三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2基因在食管癌中的表达及意义

目的探讨三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2(ATP-binding cassette transporer G2,ABCG2)基因在食管癌组织中的表达及其意义。方法采用RT-PCR方法检测44例原发性食管癌患者的癌组织、癌旁组织(距离癌2cm)及食管切缘正常黏膜(距离癌5cm以上)ABCG2的mRNA表达。结果ABCG2在食管癌原发灶组织中有较高程度的表达,其表达量为0.77±0.11,而正常食管黏膜中的表达量为0.66±0.12;其在食管癌中的表达显著高于正常黏膜(P<0.01)。ABCG2在低分化鳞癌中的表达显著高于中-高分化鳞癌(P<0.05)。食管癌中ABCG2在年龄和性别间表达无显著性差异(P>0.05)。结论ABCG2在食管癌组织中高表达可能在某种程度上参与了食管癌原发性耐药及化疗中多药耐药的形成。其可作为一种新的引起多药耐药的分子,指导临床上食管癌的化疗。

高、低表达三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2的人鼻咽癌耐药细胞生物学特性差异研究

目的探讨高表达与低表达三磷酸腺苷(ATP)结合转运蛋白G超家族成员2(ABCG2)的人多药耐药鼻咽癌CNE2/DDP细胞(简写作ABCG2High细胞、ABCG2Low细胞)的生物学差异,分析两种细胞的耐药特点。方法分离ABCG2High和ABCG2Low细胞,检测其体外克隆形成率并分析细胞周期。流式细胞术(FCM)检测两种细胞传代前及传至第5代时ABCG2阳性表达率的差异。RT-PCR检测耐药基因ABCG2、Bcl-2、MDR1、MRP、MGMT的mRNA表达差异。MTT法检测两种细胞在1～14d的吸光度,绘制生长曲线;检测两种细胞对氟尿嘧啶、顺铂、长春新碱、卡铂、表阿霉素、柔红霉素、紫杉醇、丝裂霉素等化疗药物耐药性的差异。结果ABCG2High和ABCG2Low细胞在7d内的克隆形成率分别为25.24%±1.18%和16.28%±1.11%。FCM分析显示,ABCG2High的S期细胞占41.5%,ABCG2Low的G1/M0期细胞占63.9%。FCM分离后,ABCG2的表达率在ABCG2High细胞为98%,在ABCG2Low细胞为2%;两种细胞传至第5代,ABCG2在前者的表达率降低为75%,在后者升高至20%。RT-PCR显示,ABCG2mRNA在ABCG2High细胞中的表达明显高于ABCG2Low细胞,其他耐药基因在两种细胞中的表达无差异。生长曲线显示,ABCG2High细胞早期生长速度较ABCG2Low细胞快,后期生长速度逐渐减慢。耐药谱分析表明,ABCG2High细胞对8种抗肿瘤药物的IC50值高于ABCG2Low细胞两倍以上,两者差异有统计学意义(P<0.05)。结论ABCG2High细胞是一种快周期细胞,而ABCG2Low细胞为慢周期细胞,前者更具有多药耐药的特点,可用于ABCG2介导的鼻咽癌细胞非经典多药耐药的研究。

苹果酸舒尼替尼诱导高表达三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2的耐药鼻咽癌细胞高表达NKG2D配体

