曼氏迭宫绦虫线粒体载体蛋白结构和功能的生物信息学分析

目的应用生物信息学技术预测曼氏迭宫绦虫线粒体载体蛋白超家族的结构和功能,为进一步研究曼氏迭宫绦虫的蛋白质提供理论依据。方法将测得的曼氏迭宫绦虫成虫EST序列用ORF finder获取开放读码框,Blast进行分析其结构域。应用分析工具Protparam、InterProScan、protscale、SignalP-3.0、PSORTⅡ、BepiPred、TMHMM、VectorNTI Suite 9软件包、Phyre2分别进行该蛋白质的基本性质、结构域、疏水性、信号肽、亚细胞定位、抗原表位、跨膜区及空间结构的预测及分析。结果 Blast预测该蛋白质为线粒体载体蛋白超家族,保守功能域为线粒体二羧酸载体,含294个氨基酸残基,理论分子量为32132.2Da。与曼氏血吸虫进化地位最接近;有1个信号肽位点和6个潜在的抗原表位。结论曼氏迭宫绦虫线粒体二羧酸载体能够介导苹果酸、琥珀酸等二羧酸的转运,使其跨越线粒体膜参与三羧酸循环,为虫体自身提供能量,可能是潜在的疫苗候选分子及药物作用靶点。

牛心线粒体ADP/ATP载体蛋白的分离及在扩张性心肌病人中自身抗体的检测

目的 建立一种检测ADP/ATP载体蛋白自身抗体的方法。方法 以牛心为材料,通过羟基磷灰石柱层析,凝胶过滤层析,快速分离纯化出ADP/ATP载体蛋白。并以其做为包被抗原,利用间接ELISA法检测自身抗体 结果 经SDS-PAGE和Western blot鉴定,蛋白纯度及特异性均良好。并且在心肌病组的阳性检出率高于正常人组。结论 ADP/ATP载体蛋白可作为一种被检测的标记物。

线粒体丙酮酸载体蛋白2 T细胞因子4及细胞周期相关激酶在卵巢癌患者中的表达和意义

目的探讨线粒体丙酮酸载体蛋白2(MPC2)、T细胞因子4(TCF4)、细胞周期相关激酶(CCRK)在卵巢癌中的表达和意义。方法选取2018年5月—2021年5月于宁波大学附属人民医院接受手术治疗的卵巢癌患者85例及卵巢良性肿瘤患者30例为研究对象。取卵巢癌患者手术切除的癌组织及卵巢良性肿瘤患者手术切除的肿瘤组织标本进行免疫组化染色,Western blot法检测MPC2、TCF4及CCRK表达,对比不同病理特征卵巢癌患者MPC2、TCF4及CCRK相对表达量。结果卵巢癌组织中MPC2表达低于卵巢良性肿瘤组织,TCF4、CCRK表达高于卵巢良性肿瘤组织(P<0.05)。不同年龄、病理类型及不良孕产史卵巢癌患者MPC2、TCF4、CCRK表达比较差异无统计学意义(P>0.05)。肿瘤直径>3 cm患者MPC2表达低于肿瘤直径≤3 cm患者,TCF4、CCRK表达高于肿瘤直径≤3 cm患者(P<0.05);Ⅲ+Ⅳ期患者MPC2表达低于Ⅰ+Ⅱ期患者,TCF4、CCRK表达高于Ⅰ+Ⅱ期患者(P<0.05);有远处转移、有腹水患者MPC2表达低于无远处转移、无腹水患者,TCF4、CCRK表达高于无远处转移、无腹水患者(P<0.05);中、低分化患者MPC2表达低于高分化患者,TCF4、CCRK表达高于高分化患者;低分化患者MPC2表达低于中分化患者,TCF4、CCRK表达高于中分化患者(P<0.05)。卵巢癌组织中MPC2、TCF4表达呈负相关;MPC2、CCRK表达呈负相关;TCF4、CCRK表达呈正相关。结论卵巢癌组织中MPC2、TCF4、CCRK表达异常,三者表达异常情况与卵巢癌组织大小、分期情况、远处转移、腹水情况及分化情况有关,且三者表达之间具有相关性,三者表达变化在卵巢癌发展过程中具有重要意义。

香蕉枯萎病菌Fow1基因的克隆及序列分析

为了解Fow1基因在尖镰刀菌古巴专化型侵染香蕉过程中的作用,及其与尖镰刀菌古巴专化型生理小种1号和生理小种4号之间的致病力差异的关系,采用PCR和RT-PCR方法扩增了2个生理小种的Fow1基因,并对扩增产物进行了克隆测序及相似序列搜索和比对,还对基因编码的蛋白进行了结构预测和功能分析。研究结果表明2个生理小种Fow1基因开放阅读框均为957bp,编码318个氨基酸,基因序列和氨基酸序列差异小,而且两个生理小种Fow1基因所编码的蛋白均具有酵母线粒体载体蛋白典型的结构特征,推测Fow1基因可能为香蕉枯萎病菌在香蕉组织中定殖所必需。从Fow1基因序列及其编码蛋白的氨基酸序列看,2个生理小种致病力的差异与Fow1基因并无明显对应关系,这为进一步研究Fow1基因功能奠定了基础。

