人线粒体转录终止因子1(hMTERF1)蛋白的生物信息学分析

为了预测和分析人线粒体转录终止因子1（human mitochondrial transcription termination factor 1,hMTERF1）蛋白的结构与功能。采用生物信息学的方法对hMTERF1进行系统的分析与研究,包括hMTERF1的理化性质、跨膜区和信号肽、亚细胞定位、二级结构功能域、蛋白质的功能分类预测、多重序列比对与系统发育树构建、三级结构建模。结果表明：hMTERF1蛋白分子量为45.78 kD,等电点为9.49,不具有信号肽和跨膜区。该蛋白定位于细胞线粒体,N端1-57个氨基酸为前导肽序列。其二级结构主要为α螺旋和无规则卷曲,包含6个MTERF基序,三级结构显示结果与二级结构预测结果相符。蛋白质多重序列比对和聚类分析显示,hMTERF1蛋白与黑猩猩、大鼠、小鼠等哺乳动物的MTERF1蛋白具有高度同源性,在系统发育树上聚为一簇。hMTERF1的生物信息学分析为进一步探索hMTERF1蛋白的功能提供参考资料和理论依据。

基于Nrf2调控Pink1/Parkin介导的线粒体自噬在老年肌肉减少症骨骼肌纤维化中的作用及机制研究

目的探讨线粒体自噬在老年肌肉减少症模型小鼠中的作用,并进一步探讨其作用机制。方法选取13.5个月龄SPF级雄性C57BL/6J小鼠13只分为老龄鼠组(O组,n=6)、老龄鼠+核转录因子红系2相关因子2(Nrf2)激动剂组(O+SFN组,n=7),另3月龄SPF级雄性C57BL/6小鼠8只作为青年鼠组(Y组)。O组按体重0.1 mL/10 g给予0.1%DMSO溶液,每周3次,O+SFN组按体重0.1 mL/10 g给予1%SFN溶液,每周3次,Y组给予等体积的0.1%DMSO溶液,各组持续10周。干预10周后,检测各组小鼠的体重、腓肠肌/体重比、抓力、腓肠肌细胞活性氧水平、腓肠肌细胞线粒体膜电位和腓肠肌细胞线粒体DNA(mtDNA)拷贝数;天狼星红染色观察各组小鼠腓肠肌组织纤维化情况;蛋白质印迹法检测腓肠肌组织中纤维化相关蛋白collagen 1、collagen 3和fibronectin及自噬相关蛋白Nrf2、PINK1、Parkin、LC3、BNIP3和FUNDC1的相对表达。结果干预10周后,O组和O+SFN组小鼠体重均高于Y组,腓肠肌/体重比均显著低于Y组,差异均有统计学意义(P<0.05);O+SFN组小鼠的体重及腓肠肌/体重比值均显著高于O组,差异均有统计学意义(P<0.05)。干预10周后,O组和O+SFN组小鼠抓力均低于Y组,而O+SFN组小鼠抓力显著高于O组,差异均有统计学意义(P<0.05)。干预10周后,O组和O+SFN组小鼠的活性氧含量和线粒体膜电位均显著高于Y组,mtDNA拷贝数显著低于Y组,差异均有统计学意义(P<0.05);O+SFN组小鼠的活性氧含量和线粒体膜电位低于O组,mtDNA拷贝数高于O组,差异均有统计学意义(P<0.05)。天狼星红染色观察可见,O组和O+SFN组小鼠的胶原纤维的比例显著高于Y组,O+SFN组的胶原纤维比例低于O组。干预10周后,O组和O+SFN组小鼠腓肠肌组织中collagen 1、collagen 3和fibronectin蛋白的相对表达均显著高于Y组,而Nrf2、BNIP3、FUNDC1、PINK1和Parkin蛋白的相对表达均显著低于Y组,差异均有统计学意义(P<0.05);O+SFN组小鼠腓肠肌组织中collagen 1、collagen 3和fibronectin蛋白的相对表达均低于O组,而Nrf2、BNIP3、FUNDC1、PINK1和Parkin蛋白的相对表达均高于O组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论骨骼肌纤维化是老年肌肉减少症发生发展的重要机制之一,激活Nrf2可上调PINK1/Parkin信号通路而对线粒体自噬发挥保护作用,进而抑制骨骼肌纤维化,缓解肌肉减少症,可作为临床防治老年肌肉减少症的新思路和新切入点。

