍有关。研究表明,线粒体转录因子A(mitochondrial transcription factor A,TFAM)的表达异常可使线粒体功能障碍,而高糖环境可使TFAM表达降低。本文就线粒体功能紊乱致糖尿病心肌病的发生机制、TFAM对心肌细胞线粒体功能的影响、TFAM介导的线粒体功能障碍在糖尿病心肌病发生发展中的作用进行综述,以期为临床糖尿病心肌病的诊治提供理论依据。

线粒体转录因子A在肿瘤发生发展中作用的研究进展

线粒体转录因子A(TFAM)是由核基因编码的高迁移率族类蛋白,是影响体内线粒体DNA复制转录的重要调节因子。除维持正常细胞的功能外,TFAM在肿瘤的发生发展中也扮演着重要的角色,TFAM改变所导致的线粒体功能稳态变化对肿瘤细胞造成重要影响。近年来关于TFAM在肿瘤中的研究逐渐增多,其与多种肿瘤的发生密切相关,且与患者的不良预后及耐药密切相关。虽然TFAM对肿瘤影响的具体分子机制尚未完全明确,但TFAM有望成为恶性肿瘤药物治疗的新靶点。本文简要回顾了TFAM在肿瘤发生发展中的作用,以期为临床肿瘤治疗提供新的见解。

线粒体转录因子A在非小细胞肺癌中的表达及其与临床病理因素的关系

线粒体转录因子A(TFAM)在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达鲜有报道。本研究通过免疫组化方法检测TFAM在70例NSCLC中的表达情况,并进行Kaplan-Meier生存分析。结果提示TFAM高表达与NSCLC淋巴结转移相关,且可以作为1个生物学标记用于预测肿瘤的预后,为NSCLC的治疗提供了新的思路。

线粒体转录因子A在胃癌组织中的表达及临床意义

目的:检测线粒体转录因子A(mtTFA)蛋白在不同胃组织中的表达,探讨其与胃癌发生发展的关系。方法:选择2010年1月-2011年9月间在我科所做的胃癌手术66例。采用SP免疫组化方法对胃癌组织及正常胃组织中mtTFA蛋白的表达进行检测,观察mtTFA的表达与胃癌病理分级、临床分期、肌层浸润、淋巴结转移的关系。结果:mtTFA在胃癌组织中的表达明显高于正常胃组织,差异具有统计学意义(P<0.05),且从正常胃组织到胃癌组织其表达有上升趋势。mtTFA蛋白的表达与胃癌的病理分级、临床分期、肌层浸润、淋巴结转移有关(P<0.05)。结论:mtTFA的表达异常可能是胃癌发生发展的分子机制之一,有望成为反映胃癌生物学行为的一项指标。

缬沙坦对冠心病合并高血压患者血浆线粒体转录因子A的影响及临床治疗效果

目的分析硝苯地平缓释片联合缬沙坦对冠状动脉粥样硬化性心脏病(冠心病)合并原发性高血压(高血压)患者的血浆线粒体转录因子A(mitochondrial transcription factor A,mt TFA)的影响及临床效果。方法选取淮安第一人民医院2014年1月至2015年1月接受治疗的冠心病合并高血压患者120例,采用随机数字表法随机分为两组,每组60例,两组均给予抗凝、扩血管、降血脂治疗,在此基础上对照组患者治疗方案:硝苯地平缓释片20 mg/d;观察组患者治疗方案:在对照组基础上加用缬沙坦80 mg/d。比较两组治疗后3个月血浆mt TFA浓度变化趋势以及临床效果。结果两组治疗后血浆mt TFA浓度均明显下降,并且观察组治疗后血浆mt TFA浓度降低明显优于对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。血浆mt TFA浓度与血脂相关性分析结果提示,血浆mt TFA浓度与低密度脂蛋白胆固醇浓度(r=0.81,P=0.001)以及三酰甘油浓度(r=0.74,P=0.002)呈正相关性。观察组治疗后改善血压、血脂以及颈动脉斑块的临床效果均明显优于对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 mt TFA浓度能够作为冠心病合并高血压患者病情评估指标,并且硝苯地平缓释片联合缬沙坦能够更稳定、有效地控制冠心病合并高血压患者的并发症发生。