目的:探讨苹果酸舒尼替尼(sunitinib malate,SU11248)对高表达三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2(ATP-binding cassette superfamily G member2,ABCG2)耐药鼻咽癌细胞CNE2/DDP(ABCG2highCNE2/DDP)表达NKG2D配体的诱导作用。方法:利用免疫磁珠技术分离ABCG2highCNE2/DDP细胞及同种异体反应性自然杀伤细胞(allo-reactive natural kill cell,Allo-NK),流式细胞技术检测分离后细胞的纯度及苹果酸舒尼替尼处理前后ABCG2highCNE2/DDP细胞NKG2D配体表达率,LDH释放测定法检测苹果酸舒尼替尼处理前后ABCG2highCNE2/DDP细胞对Allo-NK细胞的杀伤敏感性。结果:ABCG2highCNE2/DDP细胞分离后ABCG2的表达率为(91.40±2.32)%,Allo-NK细胞分选后CD3-CD16+CD56+细胞的纯度达90%以上。经苹果酸舒尼替尼处理后,ABCG2highCNE2/DDP细胞的NKG2D配体MICA、MICB、ULBP1、ULBP2、ULBP3的表达率由药物处理之前的(2.92±0.33)%、(4.27±0.33)%、(5.80±0.62)%、(11.10±3.15)%、(7.75±1.14)%分别上升到(89.12±4.56)%、(66.10±2.22)%、(67.56±4.19)%、(69.37±8.83)%、(63.28±3.31)%。在效靶比为10∶1、20∶1时,苹果酸舒尼替尼处理前后Allo-NK细胞对ABCG2highCNE2/DDP细胞的杀伤率分别为(15.32±13.86)%、(27.26±6.81)%及(41.12±4.12)%、(57.25±2.37)%,处理后的杀伤率有明显的提高(F=15.58,P=0.000)。结论:苹果酸舒尼替尼通过诱导高表达NKG2D配体(MICA/B、ULBP1-3),使ABCG2highCNE2/DDP细胞对Allo-NK细胞的杀伤敏感性明显增强。

索拉非尼对高表达三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2的鼻咽癌细胞杀伤敏感性的影响的研究

目的探讨索拉非尼提高高表达三磷酸腺苷(ATP)结合转运蛋白G超家族成员2(ABCG2)的人耐药鼻咽癌CNE2/DDP细胞(简写作ABCG2High细胞)对同种异体反应性自然杀伤(Allo-NK)细胞的杀伤敏感性及其相关机制。方法利用免疫磁珠技术分离ABCG2High CNE2/DDP和Allo-NK细胞,并设3个实验组:①处理组(经索拉非尼10ng/ml共孵育4h的ABCG2High CNE2/DDP细胞);②未处理组(常规培养的ABCG2High CNE2/DDP细胞);③对照组(常规培养的K562细胞)。流式细胞技术检测处理组和未处理组细胞的ABCG2表达率和5种NKG2D配体(MICA、MICB、ULBP1、ULBP2、ULBP3)的表达率。乳酸脱氢酶(LDH)释放测定法检测Allo-NK细胞对各实验组细胞的杀伤率。结果分离后的CNE2/DDP细胞的ABCG2表达率为91.40%±2.32%,分选出的CD3-CD16+CD56+(Allo-NK)细胞纯度大于90%。未处理组的ABCG2High CNE2/DDP细胞的NKG2D配体MICA、MICB、ULBP1、ULBP2、ULBP3表达率分别为2.92%±0.33%、4.27%±0.33%、5.80%±0.62%、11.10%±3.15%、7.75%±1.14%,而处理组明显升高(分别为10.38%±1.23%、10.68%±1.26%、11.62%±1.22%、43.24%±4.42%、11.91%±0.88%;P<0.05)。在效靶比为10∶1、20∶1时,Allo-NK细胞对未处理组靶细胞的杀伤率为15.32%±1.34%、27.26%±6.81%,而对处理组靶细胞杀伤率为27.75%±4.12%、43.17%±5.92%,两组相比差异有统计学意义(P<0.01)。结论索拉非尼通过诱导肿瘤细胞高表达NKG2D配体,使其对Allo-NK细胞的杀伤敏感性增强。

三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2在肺癌A549和SPC-A-1细胞株中的表达及其意义

目的探讨三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2（ABCG2）在肺癌细胞株A549和SPC—A-1中的表达及其意义。方法应用半定量逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）检测两种肺癌细胞株中该基因的表达，应用流式细胞仪检测该蛋白的表达。结果ABCG2基因与蛋白在肺腺癌细胞株A549和SPC—A-1中均有表达，且A549的表达高于SPC—A-1。结论ABCG2可能参与肺癌耐药，可能也与肺癌的发生、发展有密切相关。