BRCA1和人线粒体转录终止因子3在非小细胞肺癌组织中的表达情况

目的探讨BRCA1和人线粒体转录终止因子3(hMTERF3)在非小细胞肺癌组织中的表达情况。方法选取70例非小细胞肺癌患者,术中收集癌组织标本以及癌旁组织标本。检测并比较癌组织与癌旁组织BRCA1、hMTERF3蛋白表达水平,以及不同病理特征患者的癌组织中BRCA1、hMTERF3蛋白表达水平。结果非小细胞肺癌癌组织中BRCA1、hMTERF3蛋白相对表达水平高于癌旁组织(均P<0.05)。侵及浆膜、肿瘤体积≥5 cm^(3)、病理分期为Ⅲ及Ⅳ期、有淋巴结转移、低分化的非小细胞肺癌患者BRCA1、hMTERF3蛋白相对表达水平分别高于未侵及浆膜、肿瘤体积<5 cm^(3)、病理分期为Ⅰ及Ⅱ期、无淋巴结转移、中或高分化的患者(P<0.05)。结论BRCA1和hMTERF3在非小细胞肺癌组织中呈异常高表达,且与病理参数具有一定相关性,两者或在非小细胞肺癌的发生和发展中发挥重要作用。

何氏养巢方通过ERβ/PCG1α/TFAM通路提高颗粒细胞线粒体生物发生以改善早发性卵巢功能不全

目的:探究何氏养巢方(简称“养巢方”)提高卵巢颗粒细胞线粒体功能的机制。方法:取36只6~8周龄C57BL/6J雌鼠随机分为空白对照组,模型对照组,养巢方小、中、大剂量组和阳性对照组。均予环磷酰胺90 mg/kg单次腹腔注射以建立原发性卵巢功能不全(POI)模型后,分组灌胃21 d后处死。另取6只6~8周龄C57BL/6J雌鼠造模后获取原代颗粒细胞,分为养巢方组、PHTPP(一种雌激素受体阻滞剂)组、养巢方+PHTPP组,分别予养巢方含药血清或PHTPP或同时给予两者干预培养24 h。分别采用苏木精-伊红(HE)染色观察卵巢组织病理学变化;荧光素酶法检测颗粒细胞腺苷三磷酸(ATP)水平;定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测线粒体DNA(mtDNA)的拷贝数;透射电镜观察线粒体结构变化;蛋白质印迹法检测雌激素受体β(ERβ)、过氧化物异酶体增殖物激活受体γ共激活因子1α(PGC1α)、线粒体转录因子A(TFAM)、超氧化物歧化酶2(SOD2)蛋白表达;qRT-PCR检测Erβ、Pgc1α、Tfam、Sod2 mRNA表达。结果:模型对照组卵巢组织次级及三级卵泡较少,养巢方各剂量组及阳性对照组次级及三级卵泡较多。与空白对照组比较,模型对照组颗粒细胞ATP和mtDNA水平均下降(均P<0.01),线粒体嵴消失或空泡化结构异常比例增加,ERβ、PGC1α、TFAM、SOD2蛋白及其mRNA表达均下降(均P<0.01)。养巢方中、大剂量组及阳性对照组颗粒细胞内ATP生成增多、mtDNA拷贝数增加(P<0.05或P<0.01);颗粒细胞内结构异常线粒体减少,ERβ、PGC1α、TFAM、SOD2蛋白及其mRNA表达均增加(P<0.05或P<0.01)。体外实验中,与PHTPP组比较,养巢方+PHTPP组线粒体结构正常比例更高,线粒体ATP含量增加(P<0.05或P<0.01),mtDNA拷贝数增加(P<0.05或P<0.01);ERβ、PGC1α、TFAM、SOD2蛋白及其mRNA表达均上升(P<0.05或P<0.01)。结论:养巢方可以通过ERβ/PGC1α/TFAM通路提高线粒体生物发生从而改善POI小鼠卵巢功能。