线粒体转录因子A在子宫内膜癌中的表达与意义

目的检测线粒体转录因子A(mtTFA)基因及蛋白在不同子宫内膜组织中的表达,探讨其与子宫内膜癌发生发展的关系。方法采用RT-PCR方法,对36例子宫内膜癌组织,11例非典型增生子宫内膜组织和20例正常子宫内膜组织中的mtTFA mRNA的表达进行检测。同时采用S-P免疫组化方法,对41例子宫内膜癌组织,23例非典型增生子宫内膜组织和21例正常子宫内膜组织中的mtTFA蛋白的表达进行检测。结果mtTFA在子宫内膜癌组织中的表达明显高于非典型增生子宫内膜及正常子宫内膜组织,差异具有显著性(P<0.05),且从正常内膜组织到非典型增生子宫内膜组织,再到子宫内膜癌组织其表达有上升趋势。mtTFA蛋白的表达与子宫内膜癌的病理分级,临床分期,肌层浸润,淋巴结转移有关(均P<0.05)。mtTFA的表达与雌激素受体(ER)的表达有明显相关性,其差异有显著性(P<0.05)。结论 mtTFA的表达异常可能是子宫内膜癌发生发展的分子机制之一,有望成为反映子宫内膜癌生物学行为的一项指标。因其与ER受体相关,可能为雌激素依赖性子宫内膜样腺癌的治疗提供新的靶点。

人类核转录因子红细胞系2p45相关因子2和线粒体转录因子A在前列腺癌中的表达及意义

目的检测前列腺癌组织标本中人类核转录因子红细胞系2p45相关因子2(Nrf2)、人类线粒体转录因子A(TFAM)的表达,并分析其表达与Gleason评分的关系。方法用免疫组织化学S-P法检测40例前列腺癌组织标本中Nrf2与TFAM的表达,应用Spearman相关分析Gleason评分与Nrf2、TFAM表达强度的关系。结果 Nrf2和TFAM的表达与Gleason评分正相关(P值为0.0052,0.0003);Nrf2与TFAM的表达也有相关性(P=0.006)。结论 Nrf2与TFAM是前列腺癌恶性程度的相关因素之一,Nrf2与TFAM很可能通过同一机制参与前列腺癌的发生发展过程。

线粒体转录因子A在心血管疾病的研究进展

线粒体的功能障碍,目前已成为国内外研究心血管疾病的关注热点。随着对线粒体转录因子A分子机制的研究,发现其与心血管疾病密切相关。现通过对线粒体转录因子A的分子生物学特性、在心血管疾病的作用机制及治疗等相关方面进行综合阐述,进一步探讨其可能作为新的生物学标志物及治疗药物,为临床治疗提供新的思路。

线粒体转录因子A对梗阻性黄疸大鼠肝功能的保护作用

目的初步探讨线粒体转录因子A(mitochondrial transcription factor A,TFAM)在重组人肝再生增强因子(rhALR)对梗阻性黄疸大鼠肝功能保护过程中的作用。方法首先体外合成靶向TFAM的有效慢病毒载体,然后建立梗阻性黄疸大鼠动物模型,并通过门静脉将慢病毒注入大鼠肝组织进行靶向TFAM活体RNA干扰实验。然后通过RT-PCR和Western blot检测目的基因表达量的改变并观察大鼠肝脏病理改变、肝脏功能改变及rhALR保护作用的变化情况。结果体外靶向TFAM慢病毒载体构建成功。通过门静脉注入后能特异、有效的感染肝组织细胞。RT-PCR和Western blot检测结果显示进行活体RNAi的大鼠肝组织中TFAM的表达明显减弱;且这一组大鼠肝脏病理改变最为明显,肝功能损害最严重,rhALR的肝功能保护作用也随着消失。结论阻断目的基因TFAM的表达使得rhALR对梗阻性黄疸大鼠肝功能的保护作用消失;TFAM在rhALR保护梗阻性黄疸大鼠肝功能过程中具有重要作用。