丁酸钠对高蛋白饲料诱导雏鹅痛风及肠道尿酸转运体蛋白表达的影响

该试验旨在研究丁酸钠对高蛋白饮食雏鹅尿酸代谢、肠道尿酸转运体蛋白表达及痛风发生的影响。选取1日龄扬州鹅300只,随机分成5组,每组6个重复,每个重复10只,分别为正常饲粮对照组(NDC组,粗蛋白质16.5%)、高蛋白组(HPC组,粗蛋白质24%)、低剂量丁酸钠组(LSB组,按0.025%添加于高蛋白饲粮)、中剂量丁酸钠组(MSB组,按0.05%添加于高蛋白饲粮)和高剂量丁酸钠组(HSB组,按0.1%添加于高蛋白饲粮)。试验期18 d。结果表明:(1)HSB组雏鹅采食量从10日龄起,MSB组从14日龄起,分别显著高于HPC组(P<0.05);HSB组雏鹅体重从14日龄起高于HPC组,MSB组体重在18日龄时高于HPC组(P<0.05)。(2)14日龄时,HPC组、LSB组、MSB组及HSB组血清尿酸(UA)水平均超过阈值,表现为高尿酸血症,HPC组UA水平最高,HSB组最低;试验期间,HPC组痛风发病率(38%)高于HSB组(18.3%)。(3)与HPC组比较,HSB组回肠中三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2(ABCG2)基因mRNA表达升高,蛋白表达降低(P<0.05),MSB组及HSB组回肠中溶质载体家族2成员9(SLC2A9)基因mRNA及蛋白表达均降低(P<0.05)。由此可见,丁酸钠可以改善高蛋白饲粮饮食雏鹅的血清尿酸代谢,减少痛风发生,提高生产性能,其作用机制可能与调节回肠尿酸转运体蛋白ABCG2和SLC2A9表达有关。

三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2基因在胃癌组织中的表达及意义

目的探讨三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2（ABCG2）在胃癌组织中的表达及意义。方法采用免疫组织化学（免疫组化）方法（IHC染色）检测ABCG2在45例手术切除胃癌组织和30例正常胃黏膜中的表达情况：应用RT—PCR和实时定量PCR检测30例胃癌患者的癌组织及胃切缘正常胃黏膜ABCG2的mRNA表达。结果ABCG2在胃癌原发灶组织中有较高程度的表达．其阳性率为62．2％；而30例正常胃黏膜中的阳性表达率为6．7％；两者比较P〈0.05。ABCG2在低分化腺癌中的表达高于中-高分化腺癌（P〈0.05）；胃癌组织中ABCG2mRNA水平的表达明显高于胃正常黏膜（P〈0.05）．与免疫组化结果一致。结论ABCG2在胃癌组织中过度表达．其可能在某种程度上参与了胃癌的发生和发展，可以作为胃癌肿瘤干细胞研究的重要分子。

三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2和β-微管蛋白Ⅲ基因在乳腺癌组织中的表达及其临床意义

目的检测三磷酸腺苷（ATP）结合转运蛋白G超家族成员2（ABCG2）和β-微管蛋白Ⅲ（TUBB3）基因在乳腺癌组织中的表达，探讨ABCG2和TUBB3基因与乳腺癌病理特征的关系。方法196例浸润性乳腺癌组织标本及同标本正常乳腺组织，采用逆转录．聚合酶链反应（RT-PCR）检测ABCG2和TUBB3基因的表达，分析基因表达与临床病理学特征的关系。结果196例浸润性乳腺癌组织中ABCG2基因的表达率为58．7％，电泳条带灰度值为0．685±0．126，癌旁正常乳腺组织中的表达率为30．1％，基因电泳条带灰度值为0．271±0．143，差异有统计学意义（P〈0．05）。TUBB3基因的表达率为67．9％，电泳条带灰度值为0，793±0．115，癌旁正常乳腺组织中的表达率为23．0％，基因电泳条带灰度值为0．463β-β-0．127，差异有统计学意义（P〈0．05）。ABCG2基因在肿瘤组织的表达与雌激素受体（ER）、孕激素受体（PR）有关（P〈0．05），与人类表皮生长因子受体-2（Her-2）、临床分期、脉管癌栓、腋淋巴结转移、肿瘤大小、细胞核增殖抗原（Ki-67）等无明显相关（P〉0．05）。TUBB3基因在肿瘤组织的表达与腋淋巴结转移、脉管癌栓、肿瘤大小、组织学分级、临床分期、Ki-67、Her-2有关（P〈0．05），与ER、PR等无相关（P〉0．05）。结论ABCG2、TUBB3基因的异常表达可能在乳腺癌耐药、发生、发展中发挥作用。