CCAT1靶向抑制miR-375-3p通过线粒体途径诱导的人口腔癌SAS细胞凋亡

目的:探究长链非编码RNA(lncRNA)结肠癌相关转录因子1(CCAT1)靶向miR-375-3p通过线粒体途径诱导人口腔癌SAS细胞凋亡的作用。方法:人口腔癌SAS细胞随机分为空白组、CCAT1下调组、CCAT1上调组、CCAT1下调对照组、CCAT1上调对照组、miR-375-3p下调组、miR-375-3p上调组、miR-375-3p下调对照组和miR-375-3p上调对照组。转染48 h后,流式细胞术检测细胞凋亡;RT-qPCR检测miR-375-3p表达、线粒体凋亡通路相关的基因半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶3(caspase-3)、半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶9(caspase-9)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)的mRNA表达;免疫印迹检测caspase-3、caspase-9、Bcl-2、Bax蛋白表达;双荧光素酶报告实验分析CCAT1与miR-375-3p的靶向关系。结果:与空白组和CCAT1下调对照组比较,CCAT1下调组细胞凋亡率、miR-375-3p表达、caspase-3、caspase-9、Bax mRNA及蛋白表达升高,Bcl-2 mRNA及蛋白表达降低;与空白组和CCAT1上调对照组比,CCAT1上调组细胞凋亡率、miR-375-3p表达、caspase-3、caspase-9、Bax mRNA及蛋白表达降低,Bcl-2 mRNA及蛋白表达升高;与空白组和miR-375-3p下调对照组比较,miR-375-3p下调组细胞凋亡率、miR-375-3p表达、caspase-3、caspase-9、Bax mRNA及蛋白表达降低,Bcl-2 mRNA及蛋白表达升高;与空白组和miR-375-3p上调对照组比较,miR-375-3p上调组细胞凋亡率、miR-375-3p表达、caspase-3、caspase-9、Bax mRNA及蛋白表达升高,Bcl-2 mRNA及蛋白表达降低。双荧光素酶实验结果提示CCAT1可靶向调控miR-375-3p。结论:CCAT1可抑制人口腔癌SAS细胞凋亡,推测是通过靶向抑制miR-375-3p的表达,调控线粒体凋亡通路相关基因及蛋白的表达来实现的。

基于生物信息学分析人类线粒体转录终止因子1基因启动子

目的线粒体转录终止因子1(mitchondrial transcription termination factor 1,MTERF1)编码蛋白质是调控线粒体基因表达和氧化磷酸化的重要因子。文中旨在分析人类MTERF1基因的转录调控序列、转录因子及其结合位点。方法采用进化足迹法,利用生物信息学在线软件对人类MTERF1基因5'端上游的启动子分布、Cp G岛、转录因子及其结合位点进行分析。结果人类MTERF1基因定位于7q21.2,基因全长7845 bp,含有4个外显子和3个内含子。基因上游5'端2500bp的核苷酸序列至少存在2个启动子,其中1878-2447 bp之间可能包含核心启动子。启动子区序列中存在1个长为812 bp的Cp G岛。人类和小鼠MTERF1同源基因存在26个共同的转录因子结合位点。结论生物信息学在线软件能预测人类MTERF1基因启动子和转录因子结合位点,提高了针对该基因启动子的研究效率。

昆明种小鼠线粒体转录终止因子1基因的组织表达谱分析

目的:探索Mterf1基因mRNA和蛋白质在昆明种小鼠大脑、心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、胰腺、骨骼肌、膀胱和卵巢共10种组织的表达情况。方法:采用Real-time RT-PCR检测Mterf1 mRNA在小鼠多个组织中的表达情况;采用Western Blot法检测Mterf1蛋白在小鼠多种组织中的表达情况。结果:Mterf1基因在昆明种小鼠大脑、心脏、骨骼肌和膀胱组织中表达量较高,其次是在肝脏、肾脏和脾脏组织,而在肺脏、胰腺和卵巢组织中表达量相对较低。结论:Mterf1基因在昆明种小鼠中的表达具有组织特异性,为后续研究Mterf1基因在小鼠体内的功能奠定基础。