人线粒体转录因子A的表达与前列腺癌细胞顺铂耐药性机制的研究

目的探讨人线粒体转录因子A(TFAM)的表达在前列腺癌非激素依赖型细胞系PC3中对顺铂耐药性的影响。方法应用Western blot检测PC3细胞与顺铂高耐受性细胞PCDP6中TFAM的表达。并应用小干扰RNA降低PC3细胞中TFAM表达水平,检测细胞对顺铂的耐受性变化,绘制耐药曲线,计算IC50。结果相比其母细胞PC3,顺铂高耐受性PCDP6细胞高表达TFAM。当用小干扰RNA降低TFAM表达后,PC3细胞对顺铂的敏感性增强,且TFAM的低表达可引起survivin的低表达。结论TFAM的表达促进PC3细胞对顺铂的耐受,TFAM能提高细胞耐药性很可能与TFAM调控survivin的表达有关。

线粒体转录因子A参与软骨细胞退变逆转的机制

目的初步探讨线粒体转录因子A(TFAM)参与软骨细胞退变逆转机制,以期阐明TFAM与骨关节炎发生、发展的关系。方法以含血清培养液培养分离的原代正常软骨细胞和骨关节炎(OA)软骨细胞,MTT检测细胞存活率,流式细胞仪检测细胞凋亡变化,并利用基因组学和定量PCR等技术分析膝关节OA患者、正常关节软骨细胞的线粒体DNA特征和TFAM表达的差异情况。结果 1MTT检测OA细胞组的增殖低于正常细胞组(P<0.01);2OA组细胞凋亡率为7.11%,而正常组为1.65%,IL-1β诱导后OA细胞凋亡率为35.13%,正常组有13.79%;3OA软骨细胞TFMA mRNA的表达量低于正常软骨细胞(P<0.05),且OA软骨细胞线粒体DNA的平均拷贝数显著降低(P<0.01);线性回归分析结果表明OA细胞和正常细胞中TFMA mRNA的表达量和线粒体DNA拷贝数之间均有相关性(P<0.05)。结论分离的原代OA软骨细胞符合软骨细胞退变,为其研究提供了较好的实验对象,其线粒体DNA拷贝数与调控其转录、复制的主要调节因子TFMA的表达有相关性。

血管紧张素Ⅱ对血管内皮细胞线粒体转录因子A表达的影响

目的探讨血管紧张素(Ang)Ⅱ对血管内皮细胞线粒体转录因子A(TFAM)表达及细胞功能的影响。方法将不同浓度的AngⅡ(1×10^(-7)~1×10^(-5)mol/L)与原代人脐静脉细胞(HUVECs)共孵育,在24 h用免疫印迹技术和RT-PCR分别检测TFAM的表达量;在12 h用流式细胞仪检测线粒体膜电位及细胞的凋亡率变化。结果 AngⅡ以浓度依赖的方式降低TFAM的表达量;随着AngⅡ浓度升高,线粒体膜电位降低水平、细胞凋亡率增加(P<0.01)。结论 AngⅡ降低HUVECs TFAM表达量及导致细胞损伤。

力竭运动后不同时相大鼠心肌线粒体转录因子A的变化

目的:探讨力竭运动后不同时相大鼠心肌线粒体转录因子A(mtTFA)表达的变化特点。方法:90只健康成年雄性SD大鼠,分为一次力竭游泳运动组(n=40)、2周反复力竭游泳运动组(n=40)及安静对照组(n=10),分别于力竭运动后0、6、12及24小时取材,应用免疫荧光技术和图像分析方法研究大鼠心肌mtTFA含量的变化。结果:在一次力竭和反复力竭运动后,大鼠心肌各部位mtTFA表达含量均显著低于对照组(P<0.01)。一次力竭运动后,大鼠心肌室间隔、右心室mtTFA含量在运动后12小时达到最低(P<0.01),左心室mtTFA含量在运动后24小时达到最低;反复力竭运动后,室间隔、右心室mtTFA含量在运动后12小时达到最低(P<0.01),而左心室mtTFA含量在运动后6小时达到最低。结论:一次力竭运动和反复力竭运动可导致mtTFA表达明显降低,直接影响心肌纤维线粒体的氧化能力和能量产生,可能是运动性心肌微损伤和心律失常发生的诱导因素和重要机制之一。此外,上述改变在运动后24小时出现不同程度的回升也提示急性大强度运动后心肌mtTFA的改变是可恢复性的,有别于病理性心肌损伤。