细胞色素P450 3A4~* 1G与腺苷三磷酸结合转运蛋白G超家族成员2基因多态性对羟氯喹血药浓度的影响

目的探讨系统性红斑狼疮(SLE)患者体内细胞色素P450(CYP)450 3A4与腺苷三磷酸结合转运蛋白G超家族成员2(ABCG2)基因多态性对羟氯喹(HCQ)血药浓度的影响。方法收集46例系统性红斑狼疮患者羟氯喹全血药物浓度测定数据,通过Sanger法测定患者的CYP3A4~*1G(rs2242480)与ABCG2(rs2231142)基因型,分析每个基因的多态性对羟氯喹血药浓度的影响。结果患者CYP3A4~*1G各基因型组中,野生纯合子(~*1/~*1)组、突变杂合子(~*1/~*1G)组、突变纯合子(~*1G/~*1G)组的羟氯喹血药浓度分别为(807.2±455.9),(705.4±331.9)和(229.5±89.8)ng·mL^(-1),依次降低。GG组和GA组较AA组的羟氯喹血药浓度差异均有统计学意义(均P<0.05)。ABCG2基因的野生纯合子(GG)组、突变杂合子(GT)组和突变纯合子(TT)组的羟氯喹血药浓度分别为(732.2±424.4),(764.5±371.9)和(271.0±148.5)ng·mL^(-1),各基因型组之间的羟氯喹血药浓度差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论 CYP3A4~*1G等位基因突变可使羟氯喹血药浓度降低,而ABCG2等位基因突变对羟氯喹的血药浓度无明显影响。

CD133、CD34、ABCG2蛋白表达对肺癌患者术后复发转移的预测价值

目的 探讨CD133、CD34、三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2(ABCG2)蛋白表达对肺癌患者术后复发转移的预测价值。方法 选取行肺癌根治术患者90例,根据术后随访期间是否发生复发转移分为复发组(n=34例)和未复发组(n=56例),收集各NSCLC患者的年龄、性别、病理分级等临床资料。实验室检测患者肺癌组织中CD133、CD34、ABCG2蛋白表达,比较不同组肺癌组织中CD133、CD34、ABCG2蛋白表达,并分析其对肺癌术后复发转移的预测价值。结果 复发组患者CD133、CD34、ABCG2蛋白阳性表达率均高于未复发组(P<0.05)。CD133、CD34、ABCG2蛋白表达与患者年龄、性别、吸烟史、病理类型、TNM分期、肿瘤直径无显著相关性(P>0.05),与细胞分化存在显著相关性(P<0.05)。根据受试者工作特征(ROC)曲线分析可知,CD133、CD34、ABCG2蛋白表达预测NSCLC患者术后复发转移的AUC分别为0.619、0.645、0.628(P<0.05),联合检测的AUC为0.733(P<0.05),高于CD133、CD34、ABCG2蛋白单独检测(P<0.05)。结论 CD133、CD34、ABCG2蛋白表达对肺癌患者术后复发转移均有一定的预测价值,且联合检测的预测价值更高。

ATP结合转运蛋白G超家族成员2在急性白血病中的表达及意义

目的:通过检测ATP结合转运蛋白G超家族成员2(ABCG2)在急性白血病中的表达,探讨其在急性白血病的发病机制中可能的作用。方法:采集我院急性白血病患者72例和非恶性血液病患者的骨髓液10例,用逆转录聚合酶连反应法测定ABCG2基因在急性白血病中的表达情况。结果:ABCG2在急性白血病中的表达明显升高,明显高于对照组,2者之间的表达差异有统计学意义(P<0.05)。复发组高于初治组,2者之间的表达差异有统计学意义(P<0.05),初治组各组别之间表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论:ABCG2可能参与了急性白血病的耐药机制。