卵巢癌中线粒体转录终止因子1的表达及其意义

目的:探讨人线粒体转录终止因子1(MTERF1)在卵巢癌中的表达及其在预后判断中的作用。方法:利用Oncomine数据库对比分析卵巢癌和正常卵巢组织中MTERF1基因表达水平;提取10例配对卵巢癌组织和正常卵巢上皮组织总RNA和蛋白质,real time RT-PCR检测MTERF1 mRNA在各组织中的表达,Western印迹检测MTERF1蛋白在各组织中的表达;利用Kaplan-Meier plotter数据库分析MTERF1表达对卵巢癌患者的预后价值。结果:Oncomine数据库中共收集了8个不同类型的研究结果,荟萃分析显示MTERF1在卵巢癌中表达增高,且差异具有统计学意义(P<0.05)。本研究10例卵巢癌及其配对的正常卵巢上皮组织中,有6例卵巢癌中MTERF1 mRNA和蛋白质表达水平增高。Kaplan-Meier plotter数据库分析显示,MTERF1 mRNA表达水平越高,早于2期的卵巢癌患者无进展生存期越短,预后越差(P<0.05);但卵巢癌患者的总生存期与MTERF1 mRNA表达水平无相关性(P>0.05)。结论:卵巢癌组织中MTERF1 mRNA和蛋白质表达升高;在早期卵巢癌患者中,MTERF1表达水平越高,预后越差,可作为预测卵巢癌患者预后的潜在分子标记物。

线粒体转录终止因子(mTERF)蛋白家族的研究进展

线粒体基因的表达调控与线粒体的功能密切相关。线粒体转录终止因子(mitochondrial transcription termination factors,mTERFs)具有与线粒体核酸结合的结构域,参与线粒体基因的复制、转录及翻译。由于线粒体基因与人类线粒体疾病密切相关,因此受到广泛关注。动物中mTERFs分为四类亚家族,均定位于线粒体,每类mTERF蛋白所含mTERF结构域的数量与位置不同,功能各异。相比动物,植物中的mTERF类蛋白的研究相对滞后,为多基因家族。已报导的mTERF蛋白参与植物的发育及胁迫响应,具有重要的生物功能,但仍有很多mTERF家族成员的功能及调控机制仍不清楚。目前有关植物mTERFs的研究,对探讨作物中mTERFs成员功能、提高作物抗性及产量均具有重要意义。

人线粒体转录终止因子2(MTERF2)在Caski宫颈癌细胞的表达和定位

目的构建人线粒体转录终止因子2(MTERF2)基因真核表达载体,并在人Caski宫颈癌细胞中过表达,观察其编码蛋白质在Caski细胞中的定位。方法从Caski细胞中提取总RNA,采用反转录PCR扩增人MTERF2基因可读框序列,将其重组于p3×FLAG-CMV-14载体中,利用PCR和DNA测序鉴定重组子正确性;并用脂质体法转染至Caski细胞,转染24、32、48 h,采用Western blot法检测MTERF2蛋白水平,通过免疫荧光细胞化学染色观察其亚细胞定位情况。结果经过PCR和DNA测序鉴定,人MTERF2基因可读框正确地插入到真核表达质粒中,大小为1158 bp,表达的蛋白相对分子质量(Mr)为44 000,与预计大小相符。转染p3×FLAG-MTERF2质粒的Caski细胞培养24 h,可检测到目的蛋白表达,该蛋白主要定位于线粒体中。结论在Caski细胞成功表达了MTERF2蛋白并证实其定位于线粒体。