靶向线粒体转录因子A大鼠活体RNA干扰实验动物模型的建立

目的:在体外构建并筛选出靶向线粒体转录因子A(TFAM)的有效RNA干扰慢病毒载体,用于大鼠整体RNAi实验,观察其对肝组织中目的基因表达的干扰效果。方法:设计4条siRNA序列并合成双链DNAoligo,制备目的基因RNA干扰慢病毒载体,体外感染目的细胞,利用RT-PCR和Western blot的方法检测目的基因TFAM的表达情况,从而筛选出有效的干扰靶点。构建大鼠活体RNAi动物模型,观察大鼠肝脏中靶基因表达的变化情况。结果:酶切鉴定及测序结果均提示siRNA序列成功连接入载体中。RT-PCR结果提示3号靶点的干扰效率最高,达到了55%左右,Western blot也验证了其干扰的有效性。大鼠活体RNAi结果显示,肝脏中目的基因的表达也明显减少,这种表达减弱具有特异性和靶向性。结论:TFAM靶向RNA干扰慢病毒载体构建成功,能有效抑制目的细胞中线粒体转录因子A的表达。构建的慢病毒载体在大鼠活体内也具有良好的干扰效果。该研究为下一步利用此慢病毒载体进行活体RNA干扰打下了基础。

线粒体转录因子A与神经系统疾病关系的研究进展

线粒体转录因子A(TFAM)是由核基因编码的一种多功能的线粒体mtDNA蛋白,在线粒体拟核中与mtDNA结合,广泛参与mtDNA转录,复制和损失修复,维持线粒体的稳定。线粒体功能障碍是包括帕金森病、阿尔茨海默病在内的多种神经变性疾病的特点,TFAM基因突变和蛋白水平的变化在疾病中起重要作用本文总结了国内外学者针对TFAM及与其相关的神经系统疾病最新研究进展。

肺癌中线粒体转录因子A的表达及意义

目的探讨肺癌组织中线粒体转录因子A(mtTFA)的表达及意义。方法采用RT-PCR等方法 ,对肺癌及相应正常肺组织中mtTFA mRNA的表达进行检测和分析。结果肺癌组织mtTFA mRNA的平均表达量(mtTFA/β-actin)为3.029±1.177,而相应的正常肺组织平均表达量为2.917±0.963,前者虽略高于后者,但差异无统计学意义(P=0.221)。结论肺癌中mtTFA等线粒体DNA(mtDNA)转录、复制的调节因子的表达水平可能与mtDNA拷贝数的改变无关。

线粒体转录因子A对表皮干细胞生物学功能的调节作用

目的探讨下调线粒体转录因子A(mitochondrial transcription factor A,TFAM,也称为m TFA)对人表皮干细胞(epidermal stem cell,ESC)增殖、凋亡等的影响。方法将TFAM基因干扰慢病毒转染至ESC中,得到目标ESC为干扰组,并取对照病毒转染ESC作为对照组。对比分析两组中ESC的增殖与克隆成型率、凋亡以及端粒酶反转录酶表达水平等生物学特征的差异。结果两组比较,干扰组ESC克隆形成率及凋亡均显著高于对照组,而增殖率显著低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);在细胞端粒酶反转录酶水平测定中,两组均为阳性,但干扰组经定量分析,其平均光密度与阳性面积值均显著低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 TFAM基因的沉默可导致ESC体外增殖活性降低,促进其凋亡过程,通过增加克隆形成效率而利于维持干细胞特性,并可能进一步抑制创面的愈合。