乙醛脱氢酶1和ATP结合膜转运蛋白超家族G成员2在非小细胞肺癌中的表达及其临床意义

目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)组织中乙醛脱氢酶1(ALDH1)和ATP结合膜转运蛋白超家族G成员2(ABCG2)的表达水平及其与临床病理特征和预后的关系。方法选取山东省泰山医院2016年1月至2018年11月行手术治疗的82例NSCLC患者的组织标本,采用免疫组织化学法检测术后新鲜癌组织及癌旁组织中ALDH1、ABCG2的表达水平。采用χ^2检验分析ALDH1、ABCG2表达与患者临床病理特征的关系,使用Pearson法分析ALDH1和ABCG2的相关性,应用Kaplan-Meier和log-rank检验分析ALDH1、ABCG2表达与患者总生存(OS)的关系,采用Cox比例风险模型分析OS的影响因素。结果NSCLC组织中ALDH1、ABCG2阳性表达率高于癌旁组织,差异均有统计学意义[60.98%(50/82)比12.19%(10/82),51.22%(42/82)比3.66%(3/82),χ^2值分别为42.051、46.582,均P<0.01]。NSCLC组织中ALDH1与ABCG2表达呈正相关(r=0.451,P=0.014)。TNM分期Ⅱ~Ⅲ期患者ALDH1、ABCG2阳性表达率均高于Ⅰ期患者[70.00%(35/50)比46.88%(15/32),60.00%(30/50)比37.50%(12/32),均P<0.05],淋巴结转移患者ALDH1、ABCG2阳性表达率均高于未转移患者[75.00%(27/36)比50.00%(23/46),66.67%(24/36)比39.13%(18/46),P<0.05]。中位随访时间22.5个月,共2例患者失访,中位OS时间25.4个月,ALDH1阳性患者OS较阴性患者差(χ^2=5.124,P=0.031),ABCG2阳性患者OS较阴性患者差(χ^2=6.969,P=0.008)。多因素Cox分析显示,年龄(OR=1.241,95%CI 1.021~2.535,P=0.045)、淋巴结转移(OR=1.521,95%CI 1.102~4.281,P=0.012)、TNM分期(OR=2.104,95%CI 1.289~6.150,P=0.018)、ALDH1(OR=2.435,95%CI 1.214~8.654,P=0.001)、ABCG2(OR=1.503,95%CI 1.148~5.696,P=0.021)是NSCLC患者OS的独立影响因素。结论NSCLC组织中ALDH1、ABCG2表达水平增高,且与淋巴结转移、TNM分期相关,ALDH1、ABCG2阳性者OS率较低,二者可能成为NSCLC的预后标志物。

乳腺癌耐药蛋白在消化道肿瘤中的作用研究

乳腺癌耐药蛋白属于三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2(ATP-binding cassette superfamily G member 2, ABCG2),其作为药物排出泵,可以降低细胞内药物的浓度,保护细胞免受有毒物质的侵害.它保护正常细胞,但同时使肿瘤细胞对各种抗肿瘤药物产生耐药性,影响化疗效果.本文综述ABCG2的生理功能、表达影响因素以及与消化道肿瘤的关系与作用,为消化道肿瘤的临床基础研究提供参考.