LncRNA CBR3-AS1调节miR-448/TFAM轴对结直肠癌细胞恶性生物学行为的影响

目的 探讨长链非编码RNA(LncRNA)CBR3-AS1对结直肠癌(CRC)细胞恶性生物学行为的影响及其机制。方法 收集济南市第五人民医院2021年1月至2022年6月获取的40对CRC组织和邻近癌旁组织标本,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测人CRC组织、癌旁组织和CRC细胞系、正常结直肠上皮细胞中LncRNA CBR3-AS1、微小RNA-448(miR-448)及线粒体转录因子A(TFAM)mRNA表达。根据不同CRC细胞系中LncRNA CBR3-AS1的表达水平筛选后续实验使用的细胞系。验证miR-448与LncRNA CBR3-AS1、TFAM的靶向关系。在目标细胞中转染靶向LncRNA CBR3-AS1的小干扰RNA(si-CBR3-AS1)、miR-448抑制物(miR-448 inhibitor),采用qRT-PCR、蛋白免疫印迹法(Western blot)检测LncRNA CBR3-AS1、miR-448及TFAM mRNA和蛋白表达;采用CCK-8法、流式细胞术、划痕愈合实验和Transwell实验分别检测细胞活力、凋亡率、迁移及侵袭能力。结果 CRC组织和细胞中LncRNA CBR3-AS1及TFAM mRNA呈高表达,miR-448呈低表达,且HCT116细胞中LncRNA CBR3-AS1的表达最高,故选择HCT116细胞进行后续靶向验证和转染实验。经验证,HCT116细胞中miR-448与LncRNA CBR3-AS1、TFAM均存在靶向关系。转染si-CBR3-AS1可降低HCT116细胞中LncRNA CBR3-AS1及TFAM mRNA和蛋白表达水平,同时降低细胞活力、划痕愈合率、迁移细胞数、侵袭细胞数,升高miR-448表达水平及凋亡率;转染si-CBR3-AS1基础上转染miR-448 inhibitor可减弱干扰LncRNA CBR3-AS1表达对HCT116细胞的影响。结论 干扰LncRNA CBR3-AS1可抑制CRC细胞的恶性生物学行为,其机制可能与靶向miR-448/TFAM轴有关。

白藜芦醇介导SIRT1干预地塞米松诱导成骨细胞线粒体自噬的研究

目的研究白藜芦醇(RES)参与糖皮质激素诱导的成骨细胞线粒体自噬的作用机制。方法体外培养人成骨细胞hFob1.19,地塞米松(DEX)诱导细胞线粒体自噬,使用不同浓度的RES(10^(-8)~10^(-6)mol/L)处理成骨细胞5~120 min,CCK-8法检测成骨细胞的增殖,透射电镜检测成骨细胞内的自噬小体,酶联免疫吸附实验、实时荧光定量PCR和Western blotting分别检测成骨细胞内碱性磷酸酶(ALP)、caspase 3、转录沉默信息调节因子1(SIRT1)、细胞自噬标志蛋白(LC3和Beclin1)和细胞线粒体自噬标志蛋白(TOM20和Hsp60)的活性表达。结果DEX和RES作用成骨细胞2 h后,RES可明显减弱DEX对细胞增殖的抑制作用(P<0.05);透射电镜显示,DEX+RES组自噬小体明显少于DEX组(P<0.05);DEX可明显抑制成骨细胞内ALP活性,而RES明显改善了DEX对ALP蛋白活性的抑制作用(P<0.05);RES可导致成骨细胞内caspase 3的蛋白活性明显降低(P<0.05);RES以剂量依赖性和时间依赖性的方式增强成骨细胞中SIRT1的活性表达;RES单独作用成骨细胞,可显著抑制LC3和Beclin1 mRNA表达(P<0.05),并降低细胞内TOM20(线粒体自噬标记蛋白)和Hsp60(线粒体基质自噬标记蛋白)的蛋白活性;RES可部分抑制DEX对成骨细胞线粒体自噬的激活效应。结论RES通过上调SIRT1而增强成骨细胞的增殖活性,并抑制DEX诱导的成骨细胞线粒体自噬的发生。

线粒体转录终止因子蛋白家族的表达以及在MPTP/MPP^+诱导下的表达变化

目的探讨线粒体转录终止因子(MTERFs)蛋白家族在组织和细胞中的表达以及在神经毒素MPTP/MPP+诱导下的表达变化。方法取正常C57BL小黑鼠的脑、肝、肾组织,以及人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y、人心肌细胞HCM、人肝细胞L-02,检测MTERFs的蛋白表达情况;通过MPTP/MPP+构建帕金森病(PD)动物/细胞模型,检测MTERFs的蛋白表达变化情况。结果 MTERFs在小鼠脑中和SH-SY5Y细胞中蛋白表达水平较高;MPTP/MPP+诱导的PD模型中,MTERF3蛋白表达水平明显降低。结论在小鼠脑和SH-SY5Y细胞中,MTERFs表达较高;MPTP/MPP+诱导下MTERF3蛋白表达明显降低,影响了线粒体转录水平,这可能参与了帕金森病发生的过程。