溶质载体家族成员SLC25A39基因促进乳腺癌细胞线粒体分裂

目的 构建带Flag标签的人溶质载体家族成员蛋白SLC25A39基因的真核表达载体,在获得FlagSLC25A39融合蛋白表达后,研究SLC25A39表达对人乳腺癌细胞线粒体稳态的影响。方法 以人乳腺文库为模板采用PCR技术扩增出人SLC25A39的编码区序列,双酶切后将其插入到带Flag标签的pcDNA3.0载体上,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,菌液PCR鉴定阳性的克隆再进行质粒提取,测序正确后将重组质粒与空载体分别转染人乳腺癌细胞ZR75-1。Western印迹鉴定SLC25A39目的基因的表达;Mitotracker对乳腺癌细胞的线粒体进行染色,共聚焦显微镜对线粒体进行观察;Western印迹检测线粒体融合蛋白1(Mfn1)、线粒体分裂蛋白1(Fis1)的表达变化。结果双酶切鉴定表明,Flag-SLC25A39真核表达载体构建成功;Western印迹验证SLC25A39基因表达成功;激光共聚焦显微镜下观察发现SLC25A39过表达的乳腺癌ZR75-1细胞分裂的线粒体较多;Western印迹证实SLC25A39基因过表达后线粒体分裂蛋白Fis1表达增高,线粒体融合蛋白Mfn1表达减弱。结论 成功构建带Flag标签的SLC25A39基因真核表达载体,该基因可促进人乳腺癌细胞的线粒体分裂,有望成为靶向线粒体治疗乳腺癌的潜在新靶点。

卵巢癌中MPC2的表达及其生物学功能

目的:检测线粒体丙酮酸载体蛋白2(mitochondrial pyruvate carrier 2,MPC2)在卵巢癌组织中的表达,并分析MPC2在卵巢癌进展过程中可能的生物学功能。方法:利用http://kmplot.com/analysis/数据库分析卵巢癌组织中MPC2 mRNA表达水平与患者生存预后的关系,收集天津医科大学肿瘤医院2009年至2011年137例卵巢癌组织,采用免疫组织化学方法测定MPC2在卵巢癌组织中的蛋白表达水平,采用SPSS 16.0软件统计分析MPC2蛋白表达水平与卵巢癌患者年龄、临床分期、病理分级、腹水、有无远处转移等临床病理指标之间的关系,分析MPC2蛋白表达水平与患者生存预后的关系。构建MPC2过表达细胞,观察MPC2对细胞生物学功能的影响作用。结果:MPC2 mRNA与卵巢癌患者的总生存期(ovall survival,OS)和无进展生存期(progression free survival,PFS)均存在显著的相关性,MPC2 mRNA低表达的患者预后较差。在卵巢癌组织中MPC2的蛋白表达水平与临床分期、腹水和远处转移有关(P<0.05),MPC2低表达的患者临床分期较高、有腹水产生、出现远处转移,MPC2表达与患者生存预后显著相关,MPC2低表达的患者预后较差(P<0.01)。MPC2过表达可以显著抑制细胞的增殖和迁移能力。结论:MPC2与卵巢癌的恶性进展密切相关,MPC2低表达的卵巢癌患者预后较差,且MPC2可显著抑制卵巢癌细胞的增殖能力,提示MPC2有望成为卵巢癌治疗的潜在靶点。

MCFP敲除小鼠肝脏线粒体功能异常

目的研究线粒体载体家族蛋白(MCFP)基因敲除对小鼠肝脏线粒体功能的影响。方法利用CRISP/Cas9技术建立MCFP基因敲除小鼠模型,并检测小鼠体质量、脏器系数、血生化以及糖代谢情况。分离小鼠原代肝实质细胞检测线粒体膜电位。提取肝脏线粒体,检测三磷酸腺苷(ATP)、活性氧(ROS)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)水平,利用非变性凝胶电泳偶联凝胶内酶活染色,检测线粒体呼吸链复合体活性。结果与同窝对照小鼠相比,MCFP敲除小鼠生理指标无明显差异,但线粒体膜电位及ATP水平降低,呼吸链复合体活性下降、ROS升高、SOD活性下降、MDA含量增加。结论MCFP基因敲除造成肝脏线粒体功能异常,提示MCFP在线粒体抗氧化损伤及合成ATP过程中发挥重要调控作用。