ABCG2蛋白的表达与胃癌易感性、预后及化疗敏感性的关系研究

目的探讨ABCG2蛋白的表达与胃癌易感性、预后及化疗敏感性的关系。方法选取2015年8月至2017年5月收治的80例胃癌患者为研究对象。采用酶联免疫吸附法(ELISA)法测定胃癌患者癌组织及癌旁正常组织中ABCG2蛋白表达水平。分析胃癌患者癌组织中ABCG2蛋白表达水平与胃癌患者性别比、年龄等一般信息及肿瘤直径、分化程度、癌细胞浸润深度、淋巴结转移之间的相关性。测定并比较胃癌患者化疗前后ABCG2蛋白表达水平,并根据化疗效果,将80例胃癌患者分为完全缓解(CR)、部分缓解(PR)、病情稳定(SD)、疾病进展(PD)组,比较4组患者ABCG2蛋白表达水平。采用多因素Logistic回归分析胃癌患者预后情况的影响因素。结果胃癌患者胃癌组织中ABCG2蛋白表达水平明显高于癌旁正常组织,差异有统计学意义(P <0. 05)。不同性别患者间、不同年龄段、不同浸润深度患者间ABCG2蛋白表达水平差异无统计学意义(P> 0. 05)。肿瘤直径≥5 cm者ABCG2蛋白表达水平明显高于肿瘤直径<5 cm者,低分化者ABCG2蛋白表达水平明显高于中高分化受试者、中分化者高于高分化者,发生淋巴结转移者ABCG2蛋白表达水平明显高于无淋巴结转移者,上述差异均有统计学意义(P <0. 05)。胃癌患者化疗后癌组织中ABCG2蛋白表达水平为明显低于化疗前,化疗效果越差的患者ABCG2蛋白表达水平越高,且差异有统计学意义(P <0. 05)。多因素Logistic回归分析结果显示,肿瘤直径、分化程度、淋巴结转移、ABCG2蛋白表达水平与胃癌患者预后显著相关(P <0. 05)。结论 ABCG2蛋白的表达水平与胃癌的发生、发展及化疗效果密切相关。

ABCG2在奥希替尼耐药的非小细胞肺癌中的作用及机制研究

目的:探索ABCG2在非小细胞肺癌细胞对奥希替尼耐药中的作用机制及逆转其耐药的方法。方法:选取A549、NCI-H1299、NCI-H1975细胞并诱导其对奥希替尼产生耐药;通过慢病毒转染使A549、NCI-H1299产生T790M基因突变,并诱导其对奥希替尼耐药;通过CCK-8法检测细胞对奥希替尼的IC_(50)值;通过高效液相色谱法检测细胞内奥希替尼浓度;Western-blot检测细胞内EGFR、p-EGFR、ABCG2、AKT、p-AKT、PI3K、GSK、p-ERK和ERK等蛋白表达;基因测序检测18、19、20和21号外显子是否发生突变;通过质粒转染调控肺癌细胞中ABCG2的表达并检测细胞对奥希替尼的敏感性变化。结果:通过CCK-8法检测,验证耐药系数大于10,证明耐药细胞构建成功。奥希替尼耐药细胞中ABCG2表达增加,且细胞内奥希替尼浓度降低。使用过表达质粒上调了肺癌细胞中ABCG2表达后,发现肺癌细胞对奥希替尼的敏感性明显降低;相反,下调耐药细胞中ABCG2表达后细胞对奥希替尼的敏感性恢复。抑制MAPK通路及PI3K/AKT通路能明显抑制ABCG2的表达。结论:ABCG2表达增高是导致非小细胞肺癌对奥希替尼耐药的重要原因之一;ABCG2的表达与MAPK及PI3K/AKT信号通路的激活相关。