低氧复合运动通过NO-ATF1通路上调大鼠骨骼肌线粒体解偶联蛋白3表达

背景:低氧复合运动可上调解偶联蛋白3的表达,提高骨骼肌线粒体对低氧的抵抗力,但其生物学效应及作用机制尚不清楚。目的:观察单纯低氧及低氧复合运动对骨骼肌线粒体力能学及解偶联蛋白3表达的影响,并探讨NO-ATF1信号通路在其中的生物学效应。方法:将60只SD大鼠随机分成常氧对照组、单纯低氧组、低氧复合运动训练组、低氧+L-NAME组和低氧复合运动训练+L-NAME组。低氧干预为常压低氧帐篷,模拟11.3%的氧体积分数;运动干预为低氧帐篷内跑台训练;L-NAME干预为饮用水中添加一氧化氮合酶抑制剂左旋硝基精氨酸甲酯。各种干预持续4周,硝酸还原酶法测定骨骼肌一氧化氮含量,荧光素酶发光法检测线粒体ATP合成活力,二氯荧光素法检测线粒体过氧化氢生成速率,实时荧光定量PCR法检测骨骼肌激活转录因子1和解偶联蛋白3 mRNA的表达,Western blot法检测骨骼肌磷酸化激活转录因子1和线粒体解偶联蛋白3蛋白的表达。结果与结论:低氧复合运动显著上调骨骼肌解偶联蛋白3的表达及线粒体ATP的合成活力,抑制线粒体过氧化氢的产生,同时增加骨骼肌一氧化氮含量及激活转录因子1磷酸化水平,左旋硝基精氨酸甲酯抑制了低氧复合运动对线粒体的保护效应。说明低氧复合运动可通过NO-ATF1途径上调解偶联蛋白3的表达提高骨骼肌线粒体对低氧的抵抗力。

TNFR2激活NF-κB信号通路调控线粒体融合蛋白OPA1在心力衰竭中的作用

目的:探讨肿瘤坏死因子受体(TNFR)2通过调节视神经萎缩蛋白1(OPA1)促进线粒体融合在慢性心力衰竭中可能的保护机制。方法:构建SiRNA靶向沉默TNFR1(TNFR1-KD)的心肌细胞H9c2。肿瘤坏死因子-α(TNF-α)(0.5 ng·ml-1)刺激TNFR1-KD心肌细胞H9c2和靶向沉默OPA1的TNFR1-KD心肌细胞H9c2,电镜下测定线粒体形态和数量,荧光素酶-荧光素法测定ATP酶活性。蛋白质印迹法测定PGC1α、OPA1、Mfn1、Mfn2、Drp1的蛋白表达水平;ELISA检测转移到细胞核内的p65蛋白、IL-1β和IL-6含量。结果:TNFR1-KD心肌细胞H9c2的TNFR1表达量在转染48 h最低。在TNFR1-KD心肌细胞H9c2,与安慰剂组比较,TNF-α刺激组的线粒体数量下降24%,平均线粒体面积增加28%,ATP酶活性增加35%,差异均具有统计学意义(均P<0.05)。TNF-α刺激组的OPA1蛋白表达水平明显升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。靶向沉默OPA1的TNFR1-KD心肌细胞H9c2组(OPA1-siRNA组)较空白对照组(NC-siRNA组)中的线粒体数量增加40%,平均线粒体面积下降32%,ATP酶活性下降25%,差异均具有统计学意义(均P<0.05)。在TNFR1-KD心肌细胞H9c2中,PDTC可显著抑制核转录因子κB(NF-κB)通路活化,细胞核内的NF-κB p65蛋白含量降低,IL-1β、IL-6表达下降,线粒体OPA1蛋白含量下降。结论:TNFR2激活NF-κB信号通路调控OPA1促进线粒体融合。