SLC1A5协同TM4SF1通过mTOR信号通路调控食管鳞癌细胞迁移

目的探讨氨基酸转运载体溶质载体家族1成员5(SLC1A5)在食管鳞癌(ESCC)中的表达及其与临床病理特征的相关性,以及SLC1A5对ESCC细胞迁移的影响及潜在分子机制。方法采用TNM plot在线数据库分析SLC1A5基因在ESCC组织和正常组织中的表达情况。通过实时定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测ESCC组织和癌旁组织中SLC1A5 mRNA表达情况;采用免疫组化(IHC)法检测SLC1A5蛋白表达情况,并分析其与患者临床病理资料的相关性。分别构建SLC1A5过表达(SLC1A5-OE组)、四跨膜蛋白超家族成员1过表达(TM4SF1-OE组)、SLC1A5和TM4SF1共同过表达的Eca109细胞。采用细胞增殖试验、Transwell实验检测Eca109细胞的增殖、迁移和侵袭能力。通过免疫共沉淀(IP)实验证实SLC1A5和TM4SF1的相互作用;采用蛋白质免疫印迹(WB)法检测哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路相关蛋白的表达水平。结果TNM plot数据库分析显示,ESCC组织中SLC1A5基因表达水平高于正常组织,差异有统计学意义(P<0.05)。ESCC组织中SLC1A5 mRNA表达高于成对的癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.01)。IHC结果显示,SLC1A5蛋白在癌组织中高表达,并且与临床分期(P=0.036)、淋巴结转移(P=0.029)显著相关。细胞增殖实验结果显示,SLC1A5-OE组和对照细胞(Con组)增殖能力比较,差异无统计学意义(P>0.05)。Transwell实验结果显示,与Con组比较,SLC1A5-OE组细胞迁移及侵袭能力增强,差异有统计学意义(P<0.01)。IP结果表明,SLC1A5与TM4SF1存在相互作用。WB结果显示,相对于SLC1A5-OE组或TM4SF1-OE组,p-mTOR、p-S6蛋白表达水平在SLC1A5和TM4SF1共同过表达的细胞中最高。Transwell实验证实,共同过表达SLC1A5和TM4SF1的ESCC细胞迁移能力最强。结论ESCC中SLC1A5呈高表达,且与患者临床分期、淋巴结转移显著相关,SLC1A5可能通过与TM4SF1相互作用,激活mTOR信号通路,进而促进ESCC细胞迁移。

MCFP慢病毒干涉载体及HepG2稳定细胞系的构建

目的:研究线粒体转运蛋白质超家族新成员SLC25A40(MCFP)RNA干扰(RNAi)慢病毒表达载体对人肝癌细胞系HepG2细胞中MCFP基因的沉默效果.方法:通过RNAi序列设计软件进行MCFP干涉片段设计,筛选出MCFP基因的RNAi有效靶序列,进一步合成靶序列的OligoDNA,构建pSiCoR-MCFP慢病毒载体并包装产生慢病毒干涉毒液.运用病毒感染HepG2细胞获得稳定干涉MCFP的细胞株,利用PCR和Westernblot方法检测稳定细胞株中MCFP的干涉效果.结果:成功构建具有MCFP干涉效果的慢病毒干涉载体并获得了稳定干涉MCFP及对照的HepG2细胞株.收集慢病毒上清,流式测定干涉病毒滴度为1.45×1010pfu/L,对照病毒滴度为1.78×1010pfu/L.PCR和Westernblot实验均证实干涉MCFP后,HepG2细胞株中MCFP蛋白表达水平明显降低(P<0.001).结论:成功构建具有MCFP干涉效果的慢病毒干涉载体及稳定干涉MCFP的HepG2细胞株.

苦参碱通过诱导NKG2D配体高表达增强NK细胞对ABCG2high耐药鼻咽癌细胞杀伤活性

目的探讨苦参碱提高ABCG2High[三磷酸腺苷(ATP)结合转运蛋白G超家族成员2]耐药鼻咽癌细胞对Allo-NK细胞杀伤敏感性的机制。方法利用免疫磁珠技术分离ABCG2HighCNE2/DDP细胞及Allo-NK细胞,流式细胞技术检测分离后细胞纯度及经苦参碱处理前后靶细胞NKG2D配体表达率,LDH释放测定法检测经苦参碱处理前后ABCG2HighCNE2/DDP细胞对Allo-NK细胞的杀伤敏感性。结果ABCG2HighCNE2/DDP细胞分离后ABCG2表达率为(91.40±2.32)%,分选后NK细胞CD3-CD16+CD56+细胞的纯度达90%以上,经苦参碱处理之后靶细胞MICA、MICB、ULBP1、ULBP2、ULBP3表达率,由药物处理之前的(2.92±0.33)%、(4.27±0.33)%、(5.80±0.62)%、(11.10±3.15)%、(7.75±1.14)%分别上升到(11.30±0.89)%、(14.29±2.61)%、(12.56±1.06)%、(43.24±4.43)%、(12.77±1.06)%。在效靶比为10:1、20:1,Allo-NK细胞对苦参碱处理前后ABCG2HighCNE2/DDP细胞的杀伤率分别为(15.32±1.34)%、(27.26±6.81)%及(28.53±1.37)%、(42.72±2.80)%。处理前后杀伤率有显著性差异(F=29.05,P=0.000)。结论苦参碱通过诱导肿瘤细胞高表达NKG2D配体(MICA/B、ULBP1-3),使肿瘤细胞对Allo-NK细胞的杀伤敏感性增强。

ABCG2食管癌耐药细胞系Eca109/ABCG2的建立

目的探讨腺苷三磷酸结合转运蛋白G超家族成员2(ABCG2)在介导食管癌多药耐药中的作用。方法扩增ABCG2基因,与pcDNA3.1载体连接,构建pcDNA3.1-ABCG2重组质粒,转染Eca109细胞后用G418筛选稳定转染细胞。采用流式细胞术检测细胞内阿霉素的含量,评价细胞对药物的外排作用。MTT法检测阿霉素对Eca109/ABCG2、Eca109/pcDNA3.1、Eca109细胞生长的抑制作用,并计算半数抑制浓度(IC50)和细胞的耐药指数。采用Western blotting和RT-PCR法检测细胞中ABCG2蛋白及mRNA的表达量。结果成功建立转染ABCG2基因的Eca109/ABCG2细胞。Eca109/ABCG2细胞中ABCG2的mRNA和蛋白表达量升高。阿霉素对Eca109/ABCG2、Eca109/pcDNA3.1、Eca109细胞的IC50值分别为18.61±3.94、4.18±0.14、4.69±0.88μg/ml。Eca109/AB-CG2细胞对阿霉素的耐药指数为3.97,且外排阿霉素的作用增强。结论Eca109/ABCG2细胞具有ABCG2的耐药表型,能够稳定表达ABCG2蛋白,可作为研究ABCG2介导的多药耐药相关机制的细胞模型。

苦参碱对高表达ABCG2人耐药鼻咽癌细胞NKG2D配体表达的诱导作用

目的：探讨苦参碱对高表达三磷酸腺苷（ATP）结合转运蛋白G超家族成员2（ABCG2）人耐药鼻咽癌细胞CNE2／DDP（简写作ABCG_2H^High CNE2／DDP）NKG2D配体表达的诱导作用及其对NK细胞杀伤敏感性的机制。方法：利用免疫磁珠技术分离ABCG_2^High CNE2／DDP细胞及NK细胞，流式细胞技术检测分离后细胞纯度及经苦参碱处理前后靶细胞NKG2D配体表达率，LDH释放测定法检测经苦参碱处理前后ABCG_2^High CNE2／DDP细胞对NK细胞的杀伤敏感性。结果：ABCG_2^High CNE2／DDP细胞分离后ABCG2表达率为（91．40±2．32）％，分选后NK细胞CD3^-CD16^＋CD56^＋细胞的纯度达90％以上，经苦参碱处理之后靶细胞MICA、MICB、ULBP1、ULBP2、ULBP3表达率，由药物处理之前的（2．92±0．33）％、（4．27±0．33）％、（5．80±0．62）％、（11．10±3．15）％、（7．75±1．14）％分别上升到（11．30±0．89）％、（14．29±2．61）％、（12．56±1．06）％、（43．24±4．43）％、（12．77±1．06）％。在效靶比为10：1、20：1时，NK细胞对苦参碱处理前后ABCG^2^High CNE2／DDP细胞的杀伤率分别为（15.32±1．34）％、（27．26±6．81）％及（28．53±1．37）％、（42．72±2．80）％。处理前后杀伤率有显著性差异（F=29．05，P=0．000）。结论：苦参碱通过诱导肿瘤细胞高表达NKG2D配体（MICA/B、ULBP1-3），使肿瘤细胞对NK细胞的杀伤敏感性增强。