下调FoxM1通过激活JNK/线粒体通路增加人鼻咽癌细胞对紫杉醇的敏感性

目的探讨特异性小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)沉默转录因子叉头框M1(FoxM1)对人鼻咽癌HONE-1细胞增殖、凋亡、紫杉醇敏感性的影响及可能的分子机制。方法采用siRNA靶向沉默鼻咽癌HONE-1细胞FoxM1表达并通过RT-PCR、实时定量PCR、Western blot检测转染后FoxM1的表达水平。siRNA转染后细胞的增殖和对紫杉醇的敏感性采用MTT法检测,流式细胞仪检测细胞周期分布,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率。Western blot检测Ki67、CyclinE1、多药耐药基因1(multidrug resistance 1,MDR1)及c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)、p-JNK、c-Jun、p-c-Jun、凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2的表达水平。结果转染后FoxM1 mRNA及蛋白的表达均被下调(P<0.01)。siRNA转染组细胞增殖速率减缓(P<0.05),Ki67表达降低(P<0.05)。siRNA转染组G_1期细胞比例增加(P<0.01),S期比例减低(P<0.05),CyclinE1低表达(P<0.01)。同时,siRNA+紫杉醇组凋亡率明显高于阴性及空白对照+紫杉醇组(P<0.01)。siRNA转染组细胞MDR1水平下降(P<0.05),对紫杉醇的敏感性较两对照组明显增强(P<0.01)。siRNA+紫杉醇组与阴性对照+紫杉醇组相比p-JNK1、p-c-Jun、Bax表达上调(P<0.01),Bcl-2表达下调(P<0.01)。结论特异性siRNA沉默FoxM1表达可以影响JNK/线粒体通路活性,抑制鼻咽癌HONE-1细胞增殖,促进其凋亡,提高其对紫杉醇的敏感性。

线粒体转录复合物各因子质粒标准品的构建

目的:构建大鼠线粒体转录因子TFAM(A)、线粒体转录因子TFB1M(B1)、线粒体转录TFB2M(B2)及线粒体RNA聚合酶(POLRMT)的质粒标准品,为检测内耳细胞线粒体TFAM、TFB1M、TFB2M、POLRMT的mRNA表达水平做基础。方法:设计特异性引物和探针,提取大鼠内耳组织总mRNA逆转录成c DNA,PCR扩增、纯化目的片段,将纯化产物与p Zero Back/blunt载体重组,提取重组质粒,经测序鉴定后,用实时荧光绝对定量PCR建立标准曲线。结果:测序结果与各目的序列一致,获得良好的标准曲线(R2>0.99)。结论:成功构建了各目的基因的质粒标准品。

线粒体转录因子A与神经系统疾病关系的研究进展

线粒体转录因子A(TFAM)是由核基因编码的一种多功能的线粒体mtDNA蛋白,在线粒体拟核中与mtDNA结合,广泛参与mtDNA转录,复制和损失修复,维持线粒体的稳定。线粒体功能障碍是包括帕金森病、阿尔茨海默病在内的多种神经变性疾病的特点,TFAM基因突变和蛋白水平的变化在疾病中起重要作用本文总结了国内外学者针对TFAM及与其相关的神经系统疾病最新研究进展。

解偶联蛋白-2及缺氧诱导因子-1在肿瘤细胞中表达的意义

解偶联蛋白-2(uncoupling protein-2,UCP-2)是线粒体内膜上的一种蛋白,能降低线粒体膜电位,限制三磷酸腺苷(ATP)合成,参与转运丙酮酸,与能量代谢关系密切;同时,UCP-2能控制线粒体内活性氧簇(ROS)生成,与氧化应激、凋亡、肿瘤发生等过程也有密切联系。恶性肿瘤由于组织增生过快造成局部组织严重缺氧,但处于缺氧状态的肿瘤细胞仍能不断增殖和浸润,主要原因之一是缺氧引起肿瘤细胞一些基因和蛋白的表达发生改变,其中既有UCP-2的参与。有关研究结果证明,UCP-2在人结肠癌细胞中表达明显增加,且癌细胞的恶化程度与UCP-2的含量有正相关性。